CD14参与固有免疫应答抵御感染的研究进展

CD14是一种糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白,作为细胞表面和内体中Toll样受体(TLR)的辅受体,在细菌、病毒、真菌等感染过程中具有关键作用。CD14主要通过髓样分化因子88(My D88)依赖型信号通路、β干扰素诱导的含TIR结构域接头蛋白(TRIF)依赖型信号通路、Ca2+/活化T细胞核因子(NFAT)信号通路参与机体固有免疫应答。CD14与多种疾病相关,在宿主抵御感染中具有双重作用。如在实验性脓毒症中,抑制CD14具有保护作用,但在肠道感染模型中,抑制CD14增加组织损伤。本文主要围绕CD14表达调控及其参与机体固有免疫应答抵御感染中的信号转导机制进行综述。

肺开放结合中等潮气量对内毒素急性肺损伤犬的影响及七氟烷的干预作用

目的分析肺开放结合中等潮气量对内毒素急性肺损伤犬的影响及七氟烷的干预作用。方法以40只健康杂种公犬为试验对象,建立ALT模型并随机分为4组,分别给予CNC、RMV+PLV、RMV+PLV+七氟烷以及七氟烷+RMV+PLV通气治疗,给药6 h后,测定各组模型犬血浆中TNF-α、IL-10、IL-6水平并对比;处死模型犬,进行组织病理学观察,判定病变程度进行评分,并比较总分;对比各组模型犬支气管肺泡灌洗液中NF-KB、IL-10、IL-6水平。结果 CNC组血浆中TNF-α、IL-10、IL-6水平,组织病理学病变程度,肺泡灌洗液中NF-KB、IL-10、IL-6水平与其余各组均有所差异,差异有统计学意义(P<0.05);给予七氟烷吸入的两组各指标与CNC组和RMV+PLV组相比,差异有统计学意义(P<0.05),但两组本身对比无统计学意义(P>0.05)。结论肺开放结合中等潮气量,能更好改善肺损伤状况,给予模型犬七氟烷吸入治疗,干预效果更突出,但七氟烷发挥作用时机并无显著差异,需深入研究。

超声引导下腹横肌平面阻滞对胃癌患者术后免疫功能的影响

目的探讨超声引导下腹横肌平面(TAP)阻滞对胃癌患者术后免疫功能的影响。方法收集行胃癌根治术的患者216例,随机分成TAP组和对照组,麻醉诱导后TAP组于超声引导下行双侧TAP阻滞,每侧注射0. 35%罗哌卡因和0. 5%利多卡因混合液20 mL,对照组注射等容量的生理盐水。记录术中全麻药物的用量、术后各时点的VAS评分及镇痛泵按压次数;分别于麻醉前、术后24 h及48 h测定患者外周血中CD3^+CD28^+T细胞、CD3^+CD28^-T细胞、CD3^+T细胞占所有淋巴细胞的比例以及Treg细胞占CD3^+T细胞的比例。结果与对照组相比,TAP组患者术中丙泊酚、瑞芬太尼、顺式阿曲库铵的用量、术后各时点的VAS评分以及镇痛泵按压次数均明显降低(P <0. 05)。术后24 h,TAP组CD3^+CD28^+T细胞比例下降幅度低于对照组(P <0. 05)。术后24 h及48 h,TAP组CD3^+CD28^-T细胞的比例呈下降趋势,而对照组则呈大幅度升高(P <0. 05); CD3^+T细胞比例下降幅度明显低于对照组(P <0. 05);两组患者Treg细胞的比例变化幅度差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论超声引导下TAP阻滞可显著减少胃癌患者术中全麻药物及术后阿片类药物的用量,减轻了术后疼痛,对机体免疫功能具有保护作用。

机械通气诱导内质网应激促进机械通气相关性肺纤维化的机制研究

目的通过动物实验探讨机械通气(MV)诱导内质网应激(ERS)促进机械通气相关性肺纤维化(MVPF)的机制,明确血管紧张素受体1(AT1R)通路在该过程中的重要作用。方法将C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组(Sham组)、MV组、AT1R敲减组(AT1R-shRNA组)、AT1R敲减+MV组(MV+AT1R-shRNA组),每组6只。MV组和MV+AT1R-shRNA组小鼠气管插管后MV 2 h(参数设置:呼吸频率70次/min,潮气量20 mL/kg,吸入氧浓度0.21)以建立MVPF动物模型;Sham组和AT1R-shRNA组小鼠气管插管后自主呼吸。AT1R-shRNA组和MV+AT1R-shRNA组小鼠于制模前1个月经气管注射AT1R-shRNA-腺相关病毒悬液以抑制肺组织内AT1R基因表达。分别用免疫荧光和蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测肺组织AT1R、ERS标志性蛋白免疫球蛋白重链结合蛋白(BIP)、蛋白质二硫键异构酶(PDI),以及纤维化标志性蛋白Ⅰ型胶原蛋白(COL1A1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况;苏木素-伊红(HE)染色评估肺损伤情况,Masson染色评估肺纤维化程度。结果与Sham组相比,MV组小鼠肺纤维化程度和肺损伤情况显著,肺组织AT1R、BIP、PDI、COL1A1、α-SMA蛋白表达水平明显升高(AT1R/β-actin:1.40±0.02比1,BIP/β-actin:2.79±0.07比1,PDI/β-actin:2.07±0.02比1,COL1A1/α-Tubulin:2.60±0.15比1,α-SMA/α-Tubulin:2.80±0.25比1,均P<0.01),肺组织内E-cad^(+)/AT1R+和E-cad^(+)/BIP^(+)细胞数量增加,COL1A1和α-SMA荧光强度增强。与MV组相比,MV+AT1R-shRNA组小鼠肺纤维化程度和肺损伤情况显著缓解,肺组织AT1R、BIP、PDI、COL1A1、α-SMA蛋白表达水平明显下降(AT1R/β-actin:0.53±0.03比1.40±0.02,BIP/β-actin:1.73±0.15比2.79±0.07,PDI/β-actin:1.04±0.07比2.07±0.02,COL1A1/α-Tubulin:1.29±0.11比2.60±0.15,α-SMA/α-Tubulin:1.27±0.10比2.80±0.25,均P<0.01),肺组织内E-cad^(+)/AT1R^(+)和E-cad^(+)/BIP^(+)细胞数量减少,COL1A1和α-SMA荧光强度减低。AT1R-shRNA组各指标与Sham组比较差异均无统计学意义。结论MV可上调肺泡上皮细胞AT1R表达,活化AT1R通路而诱导ERS,促进MVPF进程。

脂多糖抑制MCT1表达引起乳酸清除障碍促进肺泡上皮细胞上皮‑间质转化

目的通过研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)与单羧酸转运蛋白‑1(monocarboxylate transporter 1,MCT1)表达的关系及对肺泡上皮细胞上皮‑间质转化(epithelial‑mesenchymal transformation,EMT)的影响,探究LPS诱导的肺纤维化过程中肺泡上皮细胞EMT的潜在机制。方法①24只C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为对照组(Con1组)和脂多糖刺激组(LPS1组),每组12只。LPS1组小鼠连续3 d腹腔注射LPS 5 mg·kg^(−1)·d^(−1),Con1组小鼠注射等体积生理盐水,造模7 d后取材。Western blot法和免疫荧光检测肺组织MCT1以及EMT相关标志蛋白[E‑钙黏蛋白(E‑cadherin)、波形蛋白(Vimentin)]的表达情况,ELISA法检测血清中乳酸含量,马松(Masson)染色评估肺组织纤维化程度。②将MLE‑12细胞按照随机数字表法分为4组(每组3个孔):PBS对照组(Con2组)、乳酸组(Lac2组)、脂多糖组(LPS2组)及乳酸+脂多糖组(Lac+LPS2组),分别用PBS、10 mmol/L乳酸、1 mg/L LPS和10 mmol/L乳酸+1 mg/L LPS刺激48 h。使用Western blot法及免疫荧光检测各组细胞MCT1、E‑cadherin、Vimentin水平,同时检测各组细胞上清液pH值。结果①与Con1组比较,LPS1组小鼠肺组织MCT1蛋白水平降低(P<0.05),E‑cadherin水平降低(P<0.05),Vimentin水平升高(P<0.05);肺组织E‑cadherin荧光强度降低,Vimentin荧光强度增强,MCT1荧光强度降低;肺组织出现纤维化表现;同时伴有血清乳酸含量升高(P<0.05)。②与Con2组比较,Lac2组MCT1蛋白水平明显升高(P<0.05),E‑cadherin、Vimentin水平及pH值差异无统计学意义(P>0.05);LPS2组与Lac+LPS2组MCT1蛋白水平明显降低(P<0.05),E‑cadherin水平降低(P<0.05),Vimentin水平升高(P<0.05),pH值降低(P<0.05)。与Lac2组比较,Lac+LPS2组细胞MCT1蛋白水平和E‑cadherin水平明显降低(P<0.05),Vimentin水平明显升高(P<0.05),pH值降低(P<0.05)。与Con2组比较,Lac2组MCT1荧光强度增强,E‑cadherin、Vimentin荧光强度无明显变化;LPS2组与Lac+LPS2组MCT1和E‑cadherin荧光强度减弱,Vimentin荧光强度增强。与Lac2组比较,Lac+LPS2组MCT1、E‑cadherin荧光强度明显减弱,Vimentin荧光强度明显增强。结论在LPS诱导的肺纤维化过程中,LPS可抑制小鼠肺泡上皮细胞MCT1的表达,导致乳酸清除障碍和细胞外液酸化,从而促进EMT和组织纤维化过程。

间充质干细胞治疗急性肺损伤的研究进展

背景急性肺损伤（acutelunginjury，ALI）是由直接或间接损伤因素导致的临床危重症，表现为急性进行性低氧血症及肺水肿，目前尚缺乏有效的治疗方法，病死率高达30％～50％。间充质干细胞（mesenchymalstemcell，MSC）是一种具有体外增殖和分化潜能的多功能干细胞，大量基础实验发现，MSC对ALI有损伤修复、免疫调节、抗炎等治疗作用。目的综述MSC的特性、常用来源、使用方法、治疗Au的作用机制及临床运用潜能。内容MSC通过植入和归巢、免疫调节、降低肺水肿、抗菌作用、线粒体转移和微泡、微管形成等潜在机制治疗Au。趋向MSC对人ALI的治疗作用需要大样本试验，MSC治疗疾病的最佳移植时机、最适剂量、最利移植方式及评估未有统一标准，是否存在一些弊端也有待研究证明。

乳酸-转化生长因子-β1途径促进肺成纤维细胞活化介导机械通气相关性肺纤维化的机制研究

目的探讨机械通气促进肺成纤维细胞活化及肺纤维化的机制,明确乳酸-转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)途径在该过程中的作用。方法①将C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为假手术组(Sham组)和机械通气组(MV组),每组12只,其中Sham组仅行麻醉插管处理并保持自主呼吸,MV组采用20 ml/kg潮气量和70次/min通气频率行单次2 h机械通气,观察7 d后取材。采用H-E染色、Masson染色观察肺组织的损伤程度和纤维化程度,采用Western blot法检测肺组织Ⅰ型胶原蛋白α1链(collagen typeⅠalpha 1 chain,COL1A1)、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和TGF-β1的蛋白表达情况,采用比色法检测小鼠肺泡灌洗液(bronchial alveolar lavage fluid,BALF)和血清的乳酸浓度。②将人胚肺成纤维细胞MRC-5采用随机数字表法分为4组(每组3个孔):PBS对照组(Con组)、1 mmol/L乳酸组(Lac1组)、10 mmol/L乳酸组(Lac_(10)组)和20 mmol/L乳酸组(Lac_(20)组),于乳酸刺激MRC-5细胞24 h后采用ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β1含量,同时采用细胞免疫荧光观察α-SMA的表达情况;于乳酸刺激MRC-5细胞72 h后采用Western blot法检测不同分组细胞COL1A1和α-SMA的表达情况,并通过ELISA法检测细胞培养上清液Ⅰ型前胶原羧基肽(procollagen type I carboxyl peptide,PICP)的含量变化。③另取MRC-5细胞采用随机数字表法分为3组(每组3个孔):PBS对照组(Con组)、20 mmol/L乳酸组(Lac_(20)组)和20 mmol/L乳酸+TGF-β1受体抑制剂(SB431542)组(Lac_(20)+SB组),处理24 h后采用Western blot法检测不同分组细胞COL1A1和α-SMA的表达情况。结果①与Sham组比较,MV组小鼠肺泡间隔增厚、胶原蛋白沉积、肺纤维化程度加重,伴有COL1A1、α-SMA和TGF-β1表达水平升高(P<0.05),血清和BALF乳酸浓度升高(P<0.05)。②与Con组比较,Lac_(10)组和Lac_(20)组细胞培养上清液中TGF-β1、PICP含量升高(P<0.05),细胞中COL1A1和α-SMA表达水平升高(P<0.05),免疫荧光观察到α-SMA在细胞内表达增多(P>0.05)。③与Lac_(20)组比较,Lac_(20)+SB组细胞COL1A1和α-SMA表达水平降低(P<0.05)。结论机械通气可以通过乳酸-TGF-β1途径活化肺成纤维细胞,引起胶原蛋白分泌,促进机械通气相关性肺纤维化进程。

转化生长因子-β1介导有氧酵解促进机械通气相关性肺纤维化的研究

目的明确转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)在机械通气促进肺组织有氧酵解并加速肺纤维化过程中的作用。方法将24只C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为假手术组(Sham组)、溶剂对照组(Vehicle组)、机械通气组(MV组)和TGF-β1受体抑制剂+机械通气组(TGFβ-Ri+MV组),每组6只。其中Sham组仅做麻醉后插管处理并保持自主呼吸,Vehicle组使用阴性对照溶剂灌胃5 d后进行麻醉插管处理并保持自主呼吸,MV组采用潮气量20 ml/kg、通气频率70次/min单次机械通气2 h,TGFβ-Ri+MV组使用TGF-β1受体抑制剂SB525334以10 mg/kg剂量灌胃5 d后采用潮气量20 ml/kg、通气频率70次/min单次机械通气2 h,以上各组7 d后取材。采用ELISA法检测肺泡灌洗液中TGF-β1含量,Western blot法检测肺组织乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)、Ⅰ型胶原蛋白α1链(collagen type Ⅰ α1 chain,COL1A1)蛋白含量,比色法检测肺泡灌洗液中乳酸含量,Masson染色观察肺组织纤维化程度。结果与Sham组比较,MV组TGF-β1含量(t=2.07,P=0.047)、LDHA蛋白(t=5.09,P=0.003)、乳酸含量(t=2.42,P=0.046)、COL1A1蛋白含量(t=4.327,P=0.012)升高,Masson染色显示肺组织胶原沉积增多。与MV组比较,TGFβ-Ri+MV组LDHA蛋白(t=2.43,P=0.038)、乳酸含量(t=3.16,P=0.025)、COL1A1蛋白含量(t=5.78,P=0.004)下降,Masson染色显示肺组织胶原沉积减少。结论机械通气可以引起肺组织TGF-β1生成并促进有氧酵解,从而加速机械通气相关性肺纤维化进程。