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人隐孢子虫RT-PCR-ELISA检测方法的建立
被引量:
6
1
作者
徐前明
李国清
+5 位作者
叶亦见
梁详解
高振勇
岳彩玲
程家林
朱海波
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期150-153,共4页
目的建立一种高度敏感和特异的人隐孢子虫的RT-PCR-ELISA检测方法。方法根据人隐孢子虫与其他隐孢子虫粘附蛋白p23基因的多重比对,设计一对引物(其中p1引物带有生物素标记)用来扩增含高变区目的片段;采用RT-PCR方法扩增目的片段,扩增产...
目的建立一种高度敏感和特异的人隐孢子虫的RT-PCR-ELISA检测方法。方法根据人隐孢子虫与其他隐孢子虫粘附蛋白p23基因的多重比对,设计一对引物(其中p1引物带有生物素标记)用来扩增含高变区目的片段;采用RT-PCR方法扩增目的片段,扩增产物与探针引物进行液相杂交,将杂交产物与微孔板上包被的链霉亲和素结合,再与辣根过氧化酶标记的抗地高辛抗体反应。用所建立的方法对22份临床样本进行检测,并与常规检测方法进行比较。结果所建立的RT-PCR-ELISA检测方法具有高特异性和敏感性,比常规的PCR方法灵敏度提高了100(0.08:8ng)左右。临床检测结果显示,该方法的检出率高达86%(19/22),而RT-PCR、蔗糖漂浮法和抗酸染色法的检出率仅为27%(6/22)、27%(6/22)和50%(11/22)。结论本试验成功建立了人隐孢子虫的RT-PCR-ELISA检测方法,检出率比常规检测方法高。
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关键词
人隐孢子虫
PCR—ELISA
RT-PCR
检测
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职称材料
鸽蛔虫ITS rDNA的克隆与序列分析
被引量:
3
2
作者
李金平
张浩吉
+4 位作者
梁详解
蒲文珺
李高强
郭建超
李国清
《湖北农业科学》
北大核心
2012年第18期4138-4140,共3页
以采自广东省佛山市的鸽蛔虫(Ascaridia columbae)为研究对象,利用保守引物BD1和BD2扩增鸽蛔虫基因组DNA的ITS rDNA片段,对扩增产物进行克隆和序列测定。结果成功扩增出大小为1045bp的ITS rDNA序列。获得的鸽蛔虫的ITS rDNA序列(AC001、...
以采自广东省佛山市的鸽蛔虫(Ascaridia columbae)为研究对象,利用保守引物BD1和BD2扩增鸽蛔虫基因组DNA的ITS rDNA片段,对扩增产物进行克隆和序列测定。结果成功扩增出大小为1045bp的ITS rDNA序列。获得的鸽蛔虫的ITS rDNA序列(AC001、AC002)的5.8S rDNA与GenBank收录的鸡蛔虫5.8S rDNA序列(GenBank登录号为AJ001508)相似性分别为95.5%和94.3%,而与澳大利亚鸽蛔虫5.8 S rDNA序列(GenBank登录号为AJ001509)相似性分别为96.8%和95.5%。将获得的序列与蛔目不同科的代表性蛔虫的5.8SrDNA序列进行比对和系统进化分析,结果表明鸽蛔虫与鸡蛔虫处于同一进化分支上,也表明ITS rDNA是蛔虫分子鉴定的有效遗传标记,这对蛔虫分子分类学及分子流行病学的进一步研究打下了基础。
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关键词
鸽蛔虫(Ascaridia
columbae)
ITS
RDNA
序列分析
系统进化分析
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职称材料
猴源人隐孢子虫的分离与鉴定
被引量:
1
3
作者
徐前明
程家林
+4 位作者
李国清
叶亦见
梁详解
岳彩玲
高振勇
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期186-189,共4页
为了解感染不同灵长类动物的隐孢子虫种类以及与感染人的人隐孢子虫(C.hominis)之间的遗传差异,本研究采用形态学和分子生物学方法对猴源隐孢子虫进行分离和鉴定。利用常规方法分离猴粪便中的隐孢子虫卵囊,通过改良抗酸染色和荧光显微...
为了解感染不同灵长类动物的隐孢子虫种类以及与感染人的人隐孢子虫(C.hominis)之间的遗传差异,本研究采用形态学和分子生物学方法对猴源隐孢子虫进行分离和鉴定。利用常规方法分离猴粪便中的隐孢子虫卵囊,通过改良抗酸染色和荧光显微镜观察对其进行形态学鉴定;并采用PCR方法扩增其卵囊壁蛋白(COWP)基因和18SrRNA基因,扩增产物克隆至pMD-18-T载体中,对阳性克隆进行测序并作进化树分析。结果表明:抗酸染色和荧光检查结果与所报道的人隐孢子虫的结果一致。PCR扩增产物经电泳检测,明显地出现554bp和370bp大小的片段,与预期结果一致;两种基因的序列分析结果显示该猴源隐孢子虫与C.hominis的相似性均为100%。由此可认为本次分离的隐孢子虫为C.hominis。
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关键词
猴
人隐孢子虫
鉴定
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职称材料
题名
人隐孢子虫RT-PCR-ELISA检测方法的建立
被引量:
6
1
作者
徐前明
李国清
叶亦见
梁详解
高振勇
岳彩玲
程家林
朱海波
机构
华南农业大学兽医学院
安徽农业大学动物科技学院
中国科学院广州生物医药与健康研究院
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期150-153,共4页
基金
广东省科技计划项目(2006B20801006)
国家自然科学基金项目(30671577)联合资助
文摘
目的建立一种高度敏感和特异的人隐孢子虫的RT-PCR-ELISA检测方法。方法根据人隐孢子虫与其他隐孢子虫粘附蛋白p23基因的多重比对,设计一对引物(其中p1引物带有生物素标记)用来扩增含高变区目的片段;采用RT-PCR方法扩增目的片段,扩增产物与探针引物进行液相杂交,将杂交产物与微孔板上包被的链霉亲和素结合,再与辣根过氧化酶标记的抗地高辛抗体反应。用所建立的方法对22份临床样本进行检测,并与常规检测方法进行比较。结果所建立的RT-PCR-ELISA检测方法具有高特异性和敏感性,比常规的PCR方法灵敏度提高了100(0.08:8ng)左右。临床检测结果显示,该方法的检出率高达86%(19/22),而RT-PCR、蔗糖漂浮法和抗酸染色法的检出率仅为27%(6/22)、27%(6/22)和50%(11/22)。结论本试验成功建立了人隐孢子虫的RT-PCR-ELISA检测方法,检出率比常规检测方法高。
关键词
人隐孢子虫
PCR—ELISA
RT-PCR
检测
Keywords
Cryptosporidium hominis
ELISA
RT-PCR
detection
分类号
R382.3 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
鸽蛔虫ITS rDNA的克隆与序列分析
被引量:
3
2
作者
李金平
张浩吉
梁详解
蒲文珺
李高强
郭建超
李国清
机构
华南农业大学兽医学院
佛山科学技术学院
出处
《湖北农业科学》
北大核心
2012年第18期4138-4140,共3页
基金
广东省自然科学基金项目(10152800001000007)
文摘
以采自广东省佛山市的鸽蛔虫(Ascaridia columbae)为研究对象,利用保守引物BD1和BD2扩增鸽蛔虫基因组DNA的ITS rDNA片段,对扩增产物进行克隆和序列测定。结果成功扩增出大小为1045bp的ITS rDNA序列。获得的鸽蛔虫的ITS rDNA序列(AC001、AC002)的5.8S rDNA与GenBank收录的鸡蛔虫5.8S rDNA序列(GenBank登录号为AJ001508)相似性分别为95.5%和94.3%,而与澳大利亚鸽蛔虫5.8 S rDNA序列(GenBank登录号为AJ001509)相似性分别为96.8%和95.5%。将获得的序列与蛔目不同科的代表性蛔虫的5.8SrDNA序列进行比对和系统进化分析,结果表明鸽蛔虫与鸡蛔虫处于同一进化分支上,也表明ITS rDNA是蛔虫分子鉴定的有效遗传标记,这对蛔虫分子分类学及分子流行病学的进一步研究打下了基础。
关键词
鸽蛔虫(Ascaridia
columbae)
ITS
RDNA
序列分析
系统进化分析
Keywords
Ascaridia columbae
ITS rDNA
sequence analysis
phylogenetic analysis
分类号
S852 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
猴源人隐孢子虫的分离与鉴定
被引量:
1
3
作者
徐前明
程家林
李国清
叶亦见
梁详解
岳彩玲
高振勇
机构
华南农业大学兽医学院
中国科学院广州生物医药与健康研究院
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期186-189,共4页
基金
广东省科技计划项目(2006B20801006)
国家自然科学基金(30671577)
文摘
为了解感染不同灵长类动物的隐孢子虫种类以及与感染人的人隐孢子虫(C.hominis)之间的遗传差异,本研究采用形态学和分子生物学方法对猴源隐孢子虫进行分离和鉴定。利用常规方法分离猴粪便中的隐孢子虫卵囊,通过改良抗酸染色和荧光显微镜观察对其进行形态学鉴定;并采用PCR方法扩增其卵囊壁蛋白(COWP)基因和18SrRNA基因,扩增产物克隆至pMD-18-T载体中,对阳性克隆进行测序并作进化树分析。结果表明:抗酸染色和荧光检查结果与所报道的人隐孢子虫的结果一致。PCR扩增产物经电泳检测,明显地出现554bp和370bp大小的片段,与预期结果一致;两种基因的序列分析结果显示该猴源隐孢子虫与C.hominis的相似性均为100%。由此可认为本次分离的隐孢子虫为C.hominis。
关键词
猴
人隐孢子虫
鉴定
Keywords
Rhesus
Cryptosporidium hominis
Identification
分类号
S852.7 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人隐孢子虫RT-PCR-ELISA检测方法的建立
徐前明
李国清
叶亦见
梁详解
高振勇
岳彩玲
程家林
朱海波
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
6
下载PDF
职称材料
2
鸽蛔虫ITS rDNA的克隆与序列分析
李金平
张浩吉
梁详解
蒲文珺
李高强
郭建超
李国清
《湖北农业科学》
北大核心
2012
3
下载PDF
职称材料
3
猴源人隐孢子虫的分离与鉴定
徐前明
程家林
李国清
叶亦见
梁详解
岳彩玲
高振勇
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
下载PDF
职称材料
已选择
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