“医学微生物学”课程思政教学探讨

为了落实立德树人根本任务,文章首先阐述了“医学微生物学”课程思政教学思路,然后从提升教师课程思政能力、制定课程思政教学目标、修订课程思政教学大纲、构建课程思政教学案例库、创新课程思政教学形式五个方面论述了“医学微生物学”课程思政教学实践,最后总结了“医学微生物学”课程思政教学成效。

着丝粒蛋白M在卵巢透明细胞癌中的表达及作用

目的探讨着丝粒蛋白M(centromere protein M,CENPM)在卵巢透明细胞癌(ovarian clear cell carcinoma,OCCC)组织中的表达及对OCCC中ES2细胞株增殖、迁移、凋亡的影响和作用机制。方法采用HE染色观察OCCC组织病理改变;免疫组织化学法检测OCCC组织及癌旁组织CENPM的表达;si-CENPM转染ES2细胞;Western blot检测CENPM蛋白的表达;CCK-8法、细胞划痕实验检测细胞增殖和迁移能力;流式细胞仪评价CENPM对细胞凋亡和周期的影响。结果与癌旁组织相比,OCCC组织中CENPM高表达(P<0.01);转染si-CENPM#B组ES2细胞CENPM蛋白表达水平较si-NC组降低(P<0.01);与Control组和si-NC组比较,敲减CENPM后ES2细胞的增殖、迁移能力下降(P均<0.05);敲减CENPM后ES2细胞凋亡率增高,阻滞ES2细胞的周期在S期(P均<0.05)。结论下调CENPM可抑制人OCCC中ES2细胞株的增殖、迁移并促进细胞凋亡,提示CENPM参与了OCCC的发生发展。

槐定碱抑制内毒素血症小鼠肺组织LPS模式识别受体的表达

目的:探讨槐定碱对内毒素血症小鼠肺组织LPS识别受体LBP、CD14、TLR4及下游炎症介质TNF-α的影响及意义。方法:BALB/c小鼠尾静脉注射LPS制备内毒素血症小鼠模型,注射LPS后30分钟给予槐定碱高(12 mg/kg)、中(6mg/kg)、低(3 mg/kg)三个剂量干预,并分别在2、6、12、24小时各时间点取血液和肺组织,肉眼及光镜观察肺组织的病理变化;以肺湿/干重(W/D)比检测肺水含量;用RT-PCR检测肺组织中LBP、CD14、TLR4的mRNA表达;Western blot检测肺组织TLR4蛋白的表达;放免法检测血清TNF-α含量。结果:与内毒素血症模型组小鼠肺组织比较,槐定碱三个剂量干预组均不同程度减轻内毒素血症小鼠肺组织病理损伤,降低肺组织W/D值,并且显著下调同时间点模型小鼠肺组织LBP、CD14、TLR4的mRNA表达及TLR4蛋白的表达;槐定碱高、中剂量干预可显著抑制模型小鼠血清TNF-α水平(P<0.01或P<0.05)。结论:槐定碱对内毒素血症小鼠肺组织的保护作用机制可能与下调LPS识别受体LBP、CD14、TLR4表达,抑制下游炎症因子TNF-α的释放有关。

内毒素血症小鼠肺组织损伤及血清炎症因子变化的研究

目的建立内毒素血症小鼠模型,观察模型小鼠肺损伤指标及血清炎症因子的变化,以用于抗内毒素药物研究。方法 BALB/c小鼠分为正常对照组、LPS模型组,每组再分为2、6、12、24h四个时间点组,每组10只。LPS 7mg·kg-1尾静脉注射建立内毒素血症小鼠模型,记录一般状况、肉眼及光镜观察肺组织的病理变化;检测肺水含量;放免法检测血清TNF-α含量;硝酸还原酶法检测血清NO含量。结果内毒素肺损伤模型组小鼠在给予LPS后30min即有症状出现,至24h未见缓解;肉眼与光镜观察肺脏病理改变,发现6h起肺脏病理改变明显可见并逐渐加重,延至24h亦未见减轻;模型鼠肺组织W/D值显著升高;血清TNF-α和NO值均在给予LPS后2h即显著升高,并分别在6h和12h达到高峰,直至24h仍明显高于正常对照组(P<0.01)。结论尾静脉注射LPS 7mg·kg-1可建立较为理想的急性肺损伤动物模型;炎症介质的失控性表达是内毒素引起急性肺损伤的重要机制之一。

槐定碱对内毒素血症小鼠肺组织p38MAPK/AP-1表达的影响

目的观察槐定碱对内毒素血症小鼠p38MAPK信号分子、转录因子激活蛋白1(AP-1)及下游炎症因子TNF-α影响,探讨槐定碱抗内毒素的药理机制。方法 BALB/c小鼠尾静脉注射LPS(7mg.kg-1)制备内毒素血症小鼠模型,30min后腹腔注射槐定碱,剂量分别为12、6和3mg.kg-1,6h后取血和肺组织。免疫印迹法(Western-blot)检测肺组织总p38MAPK、磷酸化p38 MAPK蛋白表达,RT-PCR检测肺组织c-jun和c-fos mRNA表达,放免法检测血清中TNF-α含量。结果与内毒素血症模型组比较,三个剂量槐定碱干预组肺组织中磷酸化p38蛋白表达显著降低(P<0.01或P<0.05),c-jun和c-fos mRNA表达显著减少(P<0.01或P<0.05),血清中TNF-α含量明显下降(P<0.01或P<0.05)。结论槐定碱可抑制肺组织中p38MAPK的磷酸化,下调c-jun和c-fos mRNA的表达,抑制下游炎症因子TNF-α表达。

槐定碱对内毒素血症小鼠炎性因子的影响

目的探讨槐定碱对内毒素血症小鼠组织损伤的保护作用。方法 BALB/c小鼠尾静脉注射LPS制备内毒素血症小鼠模型,损伤后30min给予槐定碱治疗,24h后取材,光镜观察肺、肾组织病理变化;收集血清分别用硝酸还原酶法检测NO含量,放免法检测TNF-α含量,脲酶法检测BUN含量。结果相对于LPS模型组,槐定碱治疗组均不同程度减轻肺、肾组织的病理损伤,降低血清中NO、TNF-α、BUN的含量。结论槐定碱对内毒素血症小鼠保护作用与抑制炎性因子的释放有关。

模式识别受体NOD2在髓样分化蛋白88缺陷小鼠抗分枝杆菌感染中的作用机制

目的探讨模式识别受体NOD2信号在髓样分化蛋白88缺陷(MyD88-/-)小鼠中的表达与免疫功能。方法通过PCR技术鉴定MyD88^(-/-)小鼠、野生型C57BL/6小鼠,分别用分枝杆菌减毒株(卡介苗,BCG)经气管滴入建立肺部感染模型,以磷酸缓冲盐溶液(PBS)气管滴入为阴性对照,感染24h后,收集外周血,无菌取肺脏。利用荧光定量PCR技术、Western Blot技术检测小鼠中NOD2基因与蛋白的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测小鼠外周血中白介素6(IL-6)含量。结果与PBS对照组相比,BCG感染组NOD2蛋白表达量显著升高;而MyD88^(-/-)小鼠相比野生型小鼠NOD2蛋白表达量更高;两种小鼠中BCG感染组均比PBS对照组NOD2蛋白表达量更高;两种小鼠中BCG感染后外周血IL-6的含量比PBS对照组高,差异有统计学意义。结论 MyD88依赖途径功能缺失时,BCG可激活NOD2信号通路。

内毒素致肝损伤小鼠模型相关指标的动态变化

目的动态观察内毒素致小鼠肝损伤后不同时间点相关指标的变化特点。方法以腹腔注射内毒素(E.coli O55:B5)10mg/kg制备内毒素肝损伤小鼠模型,分别在给予LPS后2、6、12、24小时记录一般状况并取材,肉眼及光镜观察肝组织的病理变化,赖氏法测定血清丙氨酸氨基转氨酶(ALT)浓度,放射免疫分析法检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量。结果内毒素肝损伤模型组小鼠在给予LPS后30分钟即有症状出现;6小时光镜观察出现明显肝组织病理损伤,12小时损害加重并延至24小时;血清ALT值在12小时达到高峰;血清TNF-α在2小时即达高峰,6小时开始缓慢下降,但直至24小时仍较同时间点正常对照组显著增高(P<0.01);血清IL-1β则在给予LPS后6小时明显升高(P<0.05),12小时达高峰(P<0.01),至24小时即与对照组无显著性差异。结论本模型的肝损伤指标及相关炎症因子的动态变化数据可用于抗内毒素肝损伤药物研究。

结核分枝杆菌Rv2623蛋白的表达、纯化及诱导特异性免疫应答研究

目的对结核分枝杆菌潜伏期Rv2623蛋白进行原核蛋白表达、纯化,并对其免疫学特性进行初步研究。方法应用生物信息学方法分析Rv2623蛋白序列,PCR扩增基因,克隆到pET30b载体上,在大肠埃希菌BL21菌株中以IPTG诱导表达重组蛋白。经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,亲和层析法纯化蛋白。将重组Rv2623免疫C57BL/6小鼠,制备免疫小鼠脾细胞,ELISA检测上清液特异性IFN-γ含量,流式细胞术联合胞内因子染色法,分析脾细胞中分泌TNF-α^+、IFN-γ^+的多功能CD4^+T细胞水平。结果成功构建、表达并纯化得到31.7kDa的重组Rv26232蛋白,SDS-PAGE及Western blot分析表明表达产物正确。重组Rv26232蛋白免疫小鼠后,诱导其脾细胞分泌的特异性IFN-γ水平(121.9pg·mL^(-1))高于PBS组(37.8pg·mL^(-1)),同时诱导高水平能分泌TNF-α^+、IFN-γ单阳或双阳的特异性多功能CD4+T细胞(P<0.05)。结论本研究成功表达并纯化结核分枝杆菌潜伏期蛋白Rv2623,明确其具有良好的免疫原性,并能诱导特异性免疫应答,为后续新型疫苗的研发奠定基础。

槐定碱预防小鼠内毒素性肝损伤的作用及对肝脏CD14、TLR4表达的影响

目的研究预防性给予槐定碱对小鼠内毒素血症急性肝损伤的影响及对CD14、TLR4表达的调节。方法观察槐定碱12、6、4mg/kg三个剂量预防性处理的小鼠,在给予内毒素后2、6、12、24h时各组小鼠一般状况、肉眼及光镜下肝组织的病理变化,赖氏法测定血清丙氨酸氨基转氨酶(ALT)浓度,RT-PCR与Western Blot分别检测肝组织CD14及TLR4的mRNA与蛋白表达,放免法检测血清TNF-α含量的变化。结果槐定碱三个剂量预防性给予,各个时间点结果均表明改善了内毒素血症模型小鼠的一般状况,减轻了肝组织病理改变;槐定碱三个剂量组的ALT值均低于同时间点的LPS模型组(P<0.01或P<0.05);槐定碱三个剂量组与同时间点LPS模型组比较,均下调肝组织CD14、TLR4 mRNA和蛋白的表达(P<0.01或P<0.05);槐定碱三个剂量组血清TNF-α水平均较同时间点LPS模型组降低(P<0.01或P<0.05),并在24h时均降至正常对照组水平。结论槐定碱12、6、4mg/kg三个剂量预防性给予,可抑制内毒素血症小鼠肝脏炎症反应,其机制可能与下调LPS识别受体CD14、TLR4表达,并进而抑制下游炎症因子分泌有关。

槐定碱对小鼠巨噬细胞TLR4及JNK/c-jun mRNA表达的影响

目的观察槐定碱预处理对LPS刺激RAW 264.7巨噬细胞表达TLR4、JNK和c-jun mRNA及分泌TNF-α的影响,探讨槐定碱抗内毒素机制。方法培养RAW 264.7巨噬细胞,实验分为4组:空白对照组、槐定碱对照组、LPS组、槐定碱预处理组,用RT-PCR技术检测RAW 264.7细胞TLR4、JNK和c-jun的mR-NA表达量,放免法检测细胞培养液TNF-α分泌量。结果槐定碱对RAW 264.7巨噬细胞TLR4、JNK、c-jun的mRNA及细胞培养液中TNF-α基础表达无影响,但对经LPS激活的巨噬细胞的TLR4、JNK mRNA表达有显著抑制作用(均P<0.01),c-jun mRNA表达亦降低,但与LPS模型组比较差异尚无统计学意义。槐定碱预处理组细胞液中TNF-α含量显著低于LPS模型组(P<0.01)。结论槐定碱抗内毒素机制与其抑制LPS引起的TLR4、JNK的mRNA高表达,并减少TNF-α分泌有关。

医学微免课程改革与实践

在医学微生物学与医学免疫学课程建设中,以学生自学能力与创新素质培养为目标,借鉴先进院校的经验,结合该院实际情况,在学生理论课自学能力培养和实验课创新素质培养方面进行了一些教学改革,取得良好效果。

原头蚴外泌体对树突状细胞活化和细胞因子分泌的影响

为分析囊型包虫原头蚴(PSC)分泌的外泌体(Exosome)对树突状细胞(DCs)活化和分泌细胞因子的影响,本研究采用高速离心法结合外泌体提取试剂盒分离原头蚴分泌的外泌体(PE),收集的PE沉淀中加入去离子水低渗裂解离心,提取超滤后的蛋白浓缩液即为原头蚴外泌体超滤裂解物(PEL)。利用免疫磁珠从健康ICR小鼠脾脏中分选DCs,分别加入PE、LPS、PEL、PBS进行刺激培养,24 h后收集培养细胞及培养上清,利用流式细胞术检测DCs表面活化分子的表达水平及细胞因子分泌情况。结果显示:4组DCs表面表达CD40、CD80、CD86、MHCⅡ的比例相比,PEL组结果明显高于PE组,这两组较PBS组均显著升高(p<0.05),但3组均低于LPS组。PE、PEL组DCs培养上清中IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α均显著高于PBS组,且PEL组IL-12、TNF-α高于PE组,IL-6、IL-10水平低于PE组。以上结果初步证实PE能刺激DCs活化和释放细胞因子,低渗裂解超滤提纯外泌体蛋白并去除miRNA成分的PEL能够更有效激活DCs活化和促进细胞因子释放,表明外泌体蛋白可诱导抗感染免疫应答,exosomal miRNA成分可能参与虫体免疫逃逸。本研究为后续进一步探索包虫感染及抗感染免疫应答机理提供实验依据。

黄芪注射液改善血管性痴呆小鼠认知功能的研究

目的观察黄芪注射液对血管性痴呆(vascular dementia,VaD)小鼠认知功能的影响,探讨其海马CA1区神经细胞凋亡与存活数量及血清TNF-α变化的意义。方法 C57BL/6雄性小鼠随机分为假手术组、VaD模型组、黄芪治疗组(RA组,n=10),采用双侧颈总动脉结扎法建立小鼠VaD模型。以Morris水迷宫定位航行试验和空间探索试验测试小鼠对空间位置的学习能力和空间定位的记忆能力,利用Nissl染色观察小鼠海马区神经元形态学变化、TUNEL染色观察神经细胞凋亡,并利用ELISA法检测小鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。结果 Morris水迷宫实验在训练第5天,VaD模型组和RA组小鼠平均逃避潜伏期均高于假手术组小鼠(P<0.05),但与VaD组相比,RA组小鼠逃避潜伏期明显缩短(P<0.05)。空间探索试验中,与假手术组小鼠相比,VaD模型组与RA组原平台滞留时间缩短,但RA组小鼠原平台滞留时间较VaD模型组提升(P<0.05)。同时黄芪注射液可减轻VaD小鼠海马CA1区神经细胞的凋亡及提高存活细胞数量,并能降低血清中TNF-α的水平(P<0.05)。结论黄芪注射液可改善VaD模型鼠的学习和记忆能力,其作用可能与其减少VaD小鼠海马细胞凋亡,抑制TNF-α参与的炎症反应有关。

设计性实验在医学微生物学实验教学中的实践与探索

随着我国高等教育体制改革的不断深入和素质教育意识的增强，提高教学质量，培养具有综合能力、创新能力的人才成为医学院校实验教学环节努力的方向。为此，我们在2003级临床医学、麻醉、预防、检验本科专业的医学微生物学实验教学中进行设计性实验的实践与探索，取得了良好的教学效果。

槐定碱对内毒素肺损伤小鼠p38MAPK的影响

目的探讨内毒素(细菌脂多糖,LPS)肺损伤小鼠肺组织p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的变化以及槐定碱对其影响。方法 60只BALB/c小鼠,除正常对照组、槐定碱对照组外,内毒素肺损伤模型组(LPS模型组)、槐定碱治疗高(12mg.kg-1)、中(6mg.kg-1)、低(3mg.kg-1)剂量组的BALB/c小鼠均尾静脉注射LPS制备急性肺损伤模型,注射后30min再分别腹腔注射生理盐水或槐定碱12、6、3mg.kg-1,各组均处理后6h取材,肉眼及光镜观察肺组织的病理变化,免疫组化SP法检测肺组织中总p38、磷酸化p38的表达,硝酸还原酶法检测血清NO含量。结果 LPS模型组肺脏病理改变明显加重,肺组织总P38和磷酸化p38的表达均增多和增强(P<0.01);血清NO显著升高(P<0.01);槐定碱三个剂量治疗组病理损伤均不同程度改善,总P38表达与LPS组比较差异无统计学意义,但磷酸化p38表达均显著小于模型组(P<0.01),血清NO含量显著低于LPS模型组(P<0.01)。结论 p38MAPK参与了内毒素肺损伤的发病过程,槐定碱的抗内毒素肺损伤机制可能与下调p38MAPK的表达,抑制NO的释放有关。

医学微生物学多媒体教学素材库的构建和应用探讨

为适应数字教学的教育环境进程和发展，提高教学质量，并在一定程度上减轻教师劳动强度和解决实验教学标本短缺的问题，通过多种途径，利用多种方法构建了适合微生物学教学的多媒体素材库，并对其应用及可能存在的问题进行探讨。

多媒体技术在医学免疫学教学中的应用

医学免疫学是医学院校重要的基础课程，难于理解，知识更新快。多媒体计算机辅助教学，可使教学形式多样化，内容形象、丰富，激发学生的学习兴趣。结合多年教学实践，探讨如何根据课程特点，在教学中充分合理地运用多媒体和网络技术，提高教学效果。

儿童眼部烟花鞭炮伤的观察及分析

目的分析儿童眼部烟花鞭炮伤造成的损害程度,给预防和减少儿童眼部损伤提供合理的建议。方法对眼外伤科收治的儿童眼部烟花鞭炮伤21例(22眼)眼部损害程度观察及治疗前后视力进行比较。结果燃放烟花鞭炮防范不当可引起儿童眼部的严重损害,治疗前盲目为15眼占68·18%,治疗后盲目为12眼占54·55%。结论儿童眼部烟花鞭炮伤会造成眼部的严重损伤,家长要做好儿童的监管督促指导及安全防范教育,确保儿童健康成长。

医学微生物学课程创新的探索与实践

介绍了“医学微生物学”课程顺应我国高等教育教学的发展要求,针对课程教学中的痛点问题,课程组创设了“道术、仁术”的生态和氛围深入推进课程思政,继而契合新医科理念行交叉学科知识更新融合,科研反哺教学,基础密接临床,锤炼学生“学术、技术”。通过重置教学内容,线上线下混合式教学,运用数字信息化技术,紧扣“三态四环”培养服务适应地方经济建设和社会需要的“下得去、留得住、用得上”的医学人才。实践证实,“道术、仁术”价值塑造驱动了学生“学术、技术”的有效提升,本课程也被认定为首批国家级课程思政示范课程、教学名师和教学团队。