HIV-1 CRF01_AE重组型gp120 V1/V2结构域单克隆抗体的制备与鉴定

目的真核表达人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF01_AE重组型gp120蛋白的V1/V2结构域,制备其单克隆抗体并鉴定其抗原反应性。方法构建pTriEx-3-V1/V2CNE55真核表达载体,在HEK293F细胞中表达V1/V2-His融合蛋白,纯化后作为抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫后的小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,ELISA筛选分泌抗V1/V2重组蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤,对单克隆抗体的特异性、型别以及效价进行鉴定。结果制备并获得一株稳定分泌抗HIV-1 AE亚型V1/V2结构域单克隆抗体的杂交瘤细胞株,ELISA测定腹水效价高达1∶81 000,单克隆抗体类型属于IgG1/κ型。Western blot结果表明该单克隆抗体同样能够识别不同亚型的HIV gp120蛋白。结论成功制备出抗HIV-1 AE重组型gp120蛋白V1/V2结构域的单克隆抗体。

从行为金融看证券投资误区

中国证券市场经过了十几年的历程 ,不同的阶段呈现出不同的投资热点和投资理念 ,从而形成了不同的盈利模式。文章运用国外行为金融学最新的研究结论来分析以往错误的投资理念 。

中国证券市场羊群行为实证研究

中国作为转轨经济中发展起来的新兴市场,为羊群行为特别是非理性羊群行为的滋生提供了条件。在这种情况下研究中国证券市场的羊群行为,并且将其结果与发达国家的研究结果进行比较,尤其具有现实意义。文章对中国证券市场整体羊群行为进行了检验,实证检验的结果表明中国股市存在着显著的羊群行为,而且比发达国家的市场更为显著,更有可能是非理性的羊群行为。

中小企业板及高新技术企业融资研究

分析了中小企业板对我国高新技术企业融资的作用与局限性,论述了高新技术企业各种可行的融资方式。

行为金融与认知和行为偏差

行为金融学是有别于传统金融学的一门新兴学科 ,它通过研究人们对事物的认知心理及其偏差 ,来分析人们在不确定条件下的认知过程和行为偏差。文章介绍人们对事物的认知心理及其行为偏差 ,揭示了人们在证券投资过程中的行为偏差 ,并提出了避免和利用这些偏差的对策。

行为金融学对证券投资战略的影响

文章的目的在于通过对行为金融学的引入及其证券市场运行的实证分析 ,为我国开放式基金投资理念及投资战略的形成 ,提供可借鉴的分析结论。

资本市场是加速高校科技成果产业化的必经之路

我国高校具有知识密集、人才集中和处于科技开发前沿的独特优势，在迎接知识经济时代的挑战，加速高科技成功产业化的进程中，具有不可替代的重要地位。资本市场能很好地解决困扰高科技成果产业化的观念、体制、资金等关键性问题，形成“科技成果——产业化——资本化”的良性循环。

粮改背景下我国小麦市场的现状和未来

进入 2 0 0 4年 ,中国的小麦市场延续了上一年度的牛市行情。小麦是我国主要粮食品种之一 ,小麦产量占全国产量的 2 5 %左右。种植面积占全国粮食种植面积的 2 6%左右 ,我国小麦市场已经出现了新的情况 ,同时受粮改进程加快的影响 ,使小麦现货市场的发展正孕育着较大的变化。分析评估我国小麦市场的现状和未来 ,具有重要的意义。

资本市场是加速高校科技成果产业化的必以之路

我国高校具有知识密集、人才集中和处于科技开发前沿的独特优势，在迎接知识经济时代的挑战，加速高科技成功产业的进程中，具有不可替代的重要地位。资本市场能很好地解决困扰高科技成果产业的观念、体制、资金等关键性问题，形成“科技成果－产业化－资本化”的良性循环。

mTSLP-V1/V2融合蛋白的真核表达与鉴定

目的:将鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(mouse thymic stromal lymphopoietin,mTSLP)与人免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)B亚型分离株BAL的gp120 V1/V2结构域在293F真核细胞表达体系中进行融合表达。方法:以真核表达质粒pCEP-Pu为载体,构建mTSLP与gp120BALV1V2融合基因的重组蛋白表达质粒pCTV1V2BAL。限制性酶切电泳与测序验证质粒构建正确后,使用PEI瞬时转染293F悬浮细胞,表达产物以SDS-PAGE与Western blot进行分析,并对纯化后重组蛋白的V1/V2抗原表位进行了ELISA分析。结果:SDS-PAGE、Western blot分析显示,在表观分子量35 kD至55 kD的范围内存在一条不均一的糖蛋白条带,并且能与抗mTSLP多克隆抗体和抗His标签单克隆抗体发生反应。HIV-1阳性病人血清能够识别mTSLP-V1/V2BAL上的HIV-1V1/V2抗原表位。结论:在293F中成功表达了mTSLP-V1/V2BAL融合蛋白,该蛋白具有HIV-1gp120BALV1/V2区的抗原表位,能够用于HIV-1 gp120 V1/V2亚单位疫苗的研究。

双重实时荧光RT-PCR法检测肠道病毒方法的建立及应用

目的建立检测肠道病毒(EV)和肠道病毒71型(EV71)的双重实时荧光RT-PCR法。方法设计特异性引物和探针,建立双重实时荧光RT-PCR反应体系,绘制标准曲线,对该方法的灵敏度、精密度等进行评价。收集109例临床手足口病患者粪便和咽拭子标本用该法进行检测,并与EV71商品化试剂盒检测结果进行比较。结果双重荧光PCR法建立的EV和EV71标准曲线相关系数(r)均为0.998;该法检测EV和EV71的灵敏度分别达到0.5TCID50/mL和0.05TCID50/mL;检测EV和EV71的批内精密度均小于3%,总精密度均小于或等于4%;对肠道病毒及其他人类非肠道病毒进行检测,显示了良好的特异性。109例临床样本用该法检测出84例EV病毒阳性样本,其中EV71阳性56例,EV71总阳性率为51.4%;与单重荧光PCR商品化试剂盒的检测结果完全一致(P=1.000)。结论建立的双重实时荧光RT-PCR法灵敏度高、稳定性好,对手足口病的早期高通量快速诊断具有重要意义。

国家高新区科技投入效益的评价方法

本文引入数据包络分析法对高新区科技投入效益进行评价。利用该分析方法计算出科技投入有效性水平、规模有效程度等评价指标,并综合各方面信息资源,进行多角度的分析,为高新区及区内企业的发展提供一定参考。

基于CEQ遗传分析仪的AFLP条件的优化试验

对AFLP选择性扩增反应的dNTP和MgCl2浓度进行了优化试验,产物检测与分析在CEQ遗传分析仪上进行。结果表明:在0．2mMdNTP和2．0mMMgCl2的条件下获得的扩增结果最佳,即AFLP条带最多,毛细管电泳的信号强度最高。

中国HIV-1B'亚型流行株gp120蛋白的表达与纯化

目的:表达纯化中国HIV-1 B'亚型流行株gp120蛋白。方法:将gp120基因克隆至真核表达载体pTriEx-3 hygro,构建真核表达质粒pTriEx-3-gp120,转染CHO-K1细胞,96 h后收取上清,利用金属螯合层析的方法纯化该重组蛋白,并通过SDS-PAGE以及Western blotting验证重组蛋白的表达。结果:酶切及测序结果表明真核质粒表达构建正确,表达的重组蛋白可以被His标签抗体以及HIV-1阳性血清所识别,并从细胞转染上清中成功纯化了该蛋白。结论:我们成功构建了一个可用于免疫检测、疫苗设计以及其它相关研究的HIV-1免疫原。

HIV-1膜蛋白GP120V1/V2区域的真核表达、纯化和鉴定

目的:真核表达北美HIV-1分离株BAL和中国分离株CNE1两种毒株的V1V2,并纯化、鉴定其生物活性,为血清学分析鉴别HIV-1感染病人抗体反应及性质提供实验基础。方法:本研究将HIV-1北美分离株BAL和中国分离株CNE1两种毒株的V1V2基因序列定向克隆到多系统表达载体pTriEx-3 Hygro vector(Merck&Co.,Inc.)中,构建了表达质粒,并将表达质粒瞬时转染293T细胞,144小时后收获上清液,经浓缩、纯化后,SDS-PAGE电泳,Western blot检测蛋白的表达,ELISA检测其与HIV-1阳性病人血清的反应性。结果:经SDS-PAGE电泳、Western blot、ELISA方法证实确实得到了有免疫反应活性的V1V2蛋白,从表观分子量判断,表达的V1V2蛋白被糖基化修饰。使用V1V2蛋白作为抗原,分析发现中国HIV-1阳性病人体内比较广泛的存在着V1V2的抗体,为血清学的分析奠定了实验基础。