黄素化颗粒细胞分离提纯方法的比较研究

目的 比较不同人卵巢颗粒细胞分离提纯方法的效果。方法 收集体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者取卵后的卵泡液,分别采用密度梯度离心法、红细胞裂解法、密度梯度离心法+红细胞裂解法分离、提取黄素化颗粒细胞,比较3种方法获取的细胞数量、存活率、纯度以及生长、贴壁情况。结果 密度梯度离心法获取的颗粒细胞数量最低,但体外培养生长状态良好且细胞贴壁状态最佳;红细胞裂解法获取的颗粒细胞数量均多于其他两种方法(P<0.05),但细胞存活率低,体外培养生长状态欠佳、细胞贴壁差;卵泡刺激素受体(FSHR)细胞免疫组化及荧光鉴定显示3种方法获取的颗粒细胞纯度均>90%。结论 密度梯度离心法获取的细胞数目少,但生长状态及贴壁情况最佳,是分离提纯颗粒细胞较为理想的选择方法。

GnRH拮抗剂联合来曲唑和米非司酮对体外培养的人颗粒细胞功能的影响

目的探讨促性腺激素释放激素拮抗剂(GnRH-ant)联合来曲唑和米非司酮对体外培养的人卵巢颗粒细胞功能及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法体外培养人原代卵巢颗粒细胞及人卵巢颗粒细胞系KGN,根据所用药物不同分为GnRH-ant、来曲唑、米非司酮以及上述三种药物联合用药组,药物干预后检测细胞活力、细胞凋亡、培养液中雌二醇(E 2)及孕酮(P)水平及VEGF的表达。结果(1)GnRH-ant、来曲唑、米非司酮三种药物均可以不同程度地抑制原代颗粒细胞和KGN细胞的活力、促进颗粒细胞凋亡,其中联合用药组的作用最强(P<0.05);(2)GnRH-ant、来曲唑、米非司酮三种药物均可以不同程度地抑制原代颗粒细胞和KGN细胞E 2、P分泌水平,其中联合用药组E 2、P水平最低且差异有统计学意义(P<0.05);(3)GnRH-ant、来曲唑、米非司酮三种药物均可以不同程度地抑制原代颗粒细胞和KGN细胞VEGF表达,其中联合用药组VEGF mRNA及蛋白表达水平最低(P<0.05)。结论GnRH-ant联合来曲唑和米非司酮可以有效地抑制颗粒细胞活力、减少类固醇激素分泌及降低VEGF的表达水平。

骨桥蛋白在体外对小鼠子宫内膜蜕膜化的调节作用

目的探讨骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是否参与体外诱导小鼠子宫内膜基质细胞(mouse endometrial stromal cells,mESCs)蜕膜化的过程及其调节作用。方法采用雌激素(10 nmol/L)和孕酮(1μmol/L)处理mESCs进行体外诱导蜕膜化,检测OPN的表达变化。设立Opn质粒过表达组及Opn shRNA敲减组,分别将Opn过表达质粒和Opn shRNA转染mESCs,同时设立阴性对照组,采用实时定量PCR及Western blotting法检测转染效率;CCK-8法检测每组细胞的增殖情况;采用实时定量PCR和Western blotting法检测小鼠子宫内膜蜕膜化标志分子蜕膜/滋养层催乳素相关蛋白(decidual/trophoblast-layer prolactin related protein,Dtprp)和血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,Vegfa)及其受体2(vascular endothelial growth factor A receptor 2,Vegfr2)表达情况。结果雌激素+孕酮诱导蜕膜化mESCs中Dtprp(P<0.001)、Vegfa(P=0.004)和Vegfr2(P=0.002)mRNA水平显著增加,同时Opn mRNA(P=0.002)和OPN蛋白(P<0.001)的表达水平也显著增加;Opn过表达可促进mESCs细胞增殖(P=0.004),而敲减Opn可抑制mESCs细胞增殖(P=0.008);转染Opn过表达质粒可进一步促进蜕膜化mESCs中Dtprp(P<0.001)、Vegfa(P=0.021)和Vegfr2(P=0.012)的mRNA表达,同时Vegfa蛋白水平也显著增加(P=0.001);敲减Opn后,则可降低蜕膜化mESCs中Dtprp(P=0.009)、Vegfa(P=0.007)和Vegfr2(P=0.001)的mRNA表达,VEGFA蛋白的表达水平也相应降低(P<0.001)。结论OPN参与调节小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化进程及功能。

多囊卵巢综合征合并代谢紊乱的炎症机制

多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是育龄期妇女最常见的内分泌代谢紊乱疾病。2013年流行病学研究显示,我国育龄妇女PCOS的患病率约为5.6%[1]。由于PCOS的高度异质性,目前尚无统一的诊断标准。国际上最常用的是2003年发布的鹿特丹标准,即稀发排卵或无排卵、高雄激素血症或高雄激素的临床表现、卵巢多囊样改变(一侧或双侧卵巢直径2~9 mm的卵泡≥12个,或卵巢体积≥10 cm3),以上3条中符合2条,并排除非典型性肾上腺皮质增生、皮质醇增多症、垂体催乳素瘤、甲亢等其他导致雄激素升高和月经稀发的疾病即可诊断为PCOS。尽管肥胖、胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)、脂代谢紊乱、高血压等临床表型并不属于PCOS的诊断标准,但它们往往与PCOS共存,并使PCOS患者心血管疾病、2型糖尿病等远期健康风险增加[2]。越来越多的证据支持PCOS及代谢紊乱疾病与全身慢性炎症相关,因此本文论述了PCOS与代谢紊乱疾病的关系,以及慢性炎症在其中的作用机制,有助于寻找PCOS发生代谢紊乱的治疗靶点,为PCOS远期并发症的防治、改善PCOS患者的生活质量提供临床指导。