Cy5光学分子信标的制备及乳腺癌miRNA-21的检测研究

目的设计一种检测早期乳腺癌筛查肿瘤标志物microRNA-21(miRNA-21)的Cy5光学茎环DNA分子信标探针,构建引物堆叠的等温循环链置换荧光定量分析方法,实现对miRNA-21的高灵敏检测。方法设计Cy5光学标记的茎环hairpinDNA(hDNA)探针,在靶标miRNA-21的配对引发下,激活等温循环链置换扩增反应,采用荧光定量分析方法,优化实验用量,对miRNA-21进行灵敏度、特异度检测,并与反转录荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测结果进行比较。结果本研究设计的Cy5光学hDNA探针构建的等温循环链置换扩增反应,可对miRNA-21进行高灵敏度检测,其检测限可低至1 fmol/L;检测miRNA-21特异度良好,且不与其他miRNA反应产生荧光,能有效实现单碱基突变miRNA的区分;检测miRNA-21结果与金标准qRT-PCR检测结果的差异无统计学意义(P>0.05),证明本探针检测结果具有可信性。结论本研究设计的Cy5光学探针检测miRNA-21的灵敏度和特异度高,可实现对早期乳腺癌患者的筛查及诊断。