【目的】获得低温菌LA77的低温淀粉酶基因及其生物学信息。【方法】用16S r DNA序列分析对其进行了分子鉴定,并根据分类地位进行了特异引物设计和PCR扩增,通过生物学网站和软件对获得的基因及编码蛋白进行分析。【结果】低温菌LA77归属...【目的】获得低温菌LA77的低温淀粉酶基因及其生物学信息。【方法】用16S r DNA序列分析对其进行了分子鉴定,并根据分类地位进行了特异引物设计和PCR扩增,通过生物学网站和软件对获得的基因及编码蛋白进行分析。【结果】低温菌LA77归属于气单胞菌属,PCR扩增获得一条编码703个氨基酸的完整开放阅读框的基因。通过生物信息学分析显示该蛋白质理论分子量约为77.9 k D,等电点为6.16,为亲水、且具有信号肽的跨膜蛋白。可能存在10个磷酸化位点,1个糖基化位点,二级结构主要由α螺旋和随机卷曲构成。基于氨基酸序列的结构域和系统进化树分析表明,该蛋白属于α-淀粉酶家族,极可能为低温淀粉酶。【结论】LA77低温淀粉酶基因的获得,将为低温淀粉酶基因的进一步改造、表达以及其酶低温催化机理的阐释奠定重要的基础。展开更多
【目的】建立高效的新疆早熟陆地棉田间遗传转化与室内潮霉素相结合的筛选体系。【方法】以MS为基本培养基,以去皮早熟陆地棉新陆早17号种子为材料,进行头孢霉素敏感性实验,研究其对棉花植株的影响和抑菌情况;通过在MS培养基上添加不同...【目的】建立高效的新疆早熟陆地棉田间遗传转化与室内潮霉素相结合的筛选体系。【方法】以MS为基本培养基,以去皮早熟陆地棉新陆早17号种子为材料,进行头孢霉素敏感性实验,研究其对棉花植株的影响和抑菌情况;通过在MS培养基上添加不同浓度的潮霉素和IBA,研究新陆早17号最适抗性筛选浓度及最适生根条件。【结果】新陆早17号最适的头孢霉素筛选浓度为500μg/m L,在该浓度下,植株生长不受影响且其鲜重较其他处理增重明显;其对潮霉素反应较为敏感,10μg/m L潮霉素即可抑制棉花根部生长,棉花植株生长矮小叶片发黄;其最适生根培养基为MS＋1.0μg/m L IBA,在该浓度条件下生根率为100%,平均根数8.5根;具有3~4片真叶的生根无菌苗经练苗和移栽后成活率为100%。【结论】为新疆早熟陆地棉田间进行＂喷花法＂的农杆菌遗传转化方式和室内潮霉素抗性筛选鉴定提供了理论基础。展开更多
文摘【目的】获得低温菌LA77的低温淀粉酶基因及其生物学信息。【方法】用16S r DNA序列分析对其进行了分子鉴定,并根据分类地位进行了特异引物设计和PCR扩增,通过生物学网站和软件对获得的基因及编码蛋白进行分析。【结果】低温菌LA77归属于气单胞菌属,PCR扩增获得一条编码703个氨基酸的完整开放阅读框的基因。通过生物信息学分析显示该蛋白质理论分子量约为77.9 k D,等电点为6.16,为亲水、且具有信号肽的跨膜蛋白。可能存在10个磷酸化位点,1个糖基化位点,二级结构主要由α螺旋和随机卷曲构成。基于氨基酸序列的结构域和系统进化树分析表明,该蛋白属于α-淀粉酶家族,极可能为低温淀粉酶。【结论】LA77低温淀粉酶基因的获得,将为低温淀粉酶基因的进一步改造、表达以及其酶低温催化机理的阐释奠定重要的基础。
文摘【目的】建立高效的新疆早熟陆地棉田间遗传转化与室内潮霉素相结合的筛选体系。【方法】以MS为基本培养基,以去皮早熟陆地棉新陆早17号种子为材料,进行头孢霉素敏感性实验,研究其对棉花植株的影响和抑菌情况;通过在MS培养基上添加不同浓度的潮霉素和IBA,研究新陆早17号最适抗性筛选浓度及最适生根条件。【结果】新陆早17号最适的头孢霉素筛选浓度为500μg/m L,在该浓度下,植株生长不受影响且其鲜重较其他处理增重明显;其对潮霉素反应较为敏感,10μg/m L潮霉素即可抑制棉花根部生长,棉花植株生长矮小叶片发黄;其最适生根培养基为MS＋1.0μg/m L IBA,在该浓度条件下生根率为100%,平均根数8.5根;具有3~4片真叶的生根无菌苗经练苗和移栽后成活率为100%。【结论】为新疆早熟陆地棉田间进行＂喷花法＂的农杆菌遗传转化方式和室内潮霉素抗性筛选鉴定提供了理论基础。
