黄诺玛苷通过抑制LPS诱导BV2细胞炎性活化保护HT22细胞的机制

目的:探讨黄诺玛苷通过抑制脂多糖(LPS)诱导的小鼠小胶质细胞(BV2)炎症反应,对小鼠海马神经元细胞(HT22)的保护作用以及相关机制。方法:BV2细胞分为正常组(Con),模型组(LPS 1μg/mL),黄诺玛苷(flavanomarein,FL)低、中、高剂量组(50、100、200μmol/L),TLR4抑制剂组(TAK,10μmol/L),抑制剂+黄诺玛苷组(TAK+FL,10μmol/L+200μmol/L)。检测细胞存活率、细胞上清液中NO、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的含量,Western blot检测BV2细胞中TLR4、Myd88、NF-кB、p-NF-кB蛋白表达。各组BV2细胞上清作为条件培养基(CM)作用于HT22细胞,检测细胞活力并进行形态学观察,Western blot检测HT22细胞中Bax、Bcl-2、cleaved-Caspase-3、Caspase-3蛋白表达。结果表明,不同浓度的FL干预BV2细胞,与Con组相比,细胞存活率无显著性差异。与LPS组相比,FL(200μmol/L)组NO释放量、TNF-α和IL-6分泌量均显著性降低(P<0.001)。Western blot结果表明,FL各组TLR4、Myd88、NF-κBp65、p-NF-κBp65的蛋白表达均降低。条件培养基(CM)处理后,与CM-Con组相比,CM-LPS组中HT22细胞存活率显著性降低(P<0.001),细胞皱缩,破裂较多;CM-FL的不同剂量组HT22细胞存活率逐渐恢复,呈现剂量依赖性,细胞形态逐渐恢复,呈现梭形。Western blot结果表明,与CM-Con组相比,CM-LPS中cleaved-Caspase3和Bax表达升高,Bcl-2表达降低,FL会逆转上述蛋白的表达情况。综上,黄诺玛苷可以通过抑制神经炎症,进而保护神经细胞。