鲈鱼生长激素的分离及其生物活性鉴定

运用葡聚糖凝胶Ｇ１００过滤和反相高效液相色谱纯化两步法，首次从鲈鱼脑垂体中分离出鲈鱼生长激素。通过ＳＤＳ聚丙烯凝胶电泳测得鲈鱼非还原性的和还原性的生长激素分子量分别为１９２和２０７ｋＤ；等电聚焦证实鲈鱼生长激素等电点为７１５。Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹反应证实，鲈鱼生长激素具有与大麻哈鱼生长激素抗体发生特异性免疫交叉反应的特性，而与大麻哈鱼催乳素和生长催乳素抗体无免疫交叉反应。制备了具有特异性的兔抗鲈鱼生长激素抗血清。腹腔注射鲈鱼生长激素给虹鳟幼鱼，具有显著促进其体长和体重增长的效应，证明分离得到的鲈鱼生长激素具有显著的生物活性。

鲈鱼生长催乳素的分离纯化与N-末端序列分析

生长催乳素（ＳＬ）是生长激素／催乳素家族的一种新的脑垂体蛋白质激素，本研究首次从鲈鱼脑垂体中分离得到．鲈鱼脑垂体在碱性条件下，经葡聚糖凝胶（ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００）过滤和反相高效液相色谱（ｒｐＨＰＬＣ）分离出纯化的鲈鱼生长催乳素，（ｓｂＳＬ），并与大麻哈鱼生长催乳素（ｓＳＬ）抗体发生特异性的Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹交叉反应证实。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分析，发现鲈鱼生长催乳素分别是由分子量为２３．２×１０３和２８．４×１０３ｕ两种形式组成（后者可能是一种糖基化形式）．根据Ｅｄｍａｎ降解原理，测得鲈鱼生长催乳素的Ｎ－末端１６个氨基酸的序列，它与已知鱼类生长催乳素的Ｎ－末端序列比较，具有较高的同源性；由此进一步证实，分离纯化得到的鲈鱼生长催乳素是正确的。

鲈鱼催乳素的分离纯化与部分氨基酸序列分析

首次从鲈鱼中分离出鲈鱼催乳素（sbPRL），并确定其部分氨基酸序列。鲈鱼脑垂体在碱性条件下（pH值为9．0）匀浆后，经葡聚糖凝胶（SephadexG－100）过滤和反相高效液相色谱(rpHPLC）分离，得到纯化的鲈鱼催乳素，其产率为1mg／g脑垂体湿重。通过SDS-聚丙烯酸胺凝胶电泳（SDS－PAGE）确定，其非还原性和还原性的分子量分别为20．37和23．7kd；并与大麻哈鱼PRL抗体具有特异性的Western免疫印迹反应特性。根据Edman降解原理，对天冬氨酸肽链内切酶（Asp-N，AN）和赖氨酸肽链内切酶（LE）的酶解片段及完整的sbPRL进行氨基酸序列分析，已确定了鲈鱼催乳素的127个氨基酸残基的排列次序（包括N-末端序列）；它与非鲫和大麻哈鱼的相应序列比较，同源性分别为73．2％和70％。