FITC标记重组灵芝免疫调节蛋白(rLz-8)在NB4细胞中的动态定位

实验发现,重组灵芝免疫调节蛋白(rLz-8)可直接杀伤人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4.利用异硫氰酸荧光素(FITC)标记rLz-8,其相关的活性实验结果和晶体结构分析都表明,FITC没有影响rLz-8已知生物学功能.通过激光共聚焦显微镜观察FITC-rLz-8在NB4细胞内的动态过程发现,FITC-rLz-8可识别细胞膜上的受体,并可进入细胞质,并最终富集在细胞核区域内.Annexin V-FITC双染检测结果显示,rLz-8对NB4细胞杀伤作用的可能机制是对NB4细胞凋亡的诱导作用,在一定浓度范围内,剂量与凋亡诱导率成正相关.因此rLz-8能够诱导肿瘤细胞NB4发生凋亡的亚细胞学机制可定位在细胞核上.

三七总黄酮对病毒性心肌炎模型治疗作用的药效学研究

目的评价三七总黄酮对柯萨奇B3病毒感染体外、体内模型的治疗作用。方法采用柯萨奇B3型病毒感染原代培养Wistar乳鼠心肌细胞方法,建立体外病毒感染模型;Balb/c小鼠腹腔注射柯萨奇B3型病毒感染建立病毒性心肌炎体内实验动物模型。结果三七总黄酮能明显抑制体外培养心肌细胞病变;治疗组小鼠生存率明显增加,心肌酶释放活性明显降低;小鼠干扰素水平上升,病毒滴度降低;炎性浸润作用明显减轻。结论三七总黄酮对柯萨奇B3病毒所致小鼠病毒性心肌炎具有一定治疗作用。

重组灵芝免疫调节蛋白的纯化及其性质

采用超滤浓缩、强阴离子交换、疏水作用和凝胶色谱等方法,对毕赤酵母表达的rGlip进行分离和纯化,对离子交换色谱中rGlip与固相结合的最佳pH值进行了考察,并对纯化产物的活性进行了鉴定.rGlip在215nm处有强的紫外吸收,经激光解析电离时间飞行质谱鉴定其相对分子量为12722,经反相液相色谱鉴定纯度≥97%.设计rGlip的疏水作用色谱,有效地去除色素.凝血实验结果表明,rGlip可以凝集绵羊血红细胞,但对人血A,B,AB和O型等红细胞无凝集作用,有类似凝集素的生物学活性.

高压静电场对发育小鼠生理及生化指标的影响

目的:探讨不同强度高压静电场(HVEF)对动物机体生理功能的影响。方法:昆明种小鼠150只,随机分为5组(每组30只),分别设非静电场处理组(CK)、HVEF 0.6、1.2、1.8和2.4 kV.cm-1处理组,测定不同强度HVEF下饲养的小鼠在发育过程中多种生理生化指标的变化。结果:一定强度HVEF具有促进小鼠生长的作用,其阈值为0.6kV.cm-1。在这个电场强度处理下,小鼠体重明显增加;心肌细胞和肝细胞中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性升高;脂质过氧化物(LPO)的含量下降,与CK组比较差异有显著性(P<0.01);心脏和肝脏多种生化酶指标均正常。结论:HVEF对小鼠发育的促进作用不是对某一代谢机制的单独作用,而是整体机能协同作用的结果,适宜的HVEF对多种疾病的康复是有益的。

重组灵芝免疫调节蛋白抑制HL60细胞增殖及诱导凋亡的研究

目的:探讨重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)对HL60细胞抑制作用及诱导凋亡的研究。方法:采用MTT法检测rLZ-8对HL60细胞的体外杀伤作用;通过Annexin V/PI双染检测细胞凋亡率;应用钙离子荧光探针Fluo-3/AM染色,检测rLZ-8作用HL60细胞后细胞内钙离子浓度变化;分光光度法测定细胞caspase-3活性。结果:rLZ-8可明显抑制HL60细胞增殖,随着rLZ-8浓度增加,细胞凋亡率也增加;激光共聚焦检测细胞内钙离子水平明显升高,并且细胞内caspase-3活性增高。结论:rLZ-8可诱导HL60细胞发生凋亡,细胞内钙超载及caspase-3活性增高可能是rLZ-8诱导HL60细胞凋亡的途径之一。

灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)诱导K562细胞发生细胞核介导的细胞凋亡的研究

目的:探讨重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)诱导K562细胞发生细胞凋亡相关机制的研究。方法:采用MTT法检测rLZ-8对K562细胞的体外杀伤作用;通过Annexin V/PI双染检测细胞凋亡率;应用钙离子荧光探针Fluo-3/AM染色,检测了rLZ-8作用K562细胞后细胞内钙离子浓度变化,分光光度法测定细胞caspase-3活性,还利用激光扫描共聚焦显微镜确定了rLZ-8在K562细胞内的亚细胞定位。结果:rLZ-8可明显杀伤K562细胞,并诱导其发生细胞凋亡;rLZ-8可提高K562细胞内的caspase-3活性,进一步确证了细胞凋亡的发生;激光扫描共聚焦显微镜下观察,rLZ-8可定位在细胞核中,并引起细胞内钙离子水平升高。结论:rLZ-8具有诱导K562细胞发生凋亡的作用,这种杀伤肿瘤细胞的作用可能与rLZ-8可富集在细胞核上的特性有关。

重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)单克隆抗体,为rLZ-8的药效学及药代动力学研究奠定基础。方法:以纯度99%的rLZ-8免疫BALB/c小鼠;应用常规的细胞融合技术建立一种能够稳定分泌抗rLZ-8单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用小鼠腹腔接种法制备腹水;Protein A Sepharose亲和层析柱在AKTA纯化仪上对抗体进行纯化;间接ELISA方法测定单克隆抗体的效价;Western blot胶片曝光方法对rLZ-8单克隆抗体特异性进行分析。结果:筛选出2株可特异性分泌抗rLZ-8单克隆抗体的杂交瘤细胞株。分别命名为clone13-2-3和clone11-4-4。其抗体亚型分别为IgG1亚型和IgG2a亚型。腹水抗体效价分别为1∶12 000和1∶7 500,细胞培养上清效价分别为1∶3 000和1∶2 800。Western blot检测证明这两株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体均具有良好的特异性。结论:成功制备出较高效价和较高特异性的鼠抗rLZ-8的单克隆抗体。

SERS光谱研究细胞表面聚糖的动态表达

基于苯硼酸和细胞表面聚糖的识别作用,我们设计了银纳米粒子-苯硼酸SERS探针,利用SERS光谱对细胞表面的聚糖进行了研究。该探针可以对细胞表面聚糖的不同含量进行响应,实现正常细胞与癌细胞的鉴别。同时该方法还可以用于研究药物刺激作用下细胞表面聚糖的动态表达,对细胞表面糖类的研究以及肿瘤的诊断与治疗具有重要的意义。

融合蛋白表达过程中N末端蛋白对下游蛋白正确折叠的影响

将灵芝免疫调节蛋白(LZ-8)与免疫球蛋白G的Fc片段(IgG Fc)进行融合表达,通过Protein A亲和层析结合Superdex 75分子筛层析获得了高纯度LZ8-Fc.凝血活性实验结果表明,LZ-8与Fc融合表达在一定程度上影响了其免疫活性;利用分子动力学和圆二色光谱等技术研究了LZ8-Fc的蛋白折叠及组装方式,发现LZ8-Fc的组装方式与LZ-8相同,但是N末端的LZ-8可能影响下游IgG Fc片段的正确折叠,表明在融合蛋白制备过程中,位于N末端的蛋白对下游蛋白的正确折叠起到重要作用,这为融合蛋白制备技术的优化及应用过程中的稳定提供了重要的理论依据.

构筑集癌细胞捕获和释放于一体的多功能芯片

基于癌细胞表面糖基的过度表达,利用苯硼酸和细胞表面糖基的特殊的识别模式,构筑了对癌细胞的捕获、释放于一体的多功能芯片。并且通过SERS光谱和荧光成像技术对该过程进行了监控,该设计可以实现正常细胞与癌细胞的分离与鉴别。该方法对肿瘤的初步诊断、药物筛选及研究具有重要的意义。

基于SERS研究光动力治疗中的癌细胞损伤

光动力治疗(PDT)是一种涉及光及光敏剂(光敏药物)与分子氧结合用于诱导细胞损伤或死亡的光化学治疗方法^([1]),因对正常细胞器官损伤轻微而被广泛应用。其过程是用特定波长光照射癌变部位,使选择性聚集在癌变部位的光敏药物活化,从而引发光化学反应破坏癌细胞。表面增强拉曼光谱(SERS)作为分子振动光谱技术,具有灵敏度高、检测速度快、无损及免标记等优点。基于此,本研究设计构筑一种基于靶向细胞器的等离激元探针,用于选择性获得特定细胞器的SERS光谱,通过SERS对光动力治疗过程中的细胞损伤进行分析,为光动力治疗机制提供评价依据。

超声波传感器流量测量的关键问题思考

文章结合超声波测流量的应用经验,讨论了超声波测流量的几个关键问题。探讨超声波测流量的方法、各种的方法的优缺点,超声波传感器的驱动信号的确定、超声波测流量时接收信号的检测问题。探讨有利于提高超声波测流量的精度和可靠性,对进一步改进超声波流量计的工作性能提供技术保证。

化工厂给排水工程的施工管理

以国家“八五”重点工程渭南化肥厂工程为例，针对给排水工程施工管理中的薄弱环节，从准备、施工、预生产三个阶段阐述给排水工程的施工管理，并对给排水工程施工管理中存在的问题提出预防措施。

大口径埋地管道施工中失稳事故的处理

渭河化肥厂采用美国（MarlegCoolingTower）玛丽公司循环水冷却技术，装置日循环水量约90万t，埋地钢质输水主管直径1600～1800mm，埋深约5m。针对施工中发生的钢管失稳问题，分析原因进行处理，并为避免类似事故发生提出了建议。

山西省长治县主要农作物硒及重金属元素地球化学特征

长治县土地质量评估调查显示山西省长治县表层土壤Se含量较高,富硒农用地面积2286.85km^2,而Se是动物体必需的营养元素和植物有益的营养元素,故对长治县主要农作物中微量元素Se进行了分析测试。长治县是煤炭资源大县,可能会引起局部污染,故分析了重金属元素As、Cd、Cr、Hg、Pb等与人类健康相关的5种重金属元素。通过进一步分析研究得出,长治县具有发展特色富硒农产品的条件,且无重金属超标。

尿素散装库门式刚架焊缝裂纹分析和处理

分析了刚架焊缝裂纹形成的原因，介绍了处理方法，提出了钢结构制造中应注意的问题。

低渗透岩性气藏高自然伽马砂岩识别方法

对于低渗透岩性气层,在物性和含气饱和度相同背景下,气层厚度的大小对产能的高低起决定性 作用。高自然伽马砂岩的识别对储层有效厚度的划分非常重要,也是测井解释的关键。利用常规和自然 伽马能谱测井曲线在高自然伽马砂岩处的响应特征,结合取心剖面、化验分析和薄片分析资料的研究, 阐述了高自然伽马砂岩的识别方法。首次利用元素俘获谱测井分析岩石矿物,指出了产生高自然伽马砂岩 的原因。有效识别高自然伽马,能够避免气层的漏失,使测井解释符合率大幅度上升和产能得到提高。

过路管穿刺法顶管施工

通过60余次工程实例，总结了顶管工装设计方法，归纳了顶管中易出现的问题及解决方法，可适用于Dg≤500mm顶管施工。

几何法测量辐射角系数的改进及应用

在太阳能利用中,角系数计算是非常重要的问题,其对太阳能利用的效率有着重要的影响。在角系数计算中,辐射面和吸收面的形状大小、相对位置都是需要进行考虑的重要因素。本文针对辐射角系数在实验法上能否有所进展,在现有仪器设备的基础上,经改进、完善、提高,将设备能够适用于太阳能利用实际工程中的角系数测量。同时,通过实验可知,改造绘图工具可以见效绘图误差,改善计算方式、让仪器可移动、配备刻度条、水平仪,测距仪等装备都可以让获得的数据更加的准确,提高计算结果的准确性。