通心络胶囊对脑梗死大鼠脑皮质血管新生和皮层神经元凋亡的影响

目的:探讨通心络胶囊对大鼠脑梗死皮层血管新生与神经元凋亡的影响。方法:M C A o大鼠分成通心络干预组与对照组,于梗死后第4天处死大鼠,免疫组化检测脑缺血皮质V E G F、V III因子及凋亡蛋白酶caspase-3表达,W estern blot半定量检测V E G F、caspase-3蛋白表达情况,TU N E L法检测梗死皮层神经元凋亡。结果:通心络干预组缺血皮质血管密度和V E G F阳性细胞数量均较对照组为高(P均<0.01)。W estern blot显示脑缺血皮层同侧V E G F121、V E G F165有明显表达,而缺血对侧表达很少;与对照组相比,通心络组缺血侧V E G F121、V E G F165蛋白表达均较对照组显著增高(P<0.01)。caspase-3免疫组化显示通心络组缺血侧阳性细胞数量较对照组为低;两组大鼠缺血侧与对侧皮层W estern blot均可显示出pre-caspase-3和活化的caspase-3两条带,以活化的caspase-3分析,对照组缺血侧caspase-3含量明显增高,而通心络组caspase-3含量明显降低,与对侧等其他各组间没有明显差异;TU N E L进一步显示通心络组缺血侧皮质细胞凋亡明显低于对照组(P<0.05)。结论:通心络胶囊通过增加V E G F表达而诱导脑梗死大鼠皮层血管增生,同时阻滞caspase-3活化而减轻神经元凋亡。

高血糖、胰岛素抵抗与脑缺血性损伤

目的:探讨急性脑梗死后高血糖与胰岛素抵抗的作用及相互关系。方法:选取我院非腔隙性脑梗死住院病人50例作为实验组,依据血糖水平将其分为A组22例(单纯性高血糖)及B组(血糖正常)28例。分别在起病24h内、48h、72h、5d及9d测定患者血清中的神经元特异性烯醇酶(NSE)作为脑缺血损伤的生化标志;同时在急性期和恢复期测定空腹血糖(FPG)及空腹胰岛素(FINS),分别计算胰岛素敏感指数(ISI)及NSE释放曲线下面积。结果:实验组NSE呈动态升高,ISI值明显降低,而A组ISI值降低更明显;A组与B组相比,NSE高峰后移及峰值加大;NSE曲线下面积主要与升高的血糖有关,而与血中胰岛素水平及ISI相关性不显著。结论:高血糖加重脑缺血性损伤:胰岛素抵抗是脑梗死的危险因素,但对脑损伤的作用不明显。

脑梗死大鼠原位神经干细胞的增殖和分化

目的研究成年大鼠脑梗死后原位神经干细胞的增殖和分化。方法运用BrdU标记法检测脑局灶梗死大鼠侧脑室下区(SVZ)与海马齿状回颗粒细胞层下区(SGZ)原位神经干细胞的增殖情况,运用荧光双标法检测其分化的细胞表型。结果SVZ BrdU+细胞数量于脑梗死后1 d开始升高(P<0.01),而SGZ BrdU+细胞则于梗死后4 d开始升高。SVZ与SGZ BrdU+细胞均于7 d达到高峰(P<0.01),14 d开始下降(P<0.01),至28 d后与对照组差异无显著性意义(P>0.05)。半定量显示脑梗死7 d后,SVZ与SGZ BrdU+细胞数分别较假手术组升高5倍和8倍。对原位神经干细胞分化的研究发现,脑梗死后35 d在梗死侧大脑半球,BrdU+细胞总数中约(73.5±15.7)%表达神经元细胞表型NeuN,(37.6±9.9)%表达胶质细胞表型GFAP。结论大鼠脑梗死能刺激原位神经干细胞的增殖并促进了神经再生。

嗅鞘细胞移植实验性自身免疫性脑脊髓炎后髓鞘碱性蛋白的表达和小胶质细胞的捕获

目的:研究嗅鞘细胞(OECs)移植实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)后髓鞘碱性蛋白(Myelin basic protein,MBP)的表达及小胶质细胞捕获OECs情况。方法:用新生近交系Wistar大鼠嗅球培养出OECs,经荧光染料羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记后注入同系EAE Wistar大鼠侧脑室,免疫组化检测OECs髓鞘碱性蛋白(MBP)、单核巨噬细胞诱导分子1(ED1)和CFSE共表达情况。结果:培养OECs不表达MBP,经侧脑室移植后在EAE大鼠脑内出现多量MBP+CFSE+细胞,同时在大脑广泛区域及血管周围间隙出现多量ED1+CFSE+细胞,与对照组相比差异显著。结论:OECs在EAE环境下表达MBP分子,其抗原能被脑内小胶质细胞或巨噬细胞捕获。

胚胎干细胞源性神经前体细胞移植脑缺血大鼠局部细胞的免疫反应

背景:神经前体细胞的免疫原性各家研究结果不一,尤其是体内移植后的机体免疫反应模式需要进一步研究。目的:体外观察神经前体细胞组成型及诱导型主要组织相容性抗原表达情况;体内观察神经前体细胞移植入大鼠脑缺血组织后局部免疫细胞活化情况,探讨神经前体细胞的移植排斥可能性及模式。方法:自pCX-hrGFP ES-D3胚胎干细胞诱导分化神经前体细胞,流式细胞术体外检测主要组织相容性抗原Ⅰ,Ⅱ类分子表达及γ-干扰素诱导前后表达变化。实验分3组,磷酸盐缓冲液组、神经前体细胞组分别于大脑中动脉缺血大鼠模型造模后经侧脑室给予磷酸盐缓冲液注射及神经前体细胞移植,假手术组不造模。免疫组化法观察纹状区ED1+、CD4+、CD8+细胞浸润情况;淋巴细胞再刺激增殖实验观测神经前体细胞诱导移植大鼠颈部淋巴细胞的增殖指数。结果与结论:神经前体细胞组成型高表达主要组织相容性抗原Ⅰ类分子,几乎不表达主要组织相容性抗原Ⅱ类分子;经γ-干扰素诱导后,主要组织相容性抗原Ⅰ类分子进一步上调,主要组织相容性抗原Ⅱ类分子亦有轻度上调,提示神经前体细胞有可能引起机体免疫反应。移植实验表明,与假手术组相比,磷酸盐缓冲液组及神经前体细胞组均表现强烈的ED1+、CD4+、CD8+细胞浸润(P<0.05),说明脑缺血损伤本身能导致局部免疫细胞活化;神经前体细胞组比磷酸盐缓冲液组有更强的ED1+、CD4+细胞浸润(P<0.05),提示神经前体细胞移植可能导致局部免疫更进一步活化,且以CD4+T细胞反应为主。磷酸盐缓冲液组及神经前体细胞组神经前体细胞诱导下的增殖指数值均较假手术组升高(P<0.01),但前两组增殖指数值比较差异无显著性意义(P>0.05),提示脑组织局部炎症导致颈部淋巴细胞增殖性增加,而离体神经前体细胞不足以单独刺激致敏淋巴细胞增殖。

鼠胚胎干细胞及其衍生神经前体细胞的免疫原性检测

目的:体外观察ES-D3鼠胚胎干细胞(mESCs)及其衍生神经前体细胞(NPCs)的免疫原性。方法:采用无血清培养法从mESCs诱导出NPCs,运用流式细胞仪检测mESCs及NPCs主要组织相容性复合物(MHC)Ⅰ、Ⅱ类分子的组成型表达,及γ干扰素(IFN-γ)诱导作用下MHC分子诱导型表达情况。结果:mESCs在未分化前少量表达MHC-Ⅰ分子但几乎无MHC-Ⅱ分子表达,经诱导分化成NPCs后MHC-Ⅰ分子表达明显上调但MHC-Ⅱ分子仅微弱增加;运用IFN-γ诱导ESCs及NPCs,二者MHC-Ⅰ分子表达进一步增加,而NPCs MHC-Ⅱ分子也呈现相当程度上调。结论:ESCs及其衍生的NPCs具有一定免疫原性,体内移植之后可能引起针对MHC Ⅰ类或Ⅱ类抗原的移植排斥。

大鼠嗅鞘细胞免疫抗原分子检测

目的:研究大鼠嗅鞘细胞(OECs)表面免疫抗原分子的表达。方法:培养OECs,流式细胞仪检测其表面主要组织相容性抗原I、II类(MHC-I、MHC-II)分子表达情况,免疫细胞化学法检测髓鞘碱性蛋白(MBP)、髓鞘含脂质蛋白(PLP)、髓鞘结合糖蛋白(MAG)的表达情况。结果:OECs高表达MHC-I分子(78.4±4.45)%,中等表达MHC-II分子(43.2±2.98)%,不表达MBP、PLP、MAG等髓鞘蛋白。结论:OECs高表达的MHC分子可能诱导异体OECs移植的免疫反应,但MBP、PLP、MAG等自身抗原的缺如使其在自体移植治疗自身免疫性脱髓鞘病中有一定应用前景。

缺血性脑血管病与血管生成

脑组织缺血后梗死灶周各种血管生成生长因子及其受体表达上调,同时血管内皮细胞增殖和微血管新生,血管新生的程度与患者的预后明显相关。给予血管生成生长因子能起到促进脑血管生长、神经功能恢复和改善预后的作用,从而为脑缺血疾病的治疗提供了新的思路。

实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠嗅鞘细胞移植排斥反应研究

目的研究嗅鞘细胞(OECs)的免疫原性及移植实验性免疫性脑脊髓炎(EAE)后颈淋巴系统的反应。方法用新生ICR小鼠嗅球培养出OECs,流式细胞术(FCM)检测其表面主要组织相容性抗原I、II类(MHC-I、MHC-II)诱导型和组成型表达情况。将经荧光染料CFSE标记OECs悬液或PBS注入EAE发病大鼠,收集注射7d后颈部淋细胞,FCM检测CFSE+、抗原提呈细胞标志物CD83+及CFSE+CD83+的表达率,混合淋巴细胞培养检测淋巴细胞增殖率(PI)。结果 OECs组成型表达少量MHC-I分子但几乎不表达MHC-II分子,但能在IFN-γ作用下能显著上调这二类分子。移植实验显示移植OECs的EAE大鼠颈部淋巴结中CD83+、CFSE+及CD83+CFSE+检出率及OECs诱导的PI值均高于对照组或正常大鼠(P<0.05)。同时,PBS注射的EAE大鼠,较正常大鼠亦有较高的CD83+检出率及PI值(P<0.05)。结论 OECs组成型或诱导型表达的MHC分子提示OECs有一定免疫原性,移植后局部淋巴系统可出现针对OECs的抗原引流、提呈及T细胞的活化,进一步分析提示这种免疫反应的启动依赖于EAE的炎性环境。

胚胎干细胞源性树突状细胞对同源性神经前体细胞脑内移植耐受诱导

目的:观察脑缺血环境下胚胎干细胞源性树突状细胞(es DCs)能否诱导同源性神经前体细胞(NPCs)的移植耐受。方法:分别自129/svj p CX-e GFP ES-D3诱生NPCs及129/svj ES-D3诱生es DCs。线栓法制作MCAo模型SD大鼠并相应分为预处理组及对照组,术后1周预处理组经尾静脉注射es DCs而对照组注射PBS,两组动物在预处理1周后侧脑室注射NPCs,2周后(MCAo术后4周)免疫组化观察纹状区CD4+、CD8+、ED1+细胞的分布差异,MTT法观察颈部淋巴细胞增殖性(PI),逆转录PCR(RT-PCR)半定量局部IL-10、IFN-γmRNA表达差异,荧光显微镜观察GFP标记NPCs海马存活率。结果:预处理组大鼠,CD4+细胞浸润显著低于对照组(134.7±36.2 vs 198.8±59.6,P<0.05),NPCs存活率显著高于对照组(P<0.05),但预处理组对ED1+(298.8±75.9 vs 302.2±88.5)、CD8+(145.8±45.4 vs 134.3±39.0)细胞浸润、局部细胞因子mRNA IFN-γ(1.697±0.273 vs 1.829±0.250)、IL-10(1.147±0.260 vs 1.264±0.119)及外周淋巴细胞增长率(PI,1.245±0.211 vs1.331±0.235)无明显影响。结论:es DC可能通过降低局部CD4+细胞反应诱导针对同源性NPCs免疫耐受,尚无确切证据表明细胞因子途径参与该过程,确切的机理尚需更深入研究。

呼吸道合胞病毒毛细支气管炎的并发症及危险因素

目的 研究呼吸道合胞病毒 (RSV)毛细支气管炎 (毛支 )的合并症及危险因素。方法 收集并分析我院 5d～ 2 8个月RSV毛支 2 13例患儿临床资料。结果 5d～ 6个月患儿合并症的发生率 (6 5 .4 5 % )最高 ,而 6个月～ 1岁合并症发生率明显高于 1岁以上儿童 ;并中重度贫血的RSV毛支患儿易发生心力衰竭 (6 5 % ) ;早产儿RSV毛支患儿易并心力衰竭 (5 7.89% )和呼吸衰竭 (2 6 .32 % )。结论 RSV毛支易并心、脑、胃肠道损伤 ,贫血、早产。

微创颅内血肿抽吸引流术并发气颅13例分析

目的分析微创颅内血肿抽吸引流术治疗脑出血并发气颅的临床特点.方法回顾性分析13例微创颅内血肿抽吸引流术治疗脑出血并发气颅患者的临床和影像学资料.结果本组患者表现头痛5例,颅高压1例,无症状7例;气颅发生率为10.6%,积气量2.1～35 ml,平均4.7 ml;根据CT表现分型为蛛网膜下腔型3例(23.1%)、脑室型4例(30.8%)、脑实质型9例(70%)和混合型3例(23.1%);1例行侧脑室排气,12例未予特殊治疗,积气8～19 d基本吸收.结论气颅主要发生于脑实质,少量积气大多症状较轻,不需特殊治疗,术中和围手术期应严格按规范操作以避免医源性气颅的发生.

17β羟基类固醇脱氢酶13和线粒体融合蛋白2在肝细胞癌组织中的表达变化及生物信息学分析

目的探索17β羟基类固醇脱氢酶13(HSD17B13)和线粒体融合蛋白2(MFN2)在临床肝细胞癌(以下简称肝癌)组织样本中的表达变化及临床意义;同时采用生物信息学方法,进行目标基因分析。方法选取2017年9月-2018年3月于福建省立医院接受手术治疗的15例肝癌患者,手术后获取肝癌及其周围癌组织进行实验研究。通过实时荧光定量PCR及Western Blot法检测HSD17B13和MFN2基因在肝癌组织和癌旁组织中的表达变化情况,并分析其临床意义。采用单细胞测序数据库、GTEx数据库及TCGA数据库分析HSD17B13和MFN2在肝癌组织中的表达量、肝癌不同分期的表达水平及与肝癌总体生存的关系,并分析二者之间的相关性。符合正态分布的计量资料两组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析;非正态分布的计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U检验,多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验。采用log-rank检验变量对生存率的影响,Kaplan-Meier法绘制生存曲线。采用Pearson相关分析检验两个变量之间的关系。结果实时荧光定量PCR及Western Blot检测结果显示,相对于癌旁组织,HSD17B13和MFN2基因在肝癌组织中的表达明显下调(PCR检测t值分别为-2.467、-3.933,P值分别为0.020、0.001;Western Blot检测t值分别为-5.357、-5.771,P值分别为0.006、0.026)。生物信息学分析结果表明,肝癌组织中HSD17B13表达明显下调(P<0.05);随着肝癌分期越高,HSD17B13表达水平越低(F=3.220,P=0.023);低HSD17B13表达与不良生存相关(风险比=0.630,P=0.011);在肝癌组织中,MFN2与HSD17B13表达呈显著正相关(r=0.190,P<0.001)。结论MFN2与HSD17B13在肝癌中表达下调,是潜在的具有临床相关性的抑癌基因,可能参与肝癌发生发展过程中的生物学行为,也可成为肝癌筛查、临床分级、预后评估的分子标志物及有效的肝癌治疗靶点。

慢性乙型肝炎合并非酒精性脂肪肝的临床和实验室特征

目的:探讨慢性乙型肝炎(CHB)合并非酒精性脂肪肝(NAFLD)患者的临床特征和脂质代谢情况,为预防和控制CHB合并NAFLD患者提供理论依据。方法:选取2016年12月-2018年12月在福建省立医院感染科就诊的56例单纯CHB患者(单纯CHB组)和57例CHB合并NAFLD患者(CHB合并NAFLD组)。比较两组的人体测量指标、血糖、血脂、肝功能、甲胎蛋白(AFP)、铜蓝蛋白(Cp)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA),评估CHB患者中NAFLD发生的危险因素。结果:CHB合并NAFLD组的体重指数(BMI)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)、白细胞(WBC)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、载脂蛋白B(Apo-B)均高于单纯CHB组,年龄、Cp、HBeAg阳性率均低于单纯CHB组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组病毒载量和其他实验室参数比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。logistic回归分析显示,年龄、HBeAg阳性、抗病毒治疗、血小板(PLT)是CHB患者发生NAFLD的独立影响因素(P<0.05)。结论:CHB患者的肝脏脂肪变性与代谢因素、肝功能损伤有关,尤其是脂质代谢异常,病毒因素可能对脂肪肝的发展起保护作用,所以有必要改善这些因素,以有效预防CHB患者的肝脂肪变性。

儿童抗接触相关蛋白2抗体自身免疫性脑炎1例并文献复习

目的探讨抗接触相关蛋白2(Caspr2)抗体自身免疫性脑炎的临床特点。方法回顾1例Caspr2抗体脑炎患儿的临床资料,并复习相关文献。结果女性患儿,5岁,表现为近期记忆力下降、易动怒、认知功能受损、幻觉、睡眠紊乱等;血清Caspr2抗体阳性,除外其他疾病后诊断Caspr2抗体脑炎。文献检索到资料完整的Caspr2抗体脑炎50例,男43例、女7例,起病年龄最小为本例患儿5岁,另有1例8岁,其余均为成人起病;边缘性脑炎32例(62. 75%),莫旺综合征19例(37. 25%);最常见的临床症状是记忆受损,癫痫发作,精神症状如焦虑、淡漠、易激惹、幻觉或妄想、周围神经高兴奋性、小脑共济失调及自主神经紊乱等;痊愈或好转44例(86.27%),合并肿瘤8例(15.69%),复发8例(15.69%)。结论 Caspr 2抗体脑炎比较少见尤其是儿童罕见,如患者有边缘性脑炎症状,且合并周围神经高兴奋性、共济失调、自主神经症状等需考虑Caspr2抗体脑炎可能。

婴幼儿呼吸道合胞病毒感染的免疫机制

呼吸道合胞病毒 (RSV)感染的发病机制尚未完全阐明 ,免疫系统在其发病中可能占重要地位。现就免疫细胞。

不同年龄小儿化脓性脑膜炎临床分析

目的比较婴儿和年长儿化脓性脑膜炎(化脑)临床特点的差异。方法对43例确诊为化脑的患儿临床资料进行回顾性分析。根据年龄分成2组,对2组原发病和基础疾病、临床表现、实验室检查、并发症及预后进行比较。结果婴儿期化脑原发感染以肺炎多见,临床表现以前囟饱满或紧张、抽搐常见,外周血中性粒细胞百分比及脑脊液白细胞数低于年长儿,并发症及病死率均高于年长儿。结论与年长儿相比,前囟饱满紧张为婴儿期的化脑常见而特有的体征,其次为抽搐,其他临床表现及脑脊液改变相对不典型,且并发症多、病死率高。应重视婴儿期化脑的早期诊断、治疗及随访。

缺血性脑血管病的神经保护治疗研究进展

缺血脑保护治疗是个非常笼统的概念,因为每一种治疗措施或者方法最终的目的都是达到脑保护,因而它既不单指某种脑保护剂,也不是单指某项措施,而是一个系统工程,即通过各种手段、方法达到挽救除不可逆坏死以外的所有具有潜在生存能力的神经细胞.

脂肪来源干细胞移植促进大鼠脑梗死周边区皮质结直肠癌缺失蛋白(DCC)和神经丝蛋白200(NF-200)的表达

目的研究脂肪来源干细胞(ADSC)移植对大鼠脑梗死周边区皮质中结直肠癌缺失蛋白(DCC)和神经丝蛋白200(NF-200)表达的影响。方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组和ADSC组。采用改良Longa线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞脑梗死模型。ADSC组大鼠于造模后24 h经颈动脉注射入50μL用PKH-26标记的ADSC悬液(含约2×10^6个细胞),模型组大鼠注射等剂量的生理盐水。于造模后第7、14天,在荧光显微镜下观察脑组织中ADSC的迁移情况,采用Western blot法检测脑梗死周边区皮质DCC、 NF-200的蛋白水平,免疫荧光法检测脑梗死周边区皮质中DCC、NF-200的表达和分布。结果 ADSC组大鼠脑组织中可检测到PKH-26标记的ADSC,且大部分位于脑梗死周边区皮质中。造模后第7、14天,模型组DCC的表达均高于假手术组,而NF-200的表达均低于假手术组;ADSC组DCC和NF-200的表达在各个时间点均高于模型组。在梗死周边区皮质, DCC主要表达于NF-200阳性的神经元轴突中。结论经颈动脉移植的ADSC可以迁移至脑梗死周边区皮质,并可能通过促进该区域DCC、NF-200的表达,从而强化神经轴突的再生修复。