综合性设计性实验在“中药鉴定学”实验教学中的应用探索

培养创新型高素质药学人才,使其适应我国医药行业快速发展的需要,适应建设创新型国家的需要,是各医药院校的共同追求。中药鉴定学课程教学不仅要求学生掌握基本的理论知识,更应该注重加强学生对鉴定中药材的实际操作能力。本文分析中药鉴定学实验教学的当前现状,指出传统教学方法在激发学生创新和实践能力方面的局限性,并提出对教学体系的改革需求,着重讨论综合性设计性实验在“中药鉴定学”实验教学中的应用策略,包含构建满足实验需求的开放式实验室、提高教师综合性设计性实验职责和能力、创新实验方法充分发挥综合性设计性实验作用,旨在最大化综合性设计性实验的效果,提高学生的学习兴趣和技能。由此来看,综合性设计性实验在中药鉴定学教育中在推动课程改革、提高教学质量及培养高质量中药人才方面具有巨大的潜力。

清心开窍方多糖对AD大鼠脑组织凋亡信号传导分子Caspase-3及凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达的影响

目的:探讨清心开窍方多糖成分对Aβ25-35杏仁核注射诱导AD大鼠脑组织凋亡信号传导分子Caspase-3及凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达的影响。方法:雄性SD大鼠40只,随机分为正常组、模型组、安理申组、清心开窍方组和多糖组,每组8只。采用双侧杏仁核注射Aβ25-35制造AD大鼠模型,造模后第2天起及灌胃给药2周后,观察大鼠水迷宫空间记忆能力,免疫组化方法研究脑组织Caspase-3、Bax、Bcl-2及βAPP的表达。结果:中药各组能明显改善AD大鼠学习记忆能力(P<0.05,P<0.01);清心开窍方组、多糖组大鼠大脑皮层、海马区Bax、Caspase-3、βAPP表达水平降低(P<0.05,P<0.01)。结论:清心开窍方能显著改善AD大鼠学习记忆的能力,可能是通过降低皮质、海马Bax、Caspase-3、βAPP表达而发挥作用。

温莪术GAP实施及认证的问题探讨

文章根据GAP(Good Agricultural Practice,中药材生产质量管理规范)的要求,对温莪术基地建设中的不确定因素进行分析探讨,为规范实施GAP认证检查提出了意见。

明志胶囊对老年痴呆大鼠学习记忆及脑皮质Bcl-2和Bax基因表达的影响

目的:探讨明志胶囊对老年痴呆(AD)大鼠行为学及脑皮质Bcl-2和Bax基因表达的影响。方法:采用D-半乳糖老年痴呆大鼠模型,分明志胶囊大、小剂量治疗组、脑复康对照组、老年大鼠模型组和老年大鼠空白对照组,检测大鼠行为学及脑皮质Bcl-2和Bax基因表达指标的改变。结果:模型组与空白组相比,学习记忆能力显著下降,Bcl-2/Bax比值下降;治疗组与模型组相比,学习记忆能力显著改善,Bcl-2/Bax比值增加。结论:明志胶囊具有较好的治疗AD作用,其机制可能与促进AD大鼠脑皮质海马区Bcl-2的表达、降低Bax的基因表达有关。

血红素氧合酶-1提高无氧无血清条件下骨髓间充质干细胞的生存

目的:探讨血红素氧合酶-1(HO-1)是否提高骨髓间充质干细胞(MSCs)在无氧无血清条件下的存活率。方法:取大鼠骨髓,体外分离扩增培养MSCs;HO-1腺病毒转染MSCs,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达;DAPI染色观察无氧无血清条件下HO-1-MSCs、MSCs细胞核变化;流式细胞仪检测无氧无血清条件下HO-1-MSCs、MSCs的凋亡率;ELISA检测无氧无血清条件下HO-1-MSCs、MSCs细胞因子的分泌。用无氧无血清条件下HO-1-MSCs、MSCs的培养上清液对无氧无血清条件下的心肌细胞进行培养,Western blot-ting检测凋亡蛋白caspase-3的变化,分光光度计检测caspase-3酶活性。结果:HO-1转染的MSCs可稳定高效地表达GFP;DAPI染色后,MSCs细胞核为典型的凋亡形态,HO-1-MSCs为较均匀蓝色荧光;HO-1-MSCs在无氧无血清条件下的凋亡率显著低于MSCs(P<0.01),且在无氧无血清条件下分泌肝细胞生长因子(HGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮生长因子(VEGF)水平显著增高(P<0.01);HO-1-MSCs、MSCs培养上清液在无氧无血清条件下分别培养心肌细胞,HO-1-MSCs组caspase-3蛋白和caspase-3活性都显著降低(P<0.01)。结论:无氧无血清条件下,HO-1提高MSCs的存活率;HO-1-MSCs分泌更多的细胞因子,且对无氧无血清条件下的心肌细胞有保护作用。

七肾汤对羟基脲肾虚大鼠生育力影响的实验研究

目的:观察七肾汤对羟基脲肾虚大鼠生育力的影响。方法:用羟基脲造成雌、雄性生殖功能障碍大鼠模型,观察七肾汤对雌性模型大鼠动情周期变化,卵巢、子宫重量;雄性模型大鼠睾丸、附睾重量,精子密度与活率。结果:七肾汤使雌性模型大鼠动情周期较正常大鼠数量增加,子宫重量明显升高;使雄性模型大鼠睾丸、附睾重量、精子密度与活率明显升高,与模型组相比有显著性差异(P<O.01)。结论:本实验成功地复制了雌、雄性大鼠生殖功能障碍模型,七肾汤能改善雌、雄性模型大鼠生育力。

明志胶囊对老年痴呆性模型大鼠学习记忆及脑组织AchE和Na+-K+-ATP酶活性的影响

目的:研究明志胶囊对老年痴呆型大鼠脑组织学习记忆及脑组织ACHE和Na+-K+-ATP酶活性的影响。方法:采用AlCl3溶液连续50天(隔日1次)背部皮下注射,造成大鼠慢性铝中毒老年性痴呆模型,并给予明志胶囊灌胃治疗,Y型电迷路法检测大鼠学习记忆水平;生化检测脑内AchE、Na+-K+-ATP酶活性变化。结果:明志胶囊可明显提高衰老大鼠学习记忆水平,显著降低脑内AchE水平,提高脑内Na+-K+-ATP酶活性。结论:明志胶囊增强衰老大鼠学习记忆活动与改变脑内AchE、Na+-K+-ATP酶活性有关。

清心开窍方皂苷对AD大鼠大脑皮层及海马区Bax、Bcl-2、Aβ及βAPP表达的影响

目的探讨清心开窍方及其皂苷对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)大鼠大脑皮层与海马区Bax蛋白、Bcl-2蛋白、β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)及淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,βAPP)表达的影响。方法选取32只SPF级SD大鼠,将Aβ25-35注入32只大鼠双侧杏仁核制作AD模型,造模后随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组(盐酸多奈哌齐片,1.67mg/kg)、清心开窍方组(清心开窍方煎液,12.67mL/kg)及皂苷组(皂苷,6.30mg/kg),每组8只,另选取8只大鼠作为正常组。正常组、模型组给予等量双蒸水灌胃,各组每天干预1次,连续2周。给药结束后进行Morris水迷宫测试,记录各组大鼠水迷宫测试期间第1～5天逃避潜伏期及跨越平台次数。免疫组织化学法检测各组大鼠大脑皮层与海马区Bax、Bcl-2、Aβ及βAPP表达。结果与模型组比较,各用药组大鼠第3～5天逃避潜伏期均缩短,皮层与海马区Bax、Aβ及βAPP表达降低,跨越平台次数增加,皮层Bcl-2表达升高,西药组、中药组海马Bcl-2表达升高,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。与西药组比较,皂苷组βAPP均升高;中药组皮层及海马区Aβ均降低,海马区Bax表达降低,皮层Bcl-2表达升高;皂苷组第3～5天逃避潜伏期明显延长,跨越平台次数减少,皮层及海马区Bcl-2表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论清心开窍方能显著改善AD大鼠学习记忆和空间探索的能力,可能是通过降低大脑皮层与海马区Bax、Aβ、βAPP表达,升高Bcl-2表达而发挥作用。

正交试验法优选蒲公英水提工艺

目的 :优选蒲公英的水提工艺。方法 :采用正交试验法 ,以测定蒲公英中咖啡酸的提取率作为考察指标。结果 :蒲公英的最优水提工艺为加水浸泡 1 5h ,提取 2次 ,加水量分别为 12倍、10倍 ,提取时间分别为 1 5h、1 0h。结论 :本实验为蒲公英制剂的进一步研究奠定了基础。

羊栖菜多糖提取物急性毒性实验

目的通过对羊栖菜多糖提取物的小鼠灌胃急性毒性实验研究,对其安全性作出初步评价。方法通过预实验,判断半数致死量(LD50),并据此测定LD50或最大耐受量(MTD)。结果MTD结果显示小鼠灌服羊栖菜多糖提取物最大耐受量相当于体质量60 kg人临床日用量的1440倍。结论羊栖菜多糖提取物急性毒性很小。

莪术油眼用凝胶中牻牛儿酮的含量测定方法研究

目的:建立莪术油眼用凝胶中牻牛儿酮的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Hypersil CN(250mm×4.6mm,5μm);流动相为乙腈-水(35:65);流速为1.0mL/min;检测波长:210nm。结果:对牻牛儿酮在4.95μg～9.55μg范围内呈现良好的线性关系,平均加样回收率为99.97%,RSD为1.26%。结论:该方法分离效果好、灵敏度高、重复性好,为莪术油眼用凝胶制剂应用临床提供了条件。

LC-ESI-MS法测定混合二元酸三种主要组分含量

目的:建立LC-ESI-MS测定混合二元酸中丁二酸、戊二酸和己二酸含量的方法。方法:色谱条件:色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18(2.1 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇:0.1%甲酸=10:90(V/V),柱温25℃,流速0.4 mL/min。质谱条件:ESI(电喷雾离子源),负离子模式检测,选择离子监测(selectedion monitoring,SIM)方式定量,监测离子峰分别是丁二酸m/z 117,戊二酸m/z 131,己二酸m/z 145。结果:丁二酸、戊二酸和己二酸在0.2～20μg/mL范围内线性关系良好(r=0.99204、0.99257、0.99327),三种二元酸的最低检测极限都是0.05μg/mL,加样回收率在97.15%～99.23%范围内,精密度RSD≤2%(n=5)。测得混合二元酸样品中丁二酸、戊二酸和己二酸的含量分别为37.28%、33.40%和14.15%,三者合计84.83%。结论:该方法准确,灵敏度高,稳定快速,且重现性好,适合于混合二元酸中丁二酸、戊二酸和己二酸含量的测定。

调经益灵片质量标准研究

目的为调经益灵片建立质量标准。方法对方中香附、牡丹皮、川芎、白芍进行定性鉴别;并应用高效液相色谱法测定阿魏酸的含量。色谱柱:kromasilC18(4.6 mm×250 nm,5μm),冰乙酸(1%):乙腈:甲醇(605∶105∶30)为流动相;检测波长323 nm;流速1 ml/min;柱温:25℃。结果阿魏酸在0.007 2～0.048μg之间线性关系良好,r=0.999 9,平均回收率为98.84%,RSD=1.14%(n=5)。结论该方法简便、准确、可作为调经益灵片的质量控制方法。

浙产异叶回芹根挥发油化学成分的研究

目的研究浙产异叶回芹根挥发油的化学成分。方法水蒸气蒸馏法提取挥发油,利用GC-MS-计算机联用仪定性分析,按峰面积归一化法,求出挥发油中化学成分的百分含量。结果鉴定出16个化合物。挥发油中含有一定量营养物质棕榈酸和亚油酸,同时也积累了较多的人工合成物质及其降解产物,有的毒性较大(如dicyclohexyl-Propanedinitrile)。结论异叶回芹根可积累人工合成物质,生产时应注意。

药剂学实验教学改革的探索与实践

本文从教学方法、教学设施及手段、实验项目、教学模式四方面进行探讨和阐述改革实验教学的方法,以求培养学生的综合素质和创新能力,对提高药剂学实验教学质量提供参考。

浅谈如何进一步提高中药炮制学实验教学效果

笔者根据中药炮制学实际教学中的经验和体会,从准确选材、炮制标本提供、设置综合性和设计性实验等几方面提出了改进意见,对实际教学工作,尤其是实验教学时数较少的情况,具有较强的参考价值。

浙产异叶回芹花序挥发油化学成分的研究

目的:研究浙产异叶回芹花序挥发油的化学成分。方法:水蒸气蒸馏法提取挥发油,利用GC-MS-计算机联用仪定性分析,按峰面积归一化法,求出挥发油中化学成分的百分含量。结果:鉴定出38个化合物。挥发油中主要成分是主要成分为1H-Benzocycloheptene(22.8%)、Sesquiphellandrene(17.77)、beta-Chamigrene(15.94%),油中含有一定量的榄香烯(beta-El-emene)和法尼烯(β-Farnesene)。结论:浙产异叶回芹花序可作为提取榄香烯和法尼烯的原料药材开发。

综合设计性实验模式在《中药鉴定学》实验教学中的探索--以石河子大学中药系为例

以石河子大学中药系《中药鉴定学》实验课为例,通过学生查阅文献并整理,设计实验方案,然后在教师的带领下进行课堂讨论及质疑;修改和完善方案,开展实验、处理数据,撰写实验报告书。全文阐述与分析了《中药鉴定学》综合性、设计性实验内容及实践模式,阐明了本学科综合性、设计性实验对培养学生实践技能、创新精神和素质教育的作用和意义。综合性设计实验课提高了学生的实践操作能力的提高和创新思维能力,激发了学生在中药鉴定学实验课的学习积极性和创造力。

清心开窍方多糖对AD大鼠海马区GFAP及βAPP表达的影响

目的:探讨清心开窍方多糖对Aβ25-35杏仁核注射诱导AD大鼠海马区胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及淀粉样前体蛋白(βAPP)表达的影响。方法:雄性SD大鼠40只,随机分为正常组、模型组、安理申组、清心开窍方组(简称清开方组)和多糖组。观察各组大鼠水迷宫空间记忆能力,并通过免疫组化方法研究海马区GFAP及βAPP的表达。结果:清心开窍方组和多糖组能明显改善AD大鼠学习记忆能力,大鼠海马区GFAP及βAPP表达水平降低,与模型组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论:清心开窍方能明显改善AD大鼠学习记忆能力,可能是通过降低海马区GFAP、βAPP表达作用。