应用Cre-loxP系统构建伪狂犬病病毒gE/TK双缺失株

为了构建无报告基因的猪伪狂犬病病毒(PRV)gE/TK双缺失株,以PRV-JSZ株为亲本毒株,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因,先构建出带有loxP位点的rPRV-gE-/GFP,通过Cre重组酶处理后,获得剔除EG-FP的gE单缺失株rPRV-gE-;再以rPRV-gE-为母本,以相同方法构建gE/TK双缺失株rPRV-gE-/TK-。荧光检测和PCR结果显示成功构建了gE单缺失株和gE/TK双缺失株;病毒生长曲线测定可见rPRV-gE-在PK15细胞上的增殖速度与野生株相似,而rPRV-gE-/TK-较为缓慢;rPRV-gE-/TK-对小鼠的半数致死量大于1×105 TCID50,显著高于rPRV-gE-和野生株;缺失株免疫小鼠强毒攻击后能提供80%的保护。这些结果表明以Cre/loxP系统可重复使用构建伪狂犬病病毒多基因缺失株,为研制伪狂犬病病毒基因缺失苗和载体疫苗提供了快速筛选的技术平台。

卵巢移植对雄性受体鼠精子及生殖能力的影响

将1日龄小鼠卵巢移植入成年受体雄鼠肾囊下,分别于移植后21d(A组)和28d(B组),回收卵巢移植体和卵母细胞,采集附睾尾精子,并对睾丸及精子进行形态学检测,计算畸形精子数.移植受体雄鼠的繁殖能力将依据与雌鼠合笼交配后的窝产活仔记录进行评价.结果表明,卵巢移植体生长并有卵泡发育,A、B组回收卵母细胞数组间无显著差异(P>0.05);移植组不同时期卵巢移植体对雄鼠睾丸及精子形态无明显影响,其畸形率与对照组(正常雄鼠)相比差异不显著(P>0.05);移植受体雄鼠与母鼠配种的窝产活仔数与对照组无显著差异(P>0.05).初步证实在卵巢异性移植构建雌、雄性腺同体的生理环境中,卵巢移植体对受体雄鼠精子及生殖能力无明显影响.