NOD8抑制人胰腺癌细胞自噬及凋亡对其自噬作用的影响

目的:探讨NOD8(也称NLRP10或PYNOD)是否能抑制胰腺癌细胞发生自噬及其可能机制,并研究凋亡对NOD8调控自噬的影响。方法:用JetPRIME阳离子聚合物将空质粒pEGFP-C2和重组质粒pEGFP-NOD8分别转染入胰腺癌Panc-1细胞,并设立空白对照组,48 h后应用Western blot检测NOD8蛋白、自噬相关蛋白(beclin-1和LC3-Ⅱ)以及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白(Akt、p-Akt、mTOR和p-mTOR)的表达;并采用免疫荧光染色法观察细胞LC3斑点的数量。此外,用caspase抑制剂Z-VAD-FMK作用于过表达NOD8的Panc-1细胞后,Western blot检测beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白的表达水平;免疫荧光染色法观察细胞LC3斑点数量。结果:pEGFP-NOD8组细胞NOD8蛋白表达明显高于对照组和pEGFP-C2组(P<0.01)。与对照组和pEGFP-C2组相比,pEGFP-NOD8组细胞beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达及细胞LC3斑点数量显著降低;并且pEGFP-NOD8组细胞p-Akt及p-mTOR蛋白表达量显著上升(P<0.01),而AKT和mTOR蛋白表达无明显差异。与pEGFP-NOD8组相比,pEGFP-NOD8+Z-VAD-FMK组细胞beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达水平及LC3斑点数量显著高于pEGFP-NOD8组。结论:NOD8可抑制Panc-1细胞自噬,其机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR通路有关;凋亡可增强NOD8对自噬的抑制作用。

过表达Rip2对人胰腺癌细胞Panc-1凋亡的影响

目的:观察受体相互作用蛋白2(Rip2)对人胰腺癌细胞Panc-1凋亡的影响。方法:采用Jet PRIME试剂分别将pEGFP-C2和pEGFP-Rip2质粒转染入Panc-1细胞,实验分为对照组、pEGFP-C2组和pEGFP-Rip2组。转染后培养细胞48 h,采用流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞Rip2水平及凋亡相关蛋白Bax、胞浆细胞色素c(Cyt-c)和Bcl-2蛋白表达;比色法检测细胞caspase-3的活性。结果:转染pEGFP-Rip2细胞Rip2蛋白表达明显增加。流式细胞术检测表明,p EGFP-Rip2组的细胞凋亡率明显高于对照组和pEGFP-C2组。与对照组和pEGFP-C2组相比,pEGFP-Rip2组的Bax和胞浆Cyt-c蛋白表达明显升高,而Bcl-2蛋白水平则显著降低。并且,pEGFP-Rip2组细胞caspase-3活性明显高于对照组和pEGFP-C2组。结论:过表达Rip2能诱导Panc-1细胞凋亡,其作用机制可能与Rip2上调Bax以及胞浆Cyt-c蛋白表达,下调Bcl-2蛋白水平,增加caspase-3活性,从而激活内源性凋亡途径有关。

在人类癌细胞中丙烯醛优先损害核仁并引发核糖体应激和细胞凋亡

丙烯醛（acrolein）是一种高效的细胞毒性和DNA损伤诱导物,在环境中普遍存在并在烟草烟雾中含量丰富。丙烯醛也是抗癌药物环磷酰胺和异环磷酰胺的一种活性细胞毒性代谢物。丙烯醛发挥其抗癌活性和细胞毒性的机制尚不清楚。Wang等发现,丙烯醛在具有不同p53活性的人类癌细胞中诱导细胞毒性和细胞死亡。丙烯醛优先结合核仁核糖体DNA（ribosomal DNA,rDNA）以形成丙烯醛-脱氧鸟苷加合物,并诱导对rDNA和核糖体RNA（ribosomal RNA,rRNA）的氧化损伤。

Metaxin 1磷酸化在TNFα诱导的细胞死亡过程中控制Bak的激活

促凋亡蛋白Bak参与凋亡（细胞死亡程序）的执行阶段. Bak基本上是在线粒体内,并且在凋亡的早期经历构象变化后在线粒体中与膜完全整合,随后导致促凋亡线粒体蛋白的释放. 目前我们对Bak激活涉及的＂搭档＂（ partner ）和机制知之甚少. Petit等近来已发现,在休眠和濒死细胞中, Bak被并入2 型电压依赖性阴离子通道（ voltage-dependent anionic channel of type 2, VDAC2）/Metaxin 1（Mtx1）/Metaxin 2（Mtx2）多蛋白复合体中. 他们进一步发现,诱导凋亡后,Bak从与Mtx2和VDAC2的结合转移到与Mtx1更紧密的结合;这一＂搭档＂的变化受c-Abl对Mtx1的酪氨酸磷酸化所控制.

miR-300通过靶向p53和apaf1调节人肺癌细胞放射敏感性

微小RNA（microRNA,miR）在介导细胞对电离辐射（ionizing radiation,IR）的敏感性中起关键作用。既往研究表明,miR-300参与了IR或化疗药物的细胞反应。然而,miR-300在人肺癌中是否能调节外源遗传毒性应激引起的DNA损伤反应及其潜在的机制还不得而知。He等检测了经IR处理的肺癌细胞中miR-300的表达,并观察miR-300对IR诱导的DNA损伤修复、

恋爱兵法

曾几何时,男士中以能"钓"到若干个妹子为"有本事"。无须讳言,有时看见长得稀糟的同类项也挽着一个漂亮妹子逛街,你们心里一定蛮不舒服。看别的情人相见总是不愉快的,没有欣赏,只有挑剔,只能含酸以"横眉冷对粉黛。

函授招生“简易笑容法”

总纲:笑容是脸部肌肉外松内紧眉心展开嘴角弯弯往上提。法期:矜持的笑是眼对鼻鼻对嘴三点一线干巴儿还要优美地抬起;轻蔑的笑是嘴形左低右高或左高右低鼻孔还得学放屁;爱戴的笑是颈往下缩肩往上举五官摆圆方显无限之敬意;恭敬的笑则是耳往上耸眉往下压皱纹一律排整齐;注意事项:皮笑肉也笑是犯大忌;皮笑肉笑心也笑是犯大忌中的大忌。成绩考核:皮笑肉不笑评为绝技;皮笑肉笑心不笑则评为绝技中之绝技。

我不潇洒

时常羡慕别人的潇洒,像飘逸的春风,像欢跳的山泉,像依依的拂柳,像亭亭的荷伞,潇洒的表情,潇洒的举止,潇洒的风度,潇洒的言谈。然而,邯郸学步地半潇洒了几回却总觉别扭,东施不可效颦,我不会潇洒。曾遇一个正值潇洒年龄的潇洒姑娘,青春的长发潇洒成一道倾泻的瀑布,我努力潇洒地跟她谈,结果仍一塌糊涂——她潇洒地转身而去,我不潇洒。想那潇洒的Mr与Miss,穿的是牛仔幸子光夫情侣衫,戴的是麦克蛤蟆戒指西铁城,玩的则是舞厅镭射台球卡拉OK,食有生猛海鲜,喝有路易十四,行有夏利公爵,而我,乌纱孔方,一无所有,我潇洒不起,我只能拒绝潇洒。

Rip2诱导人胰腺癌细胞自噬及其机制研究

目的:研究受体相互作用蛋白2(Rip2)是否诱导人胰腺癌细胞株Panc-1发生自噬及其作用机制。方法:用jet PRIME转染试剂将空质粒pEGFP-C2和重组质粒pEGFP-Rip2分别转染入Panc-1细胞,不做处理的细胞为对照组。转染后培养细胞48 h,采用Western blot检测Rip2、自噬相关蛋白[beclin-1和微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)]及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白的表达;透射电子显微镜观察自噬体的数量。结果:转染pEGFP-Rip2的细胞Rip2蛋白表达显著增加。与对照组和pEGFP-C2组相比,pEGFP-Rip2组细胞的beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著升高(均P<0.01);在透射电子显微镜下观察发现,pEGFP-Rip2组细胞内自噬体的数量明显多于对照组和pEGFP-C2组。pEGFP-Rip2组细胞的p-Akt和p-mTOR蛋白水平明显低于对照组和pEGFP-C2组(均P<0.01),而总Akt和mTOR的蛋白水平变化不明显。结论:过表达Rip2可诱导Panc-1细胞发生自噬,其作用机制可能与Rip2抑制PI3K/Akt/mTOR通路的活化有关。