SHOX2体外增强膀胱癌细胞的迁移、侵袭和干细胞特性

目的探讨人矮小同源盒基因2(SHOX2)对人膀胱癌细胞迁移、侵袭能力和干细胞特性的影响及其可能机制。方法分析TCGA肿瘤数据库中SHOX2基因在膀胱癌标本和癌旁对照标本的表达情况,利用GEPIA网站对TCGA膀胱数据中的SHOX2基因表达量进行单因素生存分析,并利用GSEA软件预测其可能的生物学功能。选取对数生长期的人膀胱癌细胞T24,采用SHOX2 sh RNA及SHOX2过表达质粒分别敲低、过表达SHOX2基因,用Western blot检测SHOX2蛋白表达量,通过划痕实验、Transwell侵袭实验检测细胞的迁移、侵袭能力,悬浮成球、克隆形成实验检测细胞的干细胞特性。在光镜下观察细胞形态变化,并用Western blot检测细胞上皮间充质转化(EMT)标志分子E-cadherin、Vimentin蛋白表达量的变化和TGF-β信号通路重要组件TβR-I蛋白表达量的变化。结果与癌旁膀胱组织相比,SHOX2基因在TCGA膀胱癌组织中表达升高(P=0.01),在配对的膀胱癌组织中明显升高(P=0.001),SHOX2基因表达与总生存率呈负相关(P=0.01);GSEA显示SHOX2基因表达与EMT(P=0.002,P=0.03)及干细胞特性(P=0.006,P=0.008)呈正相关。在膀胱癌细胞T24中,两种不同的SHOX2 sh RNA均能降低SHOX2的蛋白表达水平(sh SHOX2-1,P=0.004;sh SHOX2-2,P=0.03),SHOX2过表达质粒则能提高SHOX2的蛋白表达水平(P=0.007)。划痕实验、Transwell侵袭实验结果显示,抑制SHOX2表达后膀胱癌细胞的迁移(P<0.001,P=0.02)、侵袭(P=0.002,P=0.003)能力明显降低,而SHOX2过表达则提高膀胱癌细胞的迁移(P<0.001)、侵袭(P=0.004)能力。悬浮成球、克隆形成实验结果显示,抑制SHOX2表达后明显减弱膀胱癌细胞的干细胞特性(P=0.002,P=0.007,P<0.001);而SHOX2过表达则增强膀胱癌细胞的干细胞特性(P=0.002,P<0.001)。此外,抑制SHOX2表达可使细胞发生上皮样形态改变,而SHOX2过表达可使细胞发生间充质样形态改变;Western blot结果显示,抑制SHOX2表达可使膀胱癌细胞中的E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.001),Vimentin(P<0.001,P=0.01)、TβR-I(P=0.03,P=0.02)蛋白表达水平降低;而SHOX2过表达可使膀胱癌细胞中的Vimentin(P=0.04)、TβR-I(P=0.003)蛋白表达水平升高。结论SHOX2在膀胱癌中扮演致癌基因:SHOX2增强膀胱癌细胞的迁移、侵袭能力和干细胞特性,其作用机制可能与TGF-β信号通路参与调控的EMT有关。

尿液中环状RNA circ_0001361对膀胱癌的诊断价值

目的研究尿液中环状RNA circ_001361对膀胱癌的诊断价值,探究其作为膀胱癌生物学标志物的潜力。方法收集2020年1-12月在南方医科大学第三附属医院和广州医科大学附属肿瘤医院就诊的82例膀胱癌患者(病例组),于有创性操作前,收集患者尿液标本,同时收集20名健康志愿者(对照组)在该院体检尿液样本。分别提取膀胱癌患者及健康志愿者两组的尿液总RNA,反转录后利用实时定量PCR方法检测circ_001361在尿液中的水平。应用受试者工作特征曲线(ROC)分析膀胱癌患者尿液中circ_001361水平与患者临床病理因素的关系。结果两组间比较显示,病例组的尿液circ_001361和核基质蛋白22(NMP22)水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(t=24.810,8.548,P<0.05)。ROC曲线结果显示,尿液circ_001361和NMP22鉴别诊断膀胱癌的灵敏度/特异度分别为84.2%/85.0%和67.1%/85.0%。单因素分析结果显示,circ_001361和NMP22水平升高是膀胱癌发病的危险因素。多因素分析显示,在校正年龄和性别等因素影响后,尿液高circ_001361水平仍是膀胱癌发病的独立危险因素。相关性分析结果表明,尿液circ_001361与TNM分期中的T分期显著相关(P<0.05)。结论尿液中高水平的Circ_001361对膀胱癌的诊断具有重要意义。