基于非标记分析方法应用四极杆-静电场轨道阱-线性离子阱三合一高分辨质谱仪鉴定中国仓鼠卵巢细胞膜蛋白

目的 探讨应用四极杆-静电场轨道阱-线性离子阱(Orbitrap fusion lumos)三合一高分辨质谱仪鉴定中国仓鼠卵巢(Chinese hamster overy,CHO)细胞的全蛋白质组和膜蛋白质组的非标记(label-free)分析方法,并评价其应用效果,为研究膜蛋白相关传染病的发生机制提供方法学基础。方法 贴壁培养中国仓鼠卵巢细胞,提取、富集和酶解处于对数生长期细胞的全蛋白和膜蛋白,用高效液相色谱仪联用四极杆-静电场轨道阱-线性离子阱三合一高分辨质谱仪对酶解后的多肽进行分析,利用Maxquant软件和Uniprot数据库进行搜库及鉴定,最后对鉴定膜蛋白进行基因本体论(gene ontology,GO)功能分类。结果 全蛋白组一共检测出14 300个肽段,搜库得到2708个蛋白,其中可信蛋白2002个(FDR<1%且特异性肽段>1);膜蛋白组一共检测出13 179个肽段,搜库得到2594个蛋白,其中可信蛋白1873个。在鉴定的全蛋白组和膜蛋白组中定量结果前20的蛋白中,全蛋白组中与膜相关的蛋白有4个,占比20%;膜蛋白组中与膜相关的蛋白有10个,占比50%。在膜蛋白组中,GO功能分类表明分子功能上主要涉及结合和催化活性,在生物学进程上主要涉及细胞进程、代谢过程等。结论 膜蛋白组中与膜相关的蛋白显著高于本实验的全蛋白组,基于非标记分析方法应用Orbitrap fusion lumos的分析技术是鉴定细胞膜蛋白的有效方法。

胸腺基质淋巴细胞生成素在1-氯-2,4-二硝基苯致敏诱导皮炎小鼠中的表达

目的:了解胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)在1-氯-2,4-二硝基苯(DNCB)致敏诱导皮炎小鼠中的表达,并评价TSLP在小鼠皮炎免疫反应中的作用。方法:将20只11周龄SPF级BALB/c小鼠随机分为2组(每组10只):致敏组先后接受含1.0%和0.1%DNCB的橄榄油丙酮(4∶1)溶液反复刺激背部皮肤,对照组接受基质溶液(橄榄油∶丙酮=4∶1)涂抹背部皮肤。实验期间观察小鼠皮炎症状,监测小鼠挠痒次数和皮炎症状评分,观察皮肤组织病理改变。21 d后检测2组血浆总Ig E水平;利用实时荧光定量聚合酶链式反应(q PCR)法检测皮肤、肝脏、脾脏和肾脏组织中TSLP m RNA水平,采用western-blot法分析TSLP蛋白表达情况。结果:2组小鼠的抓挠次数和皮炎症状评分分别在致敏第8天和第6天后出现差异(P<0.05);致敏组小鼠血浆总Ig E水平[(132.61±14.89)μg/L]较对照组[(109.13±2.51)μg/L]显著升高(t=4.92,P<0.05)。与对照组(1)相比,致敏组皮肤(1.83)、脾脏(1.06)和肾脏(1.10)组织中TSLP m RNA相对表达量均升高,而肝脏(0.90)组织TSLP m RNA相对表达量降低,但组间比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。Western-blot结果示TSLP蛋白在上述组织中的表达均无差异。结论:TSLP在DNCB致敏诱导皮炎小鼠的皮肤、肝脏、脾脏和肾脏组织中表达均无明显差异,其在小鼠皮炎免疫反应中的作用仍需进一步的研究。

试论合作制种的全面质量管理

随着现代管理科学的发展,全面质量管理在工业上已得到广泛的应用,通过系统地对一切与产品质量有关的因素进行全面控制,使产品质量的提高有了保证。蚕种生产是一项技术性强,生产环节多,过程复杂,受控因素多的产业。气象环境等自然因索及生产设备,劳动力素质等都会直接或间接影响蚕种的质量。同时,蚕种又是一种有生命的特殊商品和生产资料,其质量管理的复杂性和工业生产相比,有更大的难度。蚕种质量管理。

不同蚕品种的养蚕经济效益评价

为了摸清不同蚕品种的养蚕生产经济效益,选出目前适合于阳城大面积生产推广的最优家蚕品种,1987年春蚕期,我们对当地饲养的蚕品种与引进的新品种进行了对比试验和经济效益评价,报告如下。一、试验方法（一）供试蚕品种:陕蚕二号,陕西省蚕桑研究所制;晋3×晋4、晋4×晋3、山西省蚕研所制;781×734。

深圳市509例2型糖尿病患者常见口服降糖药物基因多态性分析

目的:探索深圳市糖尿病患者口服降糖药物相关单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNPs)的分布特征,为糖尿病患者个体化用药指导提供参考。方法:采用外周血DNA抽提/焦磷酸测序检测509例糖尿病患者四大类降糖药物4个药物相关基因位点SNPs。采用SPSS 25.0软件统计相关基因位点的等位基因和基因型的频率分布差异。参照国内外不同人群的基因型频率数据,回顾性分析深圳市2020—2021年社区糖尿病患者的降糖药物相关SNPs的分布特征。结果:PPARG、SLCO1B1的SNPs与国外人群存在较大差异,与国内报道基本相符。CYP2C9*3的SNPs与欧洲人群存在差异,但与中国人群和美洲人群相关报道基本相符。然而有机阳离子转运体OCT2的SNPs与中国南方人群存在一定的差异,但与中国北京、欧洲、美洲相关报道的情况基本相符。结论:深圳市糖尿病患者降糖药物相关SNPs分布有自身特点,临床药师及医生应根据药物相关SNPs提供个体化用药指导建议。药物基因组学的个体化用药在参考PharmGKB等数据库的同时应结合国人的特点,不能完全参考国外人群数据库。

深圳市城市结直肠癌高危人群2017—2019年肠镜筛查结果分析

目的了解广东省深圳市城市结直肠癌高危人群2017—2019年的结直肠病变情况,为优化结直肠癌筛查策略提供参考依据。方法收集深圳市城市重点癌症早诊早治项目2017年5月—2019年8月通过结直肠癌危险因素调查和风险评估系统评估出的40~74岁城市结直肠癌高危人群,对进行问卷调查和肠镜筛查结果分析。结果深圳市2017—2019年共评估出城市结直肠癌高危人群6260人,其中完成肠镜检查者2622人,肠镜检查依从率为41.88%;参与肠镜检查且问卷信息填写完整者1371人,检出结直肠癌3例、癌前病变152例、良性息肉473例、炎性肠病86例、良性息肉合并炎性病变38例、其他大肠疾病148例,检出率分别为0.22%、11.09%、34.50%、6.27%、2.77%、10.80%;深圳市不同特征高危人群比较,不同性别高危人群癌前病变、良性息肉和其他大肠疾病检出率不同,不同年龄、体质指数高危人群癌前病变和良性息肉检出率不同,不同新鲜水果、畜肉食用频率高危人群良性息肉合并炎性病变检出率不同,不同口味高危人群癌前病变、良性息肉和其他大肠疾病检出率不同,不同饮茶频率高危人群炎性肠病检出率不同,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论深圳市城市居民结直肠癌高危人群肠镜筛查依从性较好,各结直肠病变检出率较低,不同特征高危人群各类病变检出率不同,应进一步优化结直肠癌筛查方案和精准识别高危人群,以实现结直肠癌的早诊早治。

一线抗结核药物治疗对肺结核患者维生素D水平的影响

目的探讨一线抗结核药物治疗对肺结核患者维生素D营养水平的影响,掌握治疗过程中维生素D水平变化,为深圳市结核病与营养健康教育提供科学依据。方法以2016年诊断登记的初治涂阳肺结核患者100例作为研究对象,患者均采用标准化短程化疗方案治疗。在治疗前、强化期末和疗程末,抽取患者血样,采用化学发光技术(CLIA)统一测定其各时间点的25-羟维生素D[25-(OH)D]浓度。分析抗结核治疗过程中25-(OH)D浓度变化,比较不同时间点维生素D水平的差异。结果本组治疗前、强化期末和疗程末维生素D缺乏分别有79例(79.0%)、94例(94.0%)和96例(96.0%),缺乏比例呈上升趋势(χ^2=15.543,P<0.001),血25-(OH)D浓度均值分别为(15.74±6.54)ng/ml、(12.56±5.15)ng/ml和(11.51±4.28)ng/ml。治疗前后25-(OH)D浓度下降26.9%,下降幅度为(4.23±6.75)ng/ml(t=6.257,P<0.001)。其中,强化期下降幅度为(3.18±5.24)ng/ml(t=6.069,P<0.001);继续期下降幅度为(1.05±4.86)ng/ml(t=2.154,P=0.034)。强化期下降幅度大于继续期(t=2.836,P=0.006)。强化期和继续期25-(OH)D浓度降低患者分别有77例(77.0%)和55例(55.0%),其中41例(41.0%)为持续下降,前者降低比例高于后者(χ^2=9.680,P=0.003)。结论初治肺结核患者一经抗结核治疗,在强化期维生素D水平即可快速降低,并可持续整个疗程,进而导致患者维生素D普遍缺乏,一线抗结核药物可能是导致其降低的主要因素。因此,临床医生有必要对每位患者在整个治疗期间均持续开展维生素D健康教育,尤其维生素D缺乏高风险人群,建议辅助维生素D补充剂治疗。

不同饲料硒水平饲养大鼠的多组织内参基因筛选

目的筛选不同饲料硒(selenium,Se)水平饲喂大鼠时,不同组织中稳定表达的内参基因(reference genes,RGs)。方法 24只断乳雄性SD大鼠在缺Se饲养5周后,随机均分为4组,分别以Se含量<0.01、0.25、3、5 mg/kg饲料饲喂4周后处死,取肝、睾丸、骨骼肌、脂肪组织等样品待检。以荧光定量PCR检测Actb、Atp5f1、B2m、Gapdh、Gusb、Hprt、Pgk1、Ppia、Rplp2、Rps18、Tbp、Ywhaz等12个候选内参基因的mRNA水平,以geNorm、NormFinder、BestKeeper、Delta CT和RefFinder等方法对其表达稳定性进行评价。结果各组织中稳定性排名前4的内参基因是:肝中Ppia>Atp5f1>Rplp2>Hprt;睾丸中Ywhaz>Atp5f1>Rplp2>Ppia;骨骼肌中Tbp>Ppia>B2m>Rps18;脂肪组织中Hprt>Tbp>Atp5f1>Pgk1;综合4种组织,则Rps18>Hprt>Rplp2>Atp5f1。结论分析不同饲料Se水平饲养大鼠的目标基因表达水平时,应根据组织类型选择适宜的内参基因。

深圳市涂阳肺结核患者维生素D营养状况及其影响因素分析

目的 掌握深圳市肺结核患者的维生素D营养水平,识别维生素D缺乏重点特征人群及其影响因素,为深圳市结核病与营养相关健康促进提供科学依据.方法 以2016年诊断登记的涂阳肺结核患者作为研究对象,收集患者信息及血样,并按研究对象纳入标准,建立样本池.采用简单随机抽样,抽取受检对象120例,其中,男性84例（70.0%）,女性36例（30.0%）.25羟维生素D[25（OH）D]浓度测定采用化学发光技术.统计分析患者维生素D状况,比较不同特征患者维生素D水平,采用多因素线性回归分析,识别影响患者维生素D水平的重要影响因素.结果 120例受检患者,血25（OH）D浓度为（40.2±16.0）nmol/L.维生素D充足2例（1.7%）、不足28例（23.3%）和缺乏90例（75.0%）,其中,严重缺乏者23例（19.2%）.工作生活室内为主、室外为主和室内外难区分患者的血25（OH）D浓度分别为35.3 nmol/L、49.5 nmol/L和40.6 nmol/L,差异有统计学意义（F=8.274,P〈0.001）;日照时间（最近1个月）≥30 min/d者较〈30 min/d者,血25（OH）D浓度高,46.4 nmol/L比36.7 nmol/L,t=3.342,P=0.001.多因素线性回归分析结果显示,汉族较少数民族（β=-11.576,t=-1.991,P=0.049）,家政或居家者较其他职业人员（β=-6.136,t=-1.998,P=0.048）,日照时间〈30 min/d者较≥30 min/d者（β=-9.644,t=-2.829,P=0.006）,体质指数高（β=-2.056,t=-3.439,P=0.001）,工作生活室内程度高者（β=-4.419,t=-2.155,P=0.033）,25（OH）D浓度低.结论 深圳市肺结核患者维生素D营养水平严重不足,是维生素D缺乏重点人群,应加强维生素D相关知识的健康教育,尤其缺乏阳光照射或高体质指数等维生素D缺乏高风险重点人群.

深圳市成人25-(OH)VD水平及其与血糖的相关性研究

目的了解深圳市企事业单位职工25-(OH)维生素D[25-(OH)VD]的营养状况,并分析其与血糖及糖化血红蛋白的相关性。方法选取2013年7~12月在深圳市某体检中心体检的深圳市机关和企事业单位员工作为研究对象,采集空腹外周静脉血,采用酶联免疫法对血浆25-(OH)VD的含量进行检测,并对血糖及糖化血红蛋白进行检测。分析检测指标的异常情况。结果深圳企事业单位人群中25-(OH)VD的平均水平为(60.98±15.92)nmol/L,25-(OH)VD缺乏或不足率为83.37%,且性别之间25-(OH)VD的营养水平及不足与缺乏率差异有统计学意义;血糖及糖化血红蛋白的平均水平分别为(5.45±0.88)mmol/L及(5.69±0.59)%;扣除年龄、性别及BMI的影响,血清25-(OH)VD水平与血糖呈负相关(r=-0.062,P<0.01),与糖化血红蛋白有一定的相关性(r=-0.051,P<0.01)。结论正常人群中25-(OH)VD水平与血糖及糖化血红蛋白有一定的相关性,维持人体正常25-(OH)VD水平可能对预防糖尿病的发生、降低糖尿病的患病率起到一定作用。

硒干预和DNCB致敏实验小鼠的基因表达分析参考基因的筛选

目的为1-氯2,4二硝基苯(1-chloro 2,4-dinitrobenzene,DNCB)致敏诱导的特应性皮炎小鼠动物实验的基因定量检测筛选内参基因。方法选取DNCB致敏诱导特应性皮炎动物实验中4个组别小鼠的皮肤、肝脏和脾脏样品各3份,利用q PCR方法对Atp5f1、Pgk1、Gusb、B2m、Ppia、Hprt1、Actb、Ywhaz、Tbp、Gapdh、Tfrc、Rplp1、Rps18等13种候选管家基因进行定量检测,采用Ge Norm分析软件分析基因表达稳定性,筛选在所有实验条件下各个组织中均稳定表达的管家基因作为内参基因。结果在全部组别皮肤和肝脏组织样品中稳定性最好的都是Gapdh(甘油醛-3-磷酸脱氢酶);在脾脏样品中稳定性最好的是Atp5f1(三磷酸腺苷合成酶5f1)和Ppia(肽酰脯氨酰异构酶A)。在全部组别所有样品中稳定性最好的依次是Gapdh、Pgk1和Atp5f1。结论 Gapdh和Atp5f1可以作为DNCB致敏诱导特应性皮炎小鼠基因定量检测的参考基因。