乙型肝炎病毒原发性肝癌X区变异与外周血T淋巴细胞亚群的关系

目的:初步探讨乙型肝炎病毒(HBV)X区热点突变A1762T/G1764A与HBV相关性原发性肝癌(PLC)患者外周血T淋巴细胞亚群之间的关系。方法:使用流式细胞仪和全自动生化分析仪分别检测35例PLC患者外周血CD3^+、CD4^+和CD8^+T淋巴细胞亚群水平和肝功能相关指标,同时提取外周血HBV DNA,用巢式PCR扩增HBV X区,对PCR产物进行双向测序,分析HBV X区A1762T/G1764A位点突变情况。结果:成功扩增35例PLC患者血清HBV DNA,DNA载量在突变组与未突变组间存在明显差异(t=4.41,P<0.001)。高载量组中CD3^+、CD4^+、CD8^+T淋巴细胞所占百分比和CD4^+/CD8^+比值与低载量组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。突变组中CD3^+、CD4^+和CD8^+T淋巴细胞所占百分比和CD4^+/CD8^+的比值与未突变组比较,差异无统计学意义(P>0.05);突变组总胆红素(TBIL)、总蛋白(TP)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和未突变组比较无明显差异(P>0.05),但突变组丙氨酸氨基转移酶(ALT)高于未突变组(t=2.20,P=0.035)。结论:HBV X区A1762T/G1764A突变与外周血T淋巴细胞可能无直接关联,但能够引起较为严重的肝损伤。

高效液相色谱法同时测定水源水中三种微囊藻毒素

目的建立一种同时测定水源水中三种微囊藻毒素(MC-LR、MC-RR、MC-YR)的高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)方法。方法取500 m L水样,0.45μm滤膜过滤,滤液过C18柱,依次用10 m L超纯水、20 m L20%甲醇溶液淋洗,15 m L 80%甲醇溶液(加入0.05%三氟乙酸)洗脱,蒸发浓缩吹干,溶于1 m L超纯水,待测。采用固相萃取柱,流动相为0.1%磷酸水溶液-乙腈(67∶33),流速1.0 m L/min,柱温45℃,在238 nm波长紫外线检测器检测。结果MC-LR、MC-RR和MC-YR在0.05~1.00μg/m L范围内线性良好(r=0.9987、0.9992和0.9997),且峰形较好;回收率均在80%~110%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为5.0%~9.6%;MC-LR、MC-RR和MC-YR的方法检出限(limit of detection,LOD)分别为0.028μg/L、0.037μg/L和0.056μg/L。结论本方法准确度、灵敏度、回收率高,重现性好,可用于水源水中MC-LR、MC-RR、MC-YR同时检测。

南宁市水源水和饮用水微囊藻毒素LR浓度调查及初步健康风险评价

目的了解南宁市水源水和出厂饮用水中微囊藻毒素(MC)-LR浓度,初步评估其健康风险。方法采集2017年3~12月南宁市水源水和出厂饮用水样品,经C18固相萃取柱净化富集后,采用MC检测试剂盒对MC-LR进行定量分析,并应用水环境健康风险评价模型对监测结果进行健康风险初步评价。结果水源水和出厂饮用水MC-LR浓度范围分别为9.85~47.66 ng/L和3.34~16.79 ng/L。3~12月水源水和末梢水中的MC-LR浓度均随时间变化呈先上升后下降的趋势,在10月均达到峰值,3月最低。MC-LR所致成年人个人年健康风险值范围为(7.34×10-6~36.90×10-6)/年,儿童个人年健康风险值范围为(16.06×10-6~80.72×10-6)/年。结论南宁市2017年3~12月水源水和出厂饮用水MC-LR浓度在各个月份分布不均衡,差异可达数倍,儿童比成人更易于受到MC-LR污染的威胁。

南宁市售瓶装水中微囊藻毒素调查及初步健康风险评价

目的:调查南宁市售瓶装水中3种微囊藻毒素(MCs)MC-LR、MC-RR、MC-YR浓度,并进行初步健康风险评估。方法:2017年9月采集南宁市内超市售卖的具有代表性的31种瓶装水,经C18固相萃取柱净化富集后,采用高效液相色谱法对3种典型的MCs进行定性定量分析,并应用水环境健康风险评价模型对监测结果进行初步评价。结果:31种瓶装水中,MCs均有检出,浓度范围为0.05~17.05ng/L,以MC-RR为主;矿泉水与纯净水的MCs浓度、矿泉水中的国产与进口的MCs浓度,差异均无统计学意义(P>0.05);MCs所致个人年健康风险范围为(0.13×10-6~43.72×10-6)/a,均低于国际辐射防护委员会(ICRP)和美国环境保护署(US EPA)推荐的最大可接受值。结论:所检测瓶装水中MCs浓度均未超过国家标准。

CBX8基因在肝细胞癌中的表达及功能分析

目的探讨色素框同源蛋白8(CBX8)在肝细胞癌(HCC)中的表达情况、临床意义及作用机制,为HCC的预防、诊治和预后提供新思路和方向。方法基于生物信息学的方法,应用肿瘤基因数据库分析CBX8在HCC组织中的表达和基因突变情况,并分析其与人口学特征、病理特征及预后的关系。利用蛋白质相关数据库分析CBX8基因的蛋白质表达水平,构建相关蛋白质互作网络并进行通路富集分析。结果HCC组织的CBX8 mRNA表达水平高于正常肝组织。CBX8 mRNA的表达与体重、TP53突变情况、组织学分类、肿瘤分级存在显著关联(P<0.05),且CBX8 mRNA高表达患者的总体生存率较低(P<0.05)。CBX8基因的突变类型主要为C>T突变和错义突变。CBX8主要参与细胞周期、组蛋白泛化等生理过程,可能在干细胞多能性的信号调控通路和癌症关联的microRNA网络中发挥作用。结论CBX8在HCC中高表达,与HCC预后相关,可能参与了HCC的发生和发展。

辣椒碱对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响及机制

目的：观察辣椒碱（capsaicin）对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响及可能的分子机制。方法：设立不同浓度辣椒碱组以及空白组,采用细胞计数试剂盒-8法（CCK-8）检测辣椒碱（0,25,50,75,100,150,200,250μmol·L-1）处理肝癌SMMC-7721细胞24 h后的细胞活性;穿透小室（transwell）检测辣椒碱（0,50,75,100μmol·L-1）的肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭能力;蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测辣椒碱（0,50,75,100μmol·L-1）处理肝癌SMMC-7721细胞24 h后,对细胞中的E-钙黏蛋白（E-cadherin）,波形蛋白（Vimentin）,基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）和（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）蛋白表达水平的影响。结果：与空白组比较,辣椒碱（25,50,75,100μmol·L-1）作用24 h后均对细胞存活率未产生明显影响,从150μmol·L-1开始,随着辣椒碱浓度逐渐升高,细胞存活率逐渐下降（P〈0.01）,且呈剂量依赖效应;与空白组比较,辣椒碱（50,75,100μmol·L-1）干预能显著抑制肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭,且呈浓度依赖效应（P〈0.01）;与空白组比较,辣椒碱（50,75,100μmol·L-1）干预能明显上调肝癌SMMC-7721细胞中E-cadherin蛋白表达水平（P〈0.01）,下调Vimentin,MMP-2,MMP-9蛋白的表达水平（P〈0.01）。结论：辣椒碱干预对肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭具有抑制作用,可能与其上调肝癌SMMC-7721细胞中E-cadherin蛋白的表达,下调肝癌SMMC-7721细胞中Vimentin,MMP-2和MMP-9蛋白的表达有关。

辣椒碱对肝癌SMMC-7721细胞增殖及HMGB1,IL-6表达的影响

目的:观察辣椒碱对肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响,并探讨其作用的分子机制。方法:设立辣椒碱(50,100,150,200,250,300μmol·L^(-1))组以及空白组,采用细胞计数试剂盒-8 (CCK-8)法检测辣椒碱(50,100,150,200,250,300μmol·L^(-1))作用SMMC-7721细胞24,48,72 h后的细胞活性;采用光学倒置显微镜观察辣椒碱(150,200,250μmol·L^(-1))作用SMMC-7721细胞形态的变化;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测辣椒碱(150,200,250μmol·L^(-1))作用SMMC-7721细胞24 h后细胞中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和白细胞介素-6(IL-6) mRNA表达水平;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测辣椒碱(150,200,250μmol·L^(-1))作用SMMC-7721细胞24 h后细胞培养上清中HMGB1和IL-6的水平。结果:与空白组比较,辣椒碱50,100μmol·L^(-1)组作用24,48,72 h差异均无统计学意义;其余辣椒碱(150,200,250,300μmol·L^(-1))作用不同时间点,增殖抑制率均明显升高(P <0. 05),且具有明显的浓度和时间依赖效应;与空白组比较,辣椒碱(150,200,250μmol·L^(-1))组SMMC-7721细胞均出现不同程度地形态学改变,表现为细胞变圆、皱缩,贴壁差,脱落增多,给药浓度越高,效果就越明显;与空白组比较,辣椒碱(150,200,250μmol·L^(-1))组SMMC-7721细胞中HMGB1,IL-6 mRNA表达明显下调(P <0. 05),上清中HMGB1和IL-6分泌明显降低(P <0. 05)。结论:辣椒碱对肝癌SMMC-7721细胞增殖具有抑制作用,潜在机制可能与其抑制细胞HMGB1和IL-6的表达与分泌有关。