miR-34a-3p通过靶基因YAP1调控黑色素瘤A375细胞的增殖和凋亡

目的探讨miR-34a-3p通过靶基因YAP1调控黑色素瘤A375细胞的增殖和凋亡。方法通过荧光定量PCR检测miR-34a-3p在黑色素瘤和正常皮肤组织中的表达,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-34a-3p的靶基因,黑色素瘤A375细胞转入miR-34a-3p模拟剂(miR-34a-3p mimics组),转入对照物miR-NC(对照组miR-NC),miR-34a-3p mimics组转染YAP1表达载体(miR-34a-3p mimics+YAP1组)。通过MTT和流式细胞术分别检测miR-34a-3p和YAP1对黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响,并通过Western blot检测miR-34a-3p对YAP1蛋白表达的影响。结果黑色素瘤组中的miR-34a-3p的表达量(0. 67±0. 21)低于正常皮肤组织(1. 35±0. 47),差异具有统计学意义(P <0. 05)。双荧光素酶报告基因显示,miR-34a-3p mimics与YAP1 3'UTR WT载体共转染组荧光强度(0. 39±0. 11)明显低于对照miR-NC与WT载体共转染组(0. 98±0. 35),差异具有统计学意义(P <0. 05)。而miR-34a-3p mimics与YAP1 3'UTR MUT载体共转染组(1. 31±0. 23)与其对照miR-NC与MUT载体共转染组(1. 22±0. 21)之间的荧光强度无显著差异(P> 0. 05)。在培养24 h、48 h和72 h后,miR-34a-3p mimics组细胞细胞活力低于对照组miR-NC,差异具有统计学意义(P <0. 05); miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞活力高于miR-34a-3p mimics组,差异具有统计学意义(P <0. 05)。miR-34a-3p mimics组细胞的凋亡率高于对照组miR-NC,差异具有统计学意义(P <0. 05)。miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞凋亡率低于miR-34a-3p mimics组,差异具有统计学意义(P <0. 05)。与对照组miR-NC比,miR-34a-3p mimics组细胞的YAP1蛋白表达量显著降低,cleaved caspase 9表达水平显著升高,差异具有统计学意义(P <0. 05)。而与miR-34a-3p mimics组比较,miR-34a-3p mimics+YAP1组细胞凋YAP1蛋白表达量显著增加,cleaved caspase 9表达水平显著降低,差异具有统计学意义(P <0. 05)。结论miR-34a-3p能够通过调控靶基因YAP1的表达,抑制黑色素瘤A375细胞的增殖,促进细胞凋亡。