雷公藤甲素诱导自噬促进人肾小管上皮HK-2细胞凋亡

目的研究自噬在雷公藤甲素(triptolide,TP)诱导人肾近端小管上皮HK-2细胞凋亡中的作用。方法以HK-2细胞为研究对象,CCK-8法检测细胞存活率;倒置荧光显微镜观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位MMP变化;激光扫描共聚焦显微镜观察细胞内LC3荧光强度变化;Western blot检测细胞凋亡及自噬相关蛋白cleaved caspase 9、caspase 9、Bax、Bcl-2、LC3、p62和Beclin 1的表达;采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)和自噬激动剂雷帕霉素(rapamycin,Rap)研究自噬对TP诱导HK-2细胞凋亡的影响。结果TP降低HK-2细胞存活率,诱导细胞凋亡和自噬,降低MMP水平,增加胞内LC3Ⅱ荧光强度,上调Beclin 1表达,下调p62表达,升高cleaved caspase 9/caspase 9、Bax/Bcl-2和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。此外,与TP组相比,3-MA+TP组细胞内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和cleaved caspase 9/caspase 9比值降低,p62表达上升,细胞增殖的抑制作用和促凋亡作用减弱。相反,与TP组相比,Rap+TP组细胞内LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和cleaved caspase 9/caspase 9比值上升、p62表达下降,细胞增殖的抑制作用和促凋亡作用增强。结论TP能够诱导HK-2细胞发生自噬和线粒体途径介导的细胞凋亡,抑制HK-2细胞自噬可降低TP诱导细胞凋亡的发生,因此抑制自噬可能是减轻TP肾毒性的有效干预策略。