羊肉中貉源成分Real-time PCR检测方法的建立

[目的]检测羊肉中是否含有貉肉成分。[方法]通过实时荧光定量PCR方法,以cytB为靶基因设计特异性检测引物,选取8个不同物种的肌肉组织样本为研究对象,根据其ΔCt值函数关系进行线性拟合建立标准曲线。[结果]该检测方法所用引物能将貉与其他物种区分,特异性较强,且最低检测限可达到3.2 pg/μL,回收率在97.71%~104.36%,组内变异系数≤0.28%,组间变异系数≤1.08%。[结论]该研究建立的羊肉中貉肉源成分实时荧光定量检测方法具有良好的特异性和敏感性,可用该方法检测实际羊肉样品中是否有貉肉源成分,为羊肉制品掺假的检测提供简单快捷准确的技术手段和执法依据。

河北省某野生动物园园养动物人五毛滴虫感染调查

为了解河北省某野生动物园园养草食动物和肉食动物人五毛滴虫感染情况,本试验共采集动物园内新鲜动物粪便88份,用直接涂片法和碘液染色法观察毛滴虫的形态结构;PCR法对其18S rRNA基因序列进行扩增,阳性产物测序后进行序列比对分析。结果显示,高倍镜下直接涂片镜检虫体呈半透明的卵圆形或梨形,碘液染色时可清晰的看到虫体的鞭毛结构;88份粪便样品中共检出人五毛滴虫阳性样本5份,总阳性率为5.7%(5/88)。其中草食动物粪便样本70份,感染率为4.3%(3/70);肉食动物粪便样品18份,感染率为11.1%(2/18),感染动物为梅花鹿、黇鹿、驴和长臂猿。分离菌株的18S rRNA基因序列与GenBank中登录的人五毛滴虫处于同一分支且相似性高达99%。本调查结果表明该野生动物园园养动物体内有人五毛滴虫的感染,存在着人兽共患的风险,应采取相应的防制措施。

5种中草药体外抗人五毛滴虫作用研究

为了筛选对人五毛滴虫具有杀灭或抑制作用的中草药,试验选取了黄连、鸡冠花、金莲花、青蒿和蛇床子5种中草药,将其分别制成4种浓度,黄连和鸡冠花分别为10,5,2.5,1.25 mg/mL,金莲花为40,20,10,5 mg/mL,青蒿和蛇床子为8,4,2,1 mg/mL,各种药物按浓度分组,分别与人五毛滴虫一同进行体外培养,同时设置无药对照组,观察不同药物不同浓度作用下人五毛滴虫的生长、死亡情况,计算死亡率。结果表明:5种中草药均具有杀灭或抑制人五毛滴虫的作用,黄连、鸡冠花、金莲花和青蒿均能杀灭人五毛滴虫,其最低有效浓度分别为5,5,20,8 mg/mL。蛇床子不能杀灭人五毛滴虫,但具有一定抑制作用;5种中草药体外杀灭人五毛滴虫的作用强度为鸡冠花>黄连>青蒿>金莲花>蛇床子。说明黄连、鸡冠花、金莲花和青蒿或可代替传统抗滴虫药物对人五毛滴虫进行驱杀。

猫源胎儿三毛滴虫的形态学观察及分子鉴定

旨在进一步鉴定从1例长期慢性腹泻猫粪便中新分离到的1株毛滴虫,分别对其进行了分离与体外培养、形态学观察及18S rRNA基因序列相似性分析。形态学观察结果显示,分离株毛滴虫呈梨形或纺锤形,且具有3根前鞭毛和1根后鞭毛,为胎儿三毛滴虫形态结构。18S rRNA基因序列与GenBank中三毛滴虫基因序列比对及系统进化树结果显示,分离的猫源毛滴虫序列与胎儿三毛滴虫MH400076.1处于同一分支,且相似性达到了99%。综合判定,从患有长期慢性腹泻猫的粪便中分离到的毛滴虫为胎儿三毛滴虫。

河北省貉子毛滴虫感染情况调查及超微结构观察

为了调查河北省貉子毛滴虫病的感染情况,本研究采用直接镜检法对2015年6月—2017年8月采集的680个患腹泻病貉子样品进行毛滴虫检测,并采用了瑞士染色,以及扫描电镜和透射电镜对其形态特征进行超微结构观察。结果显示患腹泻病貉子普遍存在毛滴虫感染,共检测腹泻貉子680只,毛滴虫感染率为54%(364/680),以夏秋季季节感染为主,其中2月龄以下貉子毛滴虫感染较为严重,阳性率为59.4%(199/335)。形态学观察结果表明,貉子体内的毛滴虫具有4根前鞭毛和1根独立鞭毛,为人五毛滴虫形态结构,表明貉子毛滴虫病由人体内的毛滴虫感染所致。该研究为河北省貉子毛滴虫病的防治提供重要参考依据。

基于PCR检测技术鉴别羊肉掺假的研究进展

肉制品掺假是肉类行业的常见问题,羊肉掺假在肉制品掺假中尤为常见,羊肉掺假损害消费者经济利益,危害人体健康,引发宗教信仰的担忧及恐慌,从而引起广泛关注。鉴别羊肉掺假的方法包括基于形态学检测方法、基于代谢物检测方法、基于蛋白质检测方法、基于核酸检测方法。但这些方法大多数存在无法定量检测,稳定性稍差,操作繁琐,操作要求高等局限性,使得基于核酸检测技术的PCR方法被越来越广泛地应用于羊肉掺假的鉴定中。对广泛用于羊肉掺假的几种PCR方法进行综述,旨在为羊肉及其肉制品掺假检测技术的研究提供参考。