青藤碱对α7nAChR参与的巨噬细胞M2极化和小鼠肝癌TAM极化的干预作用

目的 观察青藤碱对巨噬细胞M2极化及小鼠肝癌腹水瘤模型腹腔肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage,TAM)的影响。方法 细胞实验以白细胞介素(IL)-4(10 ng·mL^(-1))单独或与IL-6联合(即IL-4+IL-6,浓度均为10 ng·mL^(-1))刺激小鼠单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7诱导M2极化,青藤碱(400μmol·L^(-1))干预后,ELISA法检测IL-10分泌量;荧光定量PCR法检测精氨酸酶1(Arg-1)、Fizz1和Ym1的mRNA表达水平;免疫印迹法检测α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)表达。动物实验分为正常组、模型组、青藤碱(40 mg·kg^(-1))组,采用小鼠肝癌细胞H22腹腔注射诱导小鼠腹水瘤模型,灌胃给药4 d,分离各组小鼠腹腔巨噬细胞,流式检测CD86、CD206和α7nAChR表达。结果 IL-4或IL-4+IL-6联合诱导后,M2极化指标Arg-1、Fizz1和Ym1的mRNA相对表达量及IL-10分泌量升高(P<0.05);IL-4+IL-6组明显高于IL-4单独组(P<0.05),且α7nAChR表达升高(P<0.05);青藤碱可下调M2表型,也可下调α7nAChR表达(均P<0.05)。肝癌腹水瘤小鼠腹腔肿瘤相关巨噬细胞与正常小鼠腹腔巨噬细胞比较,其CD86表达下降(P<0.05),CD206、α7nAChR表达上调(P<0.05);青藤碱干预后,CD86表达上调(P<0.05),CD206、α7nAChR表达下降(P<0.05)。结论 α7nAChR表达与M2极化和肿瘤相关巨噬细胞极化正相关,青藤碱能下调α7nAChR表达,抑制M2极化、促进肝癌腹水瘤中肿瘤相关巨噬细胞向M1极化。

青藤碱对淋巴瘤Daudi细胞增殖及α7nAChR表达的影响

【目的】探讨青藤碱(SIN)对Burkkit淋巴瘤Daudi细胞增殖及α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)表达的影响。【方法】采用CCK-8法观察Daudi细胞的生长特点。分别以青藤碱及对照药物烟碱(Nic)、甲氨喋呤(MTX)干预48 h后,采用CCK-8法检测各组Daudi细胞增殖情况,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测Daudi细胞α7nAChR蛋白表达,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测α7nAChR mRNA表达。【结果】与空白对照组比较,青藤碱抑制Daudi细胞增殖,增加细胞早期凋亡率;Nic促进Daudi细胞增殖,降低凋亡率;MTX抑制Daudi细胞增殖,增加凋亡率。Western blot和RT-PCR检测发现青藤碱降低Daudi细胞α7nAChR蛋白和mRNA表达,Nic增加Daudi细胞α7nAChR蛋白和mRNA表达,MTX对Daudi细胞中α7nAChR蛋白和mRNA表达没有明显影响。【结论】青藤碱对Burkkit淋巴瘤Daudi细胞增殖具有抑制作用并抑制α7nAChR表达,与MTX抗淋巴瘤细胞增殖的机制不同。