片仔癀通过BCL-2及Caspase途径参与急性淋巴白血病耐药细胞株MOLT-4/ADM耐药逆转机制的研究

目的探讨片仔癀对耐阿霉素的急性淋巴细胞白血病细胞株MOLT-4/ADM药物耐受逆转的机制。方法在不同浓度片仔癀作用MOLT-4/ADM细胞48 h后,用MTS法检测MOLT-4/ADM增殖的影响;利用流式细胞术检测MOLT-4/ADM细胞凋亡率;实时荧光PCR检测耐药基因MDR1以及BCL-2 mRNA、Caspase-3/8/9 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(western blotting)检测凋亡蛋白BCL-2、Caspase-3/8/9以及多药耐药蛋白(P-gp)表达。结果0.4 mg/ml片仔癀组对MOLT-4/ADM耐阿霉素的IC50逆转倍数为4.02倍。0.2 mg/ml片仔癀组凋亡率为(9.87±0.47)%,0.4 mg/ml片仔癀组凋亡率为(15.17±0.69)%,0.8 mg/ml片仔癀组凋亡率为(20.32±0.87)%,均高于阴性对照组(6.06±0.35)%。随着片仔癀用药浓度的增大,BCL-2 mRNA表达下降,而Caspase-3/8/9 mRNA升高。BCL-2蛋白表达下降,而Caspase-3/9蛋白表达量升高,Caspase-8蛋白相对变化不大。结论片仔癀可以通过BCL-2以及Caspase途径诱导凋亡,增加MOLT-4/ADM对阿霉素的敏感性。

XPO1抑制剂塞利尼索对急性髓系白血病Kasumi-1细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨核输出蛋白1(XPO1)抑制剂塞利尼索对急性髓系白血病(AML)Kasumi-1细胞增殖与凋亡的影响。方法:用MTS法检测不同浓度塞利尼索(0、2.5、5、10μmol/L)作用于Kasumi-1细胞不同时间点(24、48、72 h)的增殖抑制率;流式细胞术检测不同浓度塞利尼索作用于Kasumi-1细胞48 h后的细胞凋亡率和细胞周期变化情况。结果:塞利尼索在不同时间点均可抑制Kasumi-1细胞生长,并呈浓度依赖(r_(24 h)=0.7592,r_(48 h)=0.9456,r_(72 h)=0.9425);不同浓度塞利尼索均可抑制Kasumi-1细胞生长,并呈时间依赖(2.5μmol/L组r=0.9057,5μmol/L组r=0.9897,10μmol/L组r=0.9994)。塞利尼索可诱导Kasumi-1细胞凋亡,且呈浓度依赖(r=0.9732),随着药物浓度的增大,诱导Kasumi-1细胞凋亡的作用越明显。塞利尼索作用于Kasumi-1细胞48 h后,G0/G1期细胞比例明显上升,S期细胞比例明显下降,并且随着塞利尼索药物浓度的增大,Kasumi-1细胞周期阻滞于G0/G1期的细胞比例增加,细胞合成减少。结论:塞利尼索可抑制Kasumi-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期,导致肿瘤细胞的死亡。

类风湿关节炎患者外周血T淋巴细胞亚群CD4^+/CD8^+表达的意义

目的探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+的表达变化对疾病进展的关系。方法采用流式细胞术检测94例RA患者和22例健康对照者外周血T淋巴细胞亚群CD4+/CD8+。其中94例RA患者按RA疾病活动指数(DAS28)评分分为低值、中值、高值3组。结果与健康对照组比较,RA组外周血中CD3+CD4+T淋巴细胞的表达率明显升高(P<0.05),其中CD3+CD4+T淋巴细胞在DAS28低值组为(41.03±9.53)%,DAS28中值组为(42.16±7.08)%,DAS28高值组为(43.72±9.63)%;CD3+CD8+T淋巴细胞表达率明显降低(P<0.05),其中CD3+CD8+T淋巴细胞在DAS28低值组为(21.33±6.67)%,DAS28中值组为(21.39±7.36)%,DAS28高值组为(21.28±6.60)%。结论CD4+/CD8+比值与RA患者疾病进程相关,表明CD4+/CD8+失衡在RA的发病中发挥了重要作用。

环氧化酶和多药耐药在肿瘤治疗中的研究及相互关系

环氧化酶 (COX)是前列腺素合成过程中的关键酶 ,研究发现它参与肿瘤的发生发展 ,并在一定程度上影响肿瘤的转归 ,对多药耐药 (MDR)基因的调控是它影响肿瘤转归的重要因素。了解COX在肿瘤中的作用 ,明确COX和MDR在肿瘤中的关系 ,对肿瘤治疗具有重要意义。

环氧化酶2抑制剂塞来昔布诱导NB4细胞凋亡的研究

目的研究环氧化酶2(COX-2)选择性抑制剂塞来昔布对髓性白血病细胞株NB4凋亡的影响,探讨塞来昔布诱导细胞凋亡的机制。方法 RT-PCR检测不同细胞系中COX-2mRNA表达,MTT法检测NB4细胞增殖抑制,DNA Ladder试验分析NB4细胞DNA片段化,流式细胞术检测NB4细胞Bcl-2蛋白的表达。结果与未加药处理组相比,不同浓度塞来昔布作用后DNA Ladder片段随浓度的增加而更为明显。不同用药组25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L塞来昔布组Bcl-2蛋白表达率分别为(71.69±1.65)%、(34.51±2.53)%和(29.28±2.38)%,与空白对照组Bcl-2蛋白表达率为85.34±2.89%相比,50μmol/L、100μmol/L塞来昔布组Bcl-2蛋白明显下降(P<0.05)。结论 COX-2选择性抑制剂塞来昔布通过下调NB4细胞Bcl-2蛋白表达致诱导其凋亡。

检测血小板参数在血小板减少性疾病中的意义

目的探讨血常规检测中血小板(PLT)计数、血小板平均体积(MPV)及血小板分布宽度(PDW)在血小板减少性疾病中的意义。方法使用雅培CD-1800全自动血细胞分析仪进行检测。结果与健康对照组相比,在疾病组中,再生障碍性贫血PLT计数降低(P<0.01),MPV降低(P<0.01),PDW无变化;而急性白血病PLT计数降低(P<0.01),MPV降低(P<0.01);PDW升高(P<0.01);特发性血小板减少性紫癜(ITP)组中,PLT计数减少(P<0.01),MPV升高(P<0.05),PDW升高(P<0.01)。结论PLT、MPV、PDW在血小板减少性疾病的鉴别诊断中有较大的临床应用价值。

免疫分型在单核细胞相关性急性髓细胞性白血病(M4/M5)鉴别诊断中的应用

目的探讨CD14、CD11b、CD64、CD4在鉴别诊断单核细胞相关性急性髓细胞性白血病(AML)(M4/M5)中的应用评价。方法采用流式细胞术分析420例急性髓细胞性白血病患者骨髓或外周血标本的免疫表型。结果在单核细胞相关性AML(M4/M5)中CD14、CD11b、CD64和CD4的表达率依次为45.4%、46.1%、83.0%和62.4%。与非单核细胞相关性急性髓细胞性白血病相比表达率高,差异有统计学意义(P<0.01)。其中CD14、CD11b特异性高(100%和91.8%),CD64敏感性高(83.0%)。结论 CD14、CD11b、CD64、CD4有助于M4/M5与其他AML各亚型的鉴别诊断。

呼吸道合胞病毒感染细支气管炎患儿外周血树突状细胞的数量及其与临床症状的相关性

目的检测呼吸道合胞病毒(RSV)感染细支气管炎患儿外周血髓样树突状细胞(mDC)及浆细胞样树突状细胞(pDC)的数量,并分析它们与疾病严重程度之间的关系。方法采用PCR方法检测鼻咽部分泌物的呼吸道合胞病毒。通过流式细胞仪检测71例RSV感染(轻度、中度和重度)细支气管炎患儿及48例正常婴幼儿外周血mDC及pDC的数量。结果 RSV感染细支气管炎患儿外周血mDC数量明显高于正常婴幼儿(P<0.01),pDC数量明显低于正常婴幼儿(P<0.01)。重度RSV感染细支气管炎患儿入院时外周血mDC、pDC数量均明显低于轻度组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 RSV感染细支气管炎患儿早期外周血mDC明显升高、pDC降低。mDC数量越高,提示其病情越轻;pDC数量越低,提示喘息越重。

对抗中性粒细胞胞浆抗体的理解

1982年,在节段性坏死性肾小球肾炎患者血清中,Davies等首次发现一种IgG类性质的抗体,而这类抗体的靶抗原就是中性粒细胞胞浆抗原,又将其称为抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）。1985年,在Wegner肉芽肿（WG）患者血清中,Vander又发现其存在ANCA,他对ANCA与WG诊断的特异度给予肯定。从此以后,许多学者致力于其他血管炎与AN-CA的研究，如显微镜下多动脉炎（MPA）、Churg-Strauss综合征（CSS）等，他们发现ANCA与它们都有相关性，故认为ANCA可能是原发性小血管炎的血清标记抗体。

新生儿细菌性肺炎患者外周血自然杀伤细胞的数量变化及其临床意义

目的检测新生儿细菌性肺炎患者外周血总自然杀伤细胞(NK细胞)及其各亚群百分率的变化,探讨NK细胞在其发病中的临床意义。方法采用流式细胞术检测38例新生儿细菌性肺炎患者及18例正常新生儿的总NK细胞及其各亚群占外周血总淋巴细胞百分率,住院天数在10 d以内(含10 d)为A组、住院天数10 d以上为B组;入院时外周血白细胞的数量<5.0×109/L或>20.0×109/L者为重度感染组,5.0×109/L<外周血白细胞数量<20.0×109/L者为轻度感染组。结果新生儿细菌性肺炎患者外周血总NK细胞及CD3-CD56negCD16bright百分率低于正常新生儿(P<0.01),但NK细胞CD3-CD56bright CD16neg/dim及CD3-CD56dimCD16bright亚群差异无统计学意义。A组CD3-CD56negCD16bright亚群百分率低于正常新生儿(P<0.01),而总NK细胞及其他亚群则差异无统计学意义。B组总NK细胞及CD3-CD56negCD16bright亚群百分率低于正常新生儿(P<0.01),且B组总NK细胞及各亚群百分率低于A组(P<0.05)。重度感染组总NK细胞及其各亚群百分率明显低于轻度感染组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论新生儿细菌性肺炎患者病情越重住院时间越长,总NK细胞及其各亚群百分率越低。

血清胸苷激酶1在儿童急性淋巴细胞白血病诊疗中的应用

目的探讨血清胸苷激酶1(sTK1)在儿童急性淋巴细胞白血病临床诊疗中的应用。方法采用免疫印迹增强化学发光法检测39例急性淋巴细胞白血病儿童患者化疗前、化疗后的sTK1浓度及30例同期健康体检儿童的sTK1浓度。结果患儿组化疗前的sTK1浓度明显高于化疗后完全缓解组、部分缓解组及对照组,差异有统计学意义(P<0.01);化疗后不同疗效组(完全缓解组、部分缓解组、未缓解组)之间sTK1浓度差异有统计学意义(P<0.01);未缓解组与化疗前的sTK1浓度差异无统计学意义(P>0.05);化疗前sTK1阳性检出率明显高于化疗后及对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 sTK1的检测对于儿童急性淋巴细胞白血病的筛查、辅助诊断、化疗效果的评估具有重要参考价值。

乙型肝炎血清两对半与HBV-DNA检测相关性探讨

目的探讨乙型肝炎(下称乙肝)两对半与HBV-DNA含量的关系。方法392份血清用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定乙肝病毒(HBV)两对半,用FQ-PCR法检测HBV-DNA含量。结果乙肝两对半模式不同血清型的HBV-DNA阳性率不同,HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗-HBc(+)最高,其HBV-DNA检出率为96.1%,对数均值为7.8±2.25;HBsAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc(+)的HBV-DNA检出率为37.8%,对数均值为4.5±1.07;而HBsAg(+)、抗-HBc(+)的HBV-DNA的检出率为76.5%,对数均值为3.4±0.86。结论3种血清型的HBV-DNA检出率差异有统计学意义,并且拷贝数差异也有统计学意义。

多发性骨髓瘤患者血清β_2-微球蛋白检测的临床意义

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者血清β2-微球蛋白(β2-MG)测定的临床意义。方法采用酶联免疫吸附试验法测定血清标本中的β2-MG值。结果MM初发组β2-MG为(6131±2770)μg/L,明显高于对照组β2-MG(2540±908)μg/L,差异有统计学意义(P<0.05)。MM治疗有效组β2-MG(3150±1920)μg/L与MM初发组β2-MG(6131±2770)μg/L相比较,β2-MG明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清β2-MG可作为MM患者预后及疗效判断的指标。

PI3K/AKT/mTOR信号通路与类风湿关节炎的相关性

目的探讨类风湿关节炎(RA)不同活动期进程与PI3K/AKT/mTOR信号通路的相关性,为临床寻找诊疗RA新的理论依据。方法按RA疾病活动指数(DAS28)分为低、中、高度活动期共60例,其中低度活动期(L组)22例,中度活动期(M组)20例,高度活动期(H组)18例,同时采集同期门诊25例健康体检者外周血作为健康对照组,通过FQ-PCR检测外周血单个核细胞(PBMC)中PI3K/AKT/mTOR信号通路PI3K、AKT、mTOR基因mRNA表达水平;并通过蛋白免疫印迹法检测PI3K/AKT/mTOR蛋白表达变化。结果 L组、M组、H组中PI3K的mRNA分别为2.04±0.74、4.05±0.46、2.18±0.25,均高于健康对照组0.49±0.13,差异有统计学意义(P=0.020、0.009、0.019)。M组高于L组、H组,差异有统计学意义(P=0.018、0.031)。L组、M组、H组中AKT的mRNA分别为0.46±0.32、0.83±0.42、0.65±0.38,均高于健康对照组0.23±0.21,差异有统计学意义(P=0.030、0.017、0.027)。L组、M组、H组中mTOR的mRNA分别为0.94±0.12、1.12±0.23、0.94±0.30均高于健康对照0.32±0.06,差异有统计学意义(P=0.003、0.002、0.001)。与健康对照组比较,L组、M组、H组RA患者PBMC中PI3K蛋白表达降低,分别为0.44±0.11、0.14±0.02、0.06±0.01,差异有统计学意义(P=0.008、0.005、0.001)。与健康对照组比较,L组、M组、H组RA患者PBMC中AKT蛋白表达升高,分别为2.51±0.11、18.29±4.52、15.13±3.28,差异有统计学意义(P=0.035、0.001、0.002)。与健康对照组比较,M组、H组RA患者PBMC中m TOR蛋白表达升高,分别为31.5±7.52、35.13±8.62,差异有统计学意义(P=0.002、0.001)。L组(1.25±0.13)与健康对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PI3K/AKT/mTOR信号通路在RA不同活动组表达有差异,可能与RA的病情严重程度相关。

EPR-1和SURVIVIN基因及其异构体在急性白血病中的表达及意义

目的:探讨抗凋亡基因SURVIVIN及其异构体和天然互补序列EPR-1在急性白血病(AL)中的表达, 以及在AL的发生、预后等方面的意义。方法:采用RT-PCR方法检测86例初治AL患者SURVIVIN及其异构体SUR- VIVIN-2B、SURVIVIN-EX3、EPR-1基因的MRNA表达。结果:(1)本组AL患者SURVIVIN MRNA表达率为79．1％,高于正常对照组(31．3％)(P<0．01);(2)SURVIVIN阳性患者完全缓解率(CR)明显低于SURVIVIN阴性组(P<0．01);(3)AL 中存在SURVIVIN-2B、SURVIVIN-△EX3异构体分子;(4)EPR-1在正常人及大多数AL中均有表达,AL以SURVIVIN+/ EPR-1+表达模式为主。结论:在AL中SURVIVIN高表达且与预后有关,并以SURVIVIN+/EPR-1+表达模式为多见; SURVIVIN-2B、SURVIVIN-△EX3可能参与SURVIVIN介导的凋亡调控。

支气管哮喘患者外周血Th17细胞及相关趋化因子表达水平检测

目的探讨支气管哮喘患者外周血Th17细胞及相关趋化因子表达水平与肺功能的关系。方法选取60例支气管哮喘患者分为急性发作组和缓解组,每组各30例,另选取健康体检者30例为对照组。采用流式细胞术检测三组人群外周血中Th17细胞(CD4+IL-17+)上CCR4、CCR6表达水平,用ELISA法检测患者血清中总IgE、IL-17、IL-23、CCL20的蛋白表达水平。结果 1急性发作组哮喘患者外周血Th17细胞CCR4、CCR6表达水平明显高于缓解组哮喘患者(P<0.05),缓解组哮喘患者外周血Th17细胞CCR4、CCR6表达水平高于健康对照组(P<0.05);2急性发作组哮喘患者外周血血清中总IgE、IL-17、IL-23、CCL20的蛋白表达水平明显高于缓解组哮喘患者(P<0.05),缓解组哮喘患者外周血血清中总IgE、IL-17、IL-23、CCL20的蛋白表达水平高于健康对照组(P<0.05);3CCR4、CCR6表达水平与患者的总IgE、IL-17、IL-23、CCL20的蛋白表达水平正相关(P<0.05)。结论支气管哮喘患者外周血中Thl7细胞相关趋化因子CCR4、CCR6表达增高并与Th17细胞造成的炎症损伤有关。

核仁素通过调控胸苷激酶1影响淋巴瘤增殖的研究

目的:探讨核仁素通过胸苷激酶1(TK1)参与淋巴瘤增殖调控的机制。方法:选取弥漫性大B细胞淋巴瘤患者23例,纳入初治组14例,复发/难治组9例,检测患者血清TK1以及外周血单个核细胞中C23蛋白。以Burkitt淋巴瘤细胞株CA46为研究对象,通过慢病毒介导的转染方法,获得RNAi核仁素基因表达下调的细胞模型CA46-NCL-KD及阴性对照组细胞模型CA46-NCL-KNC;采用细胞增殖法(MTS法)分别检测CA46-NCL-KD、CA46-NCL-KNC和CA46对阿霉素的增殖半数抑制率(IC_(50))。通过Q-PCR和Western blot分别检测CA46-NCL-KD、CA46-NCL-KNC细胞NCL mRNA和蛋白表达水平,用流式细胞术对CA46-NCL-KD、CA46-NCL-KNC和CA46细胞进行细胞周期检测,用酶免疫点印记化学发光法分析CA46-NCL-KD、CA46-NCL-KNC细胞TK1蛋白的表达情况。结果:初治组患者血清TK1水平为0.43(0.30-1.01)pmol/L,低于复发/难治组患者的10.56(2.19-14.99)pmol/L(P<0.01),且初治组患者外周血单个核细胞NCL蛋白相对表达量明显低于复发/难治组。CA46-NCL-KD对阿霉素的IC_(50)为(0.147±0.02)μg/ml,明显低于CA46-NCL-KNC的(0.301±0.04)μg/ml以及CA46的(0.338±0.05)μg/ml(P<0.05);与CA46-NCL-KNC相比,CA46-NCL-KD中NCL mRNA和蛋白水平表达下降,细胞周期中的G0/G1期比例升高,S期及G2/M期比例下降,TK1蛋白表达下降。结论:在弥漫大B细胞淋巴瘤细胞以及淋巴瘤细胞株CA46细胞中NCL表达升高,提示细胞对药物敏感度降低,NCL可能通过影响TK1表达参与淋巴瘤细胞增殖的调控,从而影响淋巴瘤细胞对药物的敏感性。

漳州市妇女宫颈标本中人乳头瘤病毒高危基因亚型分布

目的 研究漳州市妇女宫颈标本中人乳头瘤病毒（HPV）的高危基因亚型流行情况。方法 选取漳州市医院2015年1月～12月参加子宫颈癌筛查高危亚型HPV感染者,对其采用反向寡核苷酸探针斑点杂交联合聚合酶链反应（PCR）技术,分析其高危基因亚型。结果 本次参加筛查人数为9 906人,其中HPV高危亚型阳性为1 600人,总感染率为16.15%,患者平均年龄（40.2±8.9）岁。年龄小于25岁组感染率高于其他年龄组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。高危基因亚型前3位分别为HPV16、52和58,所占比例分别为19.81%、15.31%和12.86%;2联及以上混合感染为333人,占所有感染者比例为20.81%;高危基因亚型HPV混合感染中,年龄小于25岁组感染率高于其他年龄组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 漳州市女性人群具有较高的高危基因亚型HPV感染率,常见的高危基因亚型当中,占据主导地位的是HPV16、52、58;低年龄组具有较高的多重基因亚型混合感染率及HPV感染率。

TK1检测对常见恶性肿瘤诊断的临床应用

目的探讨胸苷激酶1(TK1)对常见恶性肿瘤诊断的临床应用。方法采用酶免疫点印迹化学发光法检测444例肿瘤患者和161例健康体检者(对照组)血清中TK1水平。结果与对照组比较,肺癌、消化道肿瘤、乳腺癌患者血清TK1水平均显明显升高(P<0.05)。肺癌、食管癌、结肠癌、直肠癌、乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌患者TK1检测阳性率,分别为52.0%、59.6%、62.9%、60.0%、62.1%、32.3%、21.4%、11.0%。与对照组(TK1检测阳性率为0.0%)比较,肺癌、消化道肿瘤、乳腺癌TK1检测阳性率明显升高(P<0.01)。结论血清TK1检测在常见恶性肿瘤的辅助诊断上是一个有价值的指标。

Ki-67、中性粒细胞与淋巴细胞比率、纤维蛋白原联合检测对非霍奇金淋巴瘤的诊断价值

目的探讨Ki-67、中性粒细胞与淋巴细胞比率(NLR)和纤维蛋白原(FIB)在非霍奇金淋巴瘤(NHL)诊疗中的作用。方法选取2020年1月至2022年12月福建医科大学附属漳州市医院收治的患者作为研究对象,其中68例NHL患者作为试验组,57例淋巴结反应性增生患者作为对照组。NLR采用过氧化物酶染色进行检测,FIB采用透色比浊法进行检测,Ki-67采用免疫组织化学染色法进行检测,比较两组患者的NLR、FIB的表达情况,Ki-67、NLR、FIB单独检测以及联合检测诊断NHL的敏感度、特异度;采用受试者工作曲线(ROC)分析Ki-67、NLR、FIB对NHL患者的诊断效能。结果试验组Ki-67、NLR、FIB均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);NLR单独检测时,其敏感度为75.44%,特异度为71.67%;FIB单独检测时,其敏感度为96.49%,特异度为30%;NLR、FIB联合检测时,敏感度为77.19%,特异度为68.33%;Ki-67单独检测时,敏感度为56.56%,特异度为77.78%;NLR、FIB、Ki-67联合检测时,敏感度为77.27%,特异度为96.83%。NLR、FIB、Ki-67联合检测的特异度、AUC高于单独检测值。结论Ki-67、NLR和FIB联合检测可有效提升检测的敏感度和特异度,可作为辅助诊断NHL的血液标志物。