枯草芽孢杆菌Loq18抗菌蛋白的分离纯化及其对灰葡萄孢的抑制活性

从枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)Loq18的代谢产物中纯化一种抗菌蛋白,并进行理化性质及其对灰霉病病原菌灰葡萄孢(Botrytis cinerea)的抑制作用研究.采用柱层析分离纯化抗菌蛋白,应用基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI/TOF/TOF/MS)测定分子质量,并对其理化特性进行分析.通过显微观察法研究其对灰葡萄孢生长的影响,依据对灰葡萄孢生长抑制率与蛋白质量浓度的线性关系建立毒力方程,计算IC50值.通过体内接种灰葡萄孢,研究抗菌蛋白对采后草莓和葡萄腐烂率的影响,探究其对灰霉病的抑制活性.经测定抗菌蛋白LP18的分子质量为8 568.5 Da,含有Leu、Glu、Asp等14种氨基酸,不含脂基和糖基;具有明显抑制灰葡萄孢生长的能力,其抑制灰葡萄孢生长的毒力方程为y=0.214 0x+13.517,r2=0.996 4,IC50值为170μg/m L;经抗菌蛋白处理的灰葡萄孢,在显微镜下可观察到菌丝出现原生质囊泡化、变形、断裂.体内抑制实验表明当对照组果实的腐烂率达到100%时,处理组草莓和葡萄果实的腐烂率分别为60.33%±6.30%和45.33%±6.30%.抗菌蛋白LP18对灰葡萄孢有明显的抑制作用,可造成灰葡萄孢的菌丝出现原生质囊泡化、断裂、畸形,对采后草莓和葡萄的灰霉病有较明显的抑制效果,可延长其保质期.

冠突散囊菌固态发酵对栘(木衣)茶品质和成分影响的研究

通过人工接种冠突散囊菌固态发酵栘(木衣)茶,探究栘(木衣)茶发酵前后感官品质和化学成分的变化。栘(木衣)茶经冠突散囊菌发酵7 d,通过感官评价可知发酵后茶汤滋味醇厚回甘,颜色橙黄明亮,具有独特的"菌花香",并通过电子舌进一步证明栘(木衣)茶发酵前后感官品质存在差异。采用全自动氨基酸分析仪对主要氨基酸进行分析,结果发酵后氨基酸总量下降,但是呈味氨基酸和人体必需氨基酸质量分数升高。采用高效液相色谱仪对发酵前后化学成分的组成与主要指标成分进行含量分析,结果 HPLC指纹图谱比较显示其化学成分组成与含量均发生了明显的变化,其中主要化学成分根皮苷质量分数由251.87 mg/g下降为198.25 mg/g,根皮素作为根皮苷的降解产物,其质量分数由2.4943 mg/g升高到19.619 mg/g。因此,通过发酵栘茶,可以改善其感官品质和化学成分,具有较大的开发与应用价值。

静脉注射根皮苷后在大鼠体内的药代动力学研究

目的:本实验旨在建立新的HPLC检测方法,探讨静脉注射根皮苷后的药代动力学特征,研究未经消化道处理的根皮苷在体循环中的代谢情况。方法:实验采用18只Wistar大鼠,分5、10和20 mg/kg三个剂量进行实验,麻醉后进行颈静脉给药,4 h内持续采血,样品经高效液相色谱法进行分析。结果:根皮苷经静脉注射后,体内AUC0-t分别为(66.4±39.1)mg·L^(-1)·min^(-1)、(333.1±91.2)mg·L^(-1)·min^(-1)和(516.4±249.3)mg·L^(-1)·min^(-1),t1/2分别为(74.5±27.2)min、(62.3±21.4)min和(75.0±47.2)min,Cmax值分别为(6.4±2.4)mg/L、(24.9±6.6)mg/L和(45.0±11.2)mg/L。结论:结果表明根皮苷经静脉注射后,在体内利用率明显高于口服给药,为根皮苷的临床药用开发和利用提供参考。

不同批次四川栽培白芍药材的质量分析研究

目的:通过对不同批次四川渠县栽培白芍进行薄层、水分、总灰分、浸出物、重金属及有害元素(铅、砷、汞、铜、铬)检验,及芍药苷含量测定,以评价药材质量。方法:选取10批次四川渠县栽培白芍药材,参照2015年版《中国药典》一部项下检验方法,对其主要指标成分芍药苷的含量,以及薄层、水分、总灰分、浸出物、重金属及有害元素(铅、砷、汞、铜、铬)等检查项进行检验。结果:白芍样品中芍药苷的含量为3.67±0.45%,水分的含量为12.78±0.82%,总灰分的含量为2.93±0.52%,浸出物的含量为24.32±1.96%,均在标准范围内,且重金属含量均低于其限量值。结论:四川栽培白芍中芍药苷含量,以及薄层、水分、总灰分、浸出物、重金属及有害元素(铅、砷、汞、铜、铬)等检查项均符合2015年版《中国药典》规定,质量合格。

根皮苷在AOPPs诱导的滋养细胞衰老中的保护作用

目的:探讨根皮苷(phlorizin, PZ)在晚期氧化蛋白产物(advanced oxidative protein products, AOPPs)诱导的滋养细胞衰老中的保护作用及其相应的机制。方法:根皮苷(20μg·mL-1)和AOPPs(200μg·mL-1)共处理滋养细胞系HTR-8/SV neo细胞48 h。通过检测细胞周期、衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase, SA β-Gal)、线粒体膜电位(ΔΨm)、衰老相关异染色质病灶(senescence-associated heterochromatin foci, SAHF)分析HTR-8/SV neo细胞衰老情况。使用流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平,蛋白质印迹法(WB)检测蛋白p53、p21的表达水平。结果:和AOPPs组相比,根皮苷和AOPPs共处理后显著降低了处于G0/G1期细胞的百分比(P<0.01)、SA β-Gal和SAHF的表达水平(P均<0.01),显著增加了处于G2期细胞的百分比(P<0.05)和细胞ΔΨm(P<0.01)。流式检测结果表明,AOPPs处理组的细胞内ROS水平显著高于对照组(P<0.01),而根皮苷和AOPPs共处理组的细胞内ROS水平显著低于AOPPs处理组(P<0.01)。同时,根皮苷和AOPPs共处理后p53蛋白和p21蛋白的相对表达水平显著低于AOPPs组(均为P<0.01)。结论:根皮苷具有抗氧化能力,并且可以逆转AOPPs对滋养细胞的促衰老作用。