基于“三池两坝”模式的养殖尾水净化监测分析

为研究“三池两坝”模式的养殖尾水净化效果,笔者团队对加州鲈、罗氏沼虾、南美白对虾三个品种养殖池、尾水池的高锰酸盐指数(CODMn)、氨氮(NH_(4)^(+)-N)、总磷(TP)、总氮(TN)等主要污染物指标开展了监测分析。结果表明,经过“三池两坝”模式的净化处理,COD_(Mn)、NH_(4)^(+)-N、TP、TN去除率分别达到17.26%、38.13%、31.01%和36.27%;分品种来看,“三池两坝”模式尾水净化处理效果从高到低依次为南美白对虾、加州鲈、罗氏沼虾。

浙江平湖稻——罗氏沼虾轮作模式

一、基本情况(一)养殖主体简介平湖市卫江家庭农场,位于平湖市新埭镇姚浜村,占地108亩,是一家专业从事稻渔综合种养的农业生产基地。该农场2023年开展稻-罗氏沼虾轮作模式试验,取得了显著成效,亩产值超8000元,亩效益超3000元。(二)模式特点该模式配套设施大棚开展罗氏沼虾苗种标粗培育,5月初分养放入大田进行养成,7月中旬前完成罗氏沼虾捕捞收获。

多囊卵巢综合征患者血清RBP-4、SF水平与IVF-ET妊娠结局的相关性研究

目的探究多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清视黄醇结合蛋白-4(RBP-4)、血清铁蛋白(SF)水平与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)妊娠结局的关系。方法选取该院2017年11月至2020年1月行IVF-ET的127例PCOS不孕患者作为PCOS组;另选取同期因输卵管因素于本院行IVF-ET治疗的127例继发不孕患者作为对照组。比较两组患者一般资料;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测两组患者血清RBP-4、SF水平;比较两组IVF-ET妊娠结局评价指标;采用Pearson/Spearman相关分析IVF-ET助孕PCOS患者血清RBP-4、SF水平与空腹胰岛素(FINS)、自身稳定型评价胰岛素抵抗(HOMA-IR)指数、临床妊娠率的相关性;采用Logistic回归分析影响PCOS患者IVF-ET妊娠结局的影响因素。结果PCOS组血清FINS水平、HOMA-IR、RBP-4水平、SF水平均高于对照组(P<0.05),临床妊娠率低于对照组(P<0.05)。IVF-ET助孕PCOS患者血清RBP-4水平与FINS水平、HOMA-IR均呈正相关(r=0.557、0.432,P<0.05),SF水平与FINS、HOMA-IR均呈正相关(r=0.425、0.387,P<0.05),血清RBP-4、SF水平与临床妊娠率均呈负相关(r=-0.463、-0.538,P<0.05)。HOMA-IR、RBP-4、SF为PCOS患者影响IVF-ET妊娠结局的危险因素(P<0.05)。结论HOMA-IR、RBP-4、SF为影响PCOS患者IVF-ET妊娠结局的危险因素。

CORRECT介导的人HBB-28基因定点突变细胞株的建立及其应用

为利用CRISPR/Cas9系统建立一种新型、高效的定点突变和基因修复的新方法——引入阻断突变碱基的CORRECT(Consecutive re-Guide or re-Cas steps to Erase CRISPR/Cas blocked Targets)方法,本研究使用规律间隔成簇短回文重复序列(Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats, CRISPR)在线设计工具,针对人β-珠蛋白(HBB)基因设计小向导RNA (small guide RNA,sgRNA),构建PX459-sgRNA-Cas9共表达质粒,然后以含阻断突变碱基(G>T)的单链寡核苷酸(single-stranded Oligo DNA Nucleotides, ssODNs)为同源模板,通过脂质体转染HEK293T细胞,并通过Sanger测序和酶切(T7EⅠ和AatⅡ)检测编辑效率,最后通过Sanger测序分析敲除HBB单克隆细胞的基因型。结果表明,成功构建β-地中海贫血(简称β-地贫)HBB-28(A>G)基因纯合定点突变的HEK293T细胞株。阻断突变碱基优化的ssODNs减少Cas9蛋白对靶点的再次编辑,提高了整合效率。本研究建立的新型点突变技术可以高效获得纯合定点突变的HEK293T细胞株,既为单碱基突变疾病模型的建立提供实验依据,又为基因修复治疗提供高效的方法。

转录激活因子样效应物核酸酶介导的山羊β-乳球蛋白基因敲除和人乳铁蛋白基因定点整合

为了敲除山羊乳中致敏源β-乳球蛋白(BLG)基因,同时在BLG基因座定点整合人乳铁蛋白(hLF)基因。首先针对山羊BLG第3外显子识别位点设计了1对特异性TALEN-3-L/R质粒对;同时,构建了含有1个HSV-TK负筛选基因的hLF基因打靶载体BLC14-TK。TALENs质粒对转染山羊胎儿成纤维细胞,2μg/m L嘌呤霉素筛选3 d,PCR扩增产物测序来验证其切割DNA活性。打靶载体BLC14-TK与TALEN-3-L/R质粒对共转染山羊胎儿成纤维细胞,经700μg/m L G418和2μg/m L GCV共筛选药物抗性细胞株;通过整合检测和同源重组检测来筛选hLF基因打靶细胞株;BLG~–/hLF^+打靶细胞株作为供核细胞进行山羊体细胞核移植。结果为:TALEN-3-L/R致突变率为25%-30%;获得BLG~–/hLF^+打靶细胞6株;共制作重构胚胎335枚,移植受体山羊23只,B超检测到30-35 d的妊娠受体9只(妊娠率39.1%),其中1只50日龄克隆胎儿验证为BLG~–/hLF^+基因型。以上结果表明获得BLG基因座定点整合hLF基因的基因打靶山羊是可行的,为培育羊乳中含低致敏原和富含hLF的山羊新品系奠定了基础。

大口黑鲈苗种三段法工厂化培育试验

大口黑鲈(Micropterus salmoides),别名加州鲈、黑鲈,隶属鲈形目(Perciformes)、鲈亚目(Porcoidei)、太阳鱼科(Cehtrachidae)、黑鲈属(Micropterus),原产于北美洲,是一种世界性的游钓鱼类。我国台湾地区于20世纪70年代末从国外引进该鱼,并于1983年人工繁殖获得成功,同年引入广东省,经过多年的养殖发展,已成为国内重要的淡水养殖品种之一,其肉多刺少,味道鲜美,深受消费者喜爱。根据《2008—2023年中国渔业统计年鉴》,我国大口黑鲈产量从2007年的15.74万t,增长到2022年的80.24万t,已成为名副其实的“第五大家鱼”。传统大口黑鲈养殖,由于土池标苗成活率低、供应不稳定、病害多发等问题,难以满足行业对优质鱼苗的需求。现开展大口黑鲈苗种三段法工厂化培育试验。