生理溶液中硝普钠释放一氧化氮通路及其动力学研究

目的 :探索一氧化氮供体硝普钠 (SNP)在任洛氏溶液 (RL S)中 ,一氧化氮 (NO)释放通路及其动力学特征 ,为体外 NO定量生物学研究提供科学依据。方法 :在 37℃恒温避光条件下 ,对 NO特异氧化产物 NO2 - Griess还原显色 ,采用分光光度法 ,比较两种活性巯基化合物半胱氨酸 (CYS)和谷胱甘肽 (GSH)存在的 RL S中 ,SNP释放 NO的情况 (n=3)。结果 :无活性巯基存在的 RLS中未测得 NO;而当有 2 5 mmol/ L CYS存在时 ,SNP释放 NO呈一级动力学 ,速率常数 k=0 .1 397min- 1(r=0 .932 1 ) ,稳态浓度为 0 .87mmol/ L ,CYS浓度的平方与 SNP释放 NO呈线性关系 ;有2 5 mmol/ L GSH存在时 ,NO释放通路反应呈多相性 ,约在 1 0 min时 ,出现 0 .5 2 mmol/ L的峰值 ,后迅速下降 ,在 30 min时渐成 0 .1 8mmol/ L 的稳态。结论 :恒温避光 RL S中 ,SNP释放 NO呈 -SH依赖性。在 CYS体系中 ,NO释放呈一级动力学 ;在一定范围内改变 CYS浓度 ,对 NO释放影响较小。在 GSH体系中 ,30 min内 NO释放呈多相反应。

阿司匹林,对乙酰氨基酚和布洛芬对整体大鼠着床前胚泡的微核诱导作用

采用一种灵敏,准确,简便的致突变研究方法,收集ig阿司匹林(Asp)对乙酰氨基酚(Par)及布洛芬(Ibu)的妊娠d 4大鼠胚泡进行微核试验,结果表明,孕后d3给Asp为微核产生高峰期;Asp>0.5g·kg^(-1),Par>0.25g·kg^(-1)时呈显著的胚泡微核诱导作用,而Ibu0.5g·kg^(-1)则无此效应,Asp各组微核呈依剂量增加,三药对同体孕鼠骨髓均无显著微核诱导作用,结果提示Asp和Par具遗传毒性,并证实整体大鼠着床前胚泡对某些化学物质的染色体断裂作用较骨髓细胞更为敏感。

大鼠胚胎移植受胚模型改良及在着床前阿司匹林染毒致畸机制研究中应用

为建立可靠的大鼠胚胎移植受胚模型，使适用于着床前染毒致畸的机制研究，本文比较输精管结扎绝育和氯丙二醇灌胃绝育雄鼠制备假孕受胚鼠的优劣。结果表明以氯丙二醇绝育雄鼠制备假孕受胚鼠，可简化实验步骤，并明显提高移植胚胎着床率。该法用于着床前胚胎阿司匹林染毒致畸机制研究，在受胚鼠妊娠末期可见胚胎吸收率和畸形率呈剂量依赖性增高，与着床前胚胎的胚泡化率呈负相关，提示该法可成功地用于药源性着床前胚胎异常，排除母体对胎仔发育的影响因素。

胚胎干细胞与促再生药物研究

具有体外诱导干细胞定向分化的药样小分子,在再生医学领域可望有以下潜在用途:利用其固有的促组织再生作用,到达靶组织后促进成体干细胞定向分化;通过体外诱导,获得足够量的均一前体细胞用于细胞移植治疗用;细胞移植的同时给药,促进被移植的前体细胞在体内进一步定向分化,达到提高疗效,降低致瘤性的目的。近年来,由于诱导多能干(induced pluripotentstem,iPS)细胞的问世,同样具有多能性的人类胚胎干(embryonic stem,ES)细胞研究可为iPS的命运提供借鉴,因而再次受到高度关注。人类ES细胞定向分化体系在药物筛选应用中有独到之处,可在药物研发早期获得人类细胞易感的有效性与安全性资料。研究促再生的药样小分子可通过体外初级筛选和次级筛选,进一步在合适的动物模型进行研究。再生医学微环境学将推动细胞移植和促再生药研究的进程。

基于系统生物学的药物毒理学研究进展

近年来涉及系统生物学的毒理学研究已日渐兴起,在整体性、动态性、网络调控性的内涵下,关注外来物质对机体的损伤评估与预测。药物与生物大分子作用涉及机体网络系统的巨大复杂性,使得对药物毒性作用机制的理解难度也有所增加。应用计算与实验系统生物学,药物毒理学研究在生物组织扩大到多重尺度网络分析,并由此说明治疗作用和不良反应。系统毒理学依靠实验"组学"技术,在大量可变因素中能测量多重变化,通常在全基因组水平建立网络分析药物作用。组学技术由于将个体基因组状态联系到所用药物的治疗效能和毒性反应,通常在全基因组水平建立分析药物毒性的网络系统。通路与网络分析相结合,毒理效应与毒代动力学模型,和基因多态性知识,将发展为预测毒性作用的模型。基于诸如美国食品药品管理局不良事件报告系统网络分析,可建立初步了解分子水平的药物靶点相互作用,导致器官和各级水平不良反应表型过程的远端效应。系统生物学的集成数据设计分子及相互之间作为一个网络行为,如动力学模拟,代谢调控,鲁棒性和流量分析,确实有助于理解网络介导的毒性及药物毒理学。

药物源头创新及其相关技术平台构建与应用

论述新世纪药物源头创新的现状与趋势 ,及其相关的技术平台构建对药物源头创新的重要性和密切相关性。当今世界人类疾病谱的改变及我国加入 WTO后 ,药物源头创新 ,包括与之密切相关的制剂学新材料、新剂型和新给药系统研究 ,质量分析和药效、毒性评价技术平台构建与推广应用等 ,成为药学领域基础研究和应用研究的主旋律 ,也给药学领域带来了前所未有的新机遇 ,新挑战。

细胞组学与药理毒理学研究新机遇

细胞组学是基于单细胞分析的科学,能在生命活动最小单位的活细胞水平,反映细胞在外环境调控下,与细胞动力学和组织功能相关的基因组学、蛋白组学,旨在测定单细胞的分子表型。结合数据模式分析,通过特定的模拟临床疾病细胞模型图像分析、流式细胞术等高内涵筛选,提供复杂疾病治疗相关的生物信息。通过分析正常与病理情况下基因、蛋白和分子信号通路的差异起源,经过整合与相互关联、相互作用的基因、蛋白和多重代谢反应的网络系统研究,可发现假设的药物作用的靶点,并预测临床可能遇到的不良反应。利用上述概念构建的“工作模型”,与先进的测试手段和信息工具综合而成的细胞组学,可望给药理毒理学研究带来新机遇。

利福平在体内对大鼠着床前胚泡的遗传和发育毒性

利福平在体内对大鼠着床前胚泡的遗传和发育毒性１楼宜嘉王立明周建设张丽进（浙江医科大学药学系药理学教研室，杭州３１０００６）利福平（ｒｉｆａｍｐｉｎ，Ｒｉｆ）为药酶诱导剂，患结核病的育龄妇女如在口服避孕药的同时服用Ｒｉｆ可加速前者的灭活，增加怀孕的可能...

苯巴比妥、西咪替丁对醋氨酚致整体大鼠着床前胚泡毒性的影响

为探索醋氨酚（Ａｃｅ）致大鼠着床前胚泡毒性的机制，大鼠孕后以苯巴比妥（ｐｈｅ）或西咪替丁（Ｃｉｍ）预处理，并于孕ｄ３ｉｇＡｃｅ０．２５，０．５和ｌｇ／ｋｇ（阳性阴道涂片为孕ｄｏ）。ｄ４收集胚泡，观察其细胞数、微核率、有丝分裂指数和胚泡化作用。结果Ｐｈｅ预处理组胚泡微核率和具微核胚泡率显著升高，并与Ａｃｅ呈剂量依赖关系；而用Ｃｉｍ预处理组则呈微核率降低趋势，但胚泡平均细胞数显著减少。以上各组胚泡化作用与溶剂对照组无显著差异。揭示Ａｃｅ对整体大鼠着床前胚泡的细胞毒性主要由其本身引起，而遗传毒性则主要是由其经细胞色素Ｐ４５０氧化产生的代谢物所引起。Ａｃｅ及其代谢物对大鼠着床前胚胎的胚泡化作用均无显著影响。

茶多酚对醋氨酚致大鼠胚泡微核诱导作用的影响

作者采用细胞生物学与细胞遗传学方法，评价茶多酚（TP）对醋氨酚（Ace）致大鼠着床前胚泡遗传物质损伤的预防作用。结果表明，大鼠孕第3天igAce0．5g/kg（阳性阴道涂片为孕第0天），呈明显的胚泡微核诱导作用，胚泡微核率为122‰，具微核胚泡率为33．3％，而孕第0～3天每天igTP0．1、0．2和0．4g/kg后再给同剂量Ace，则胚泡微核率和具微核胚泡率均显著降低，分别为6．2‰、4．1‰、3．7‰和18．3％、14．3％、12．5％，并呈良好的剂量依赖关系。提示TP对Ace致大鼠胚泡遗传物质损伤有预防作用，其机制可能与抑制细胞色素P450的活性，降低Ace在体内代谢有关。

淫羊藿素抗Aβ肽致大鼠原代培养神经细胞凋亡作用

目的:探索淫羊藿素(icaritin,ICT)对Aβ25-35肽致大鼠原代培养神经细胞的损伤保护作用及潜在机制。方法:制备d17胎龄大鼠胚胎皮层神经细胞,支持培养7d后,与ICT预孵育24h并加入Aβ25-35肽,作用72h后以细胞形态、MTT值、培养液乳酸脱氢酶(LDH)水平作为细胞的损伤指标;并以线粒体膜电位(ΔΨm)改变作为凋亡早期指标,AO/EB染色差异作为凋亡后期指标。结果:0.1μmol·L-1ICT预孵育24h能显著改善10μmol·L-1Aβ25-35肽所致的原代培养神经细胞的损伤,MTT、LDH及形态学结果显示:ICT能提高Aβ25-35肽损伤神经细胞的存活率,JC-1染色结果显示:ICT能防止Aβ25-35肽诱导的细胞线粒体ΔΨm下降,AO/EB染色结果显示:ICT能够改善神经细胞凋亡。结论:ICT经抗凋亡机制对Aβ25-35肽损伤大鼠原代培养神经细胞发挥保护作用。该作用与ICT干预Aβ25-35肽诱导的细胞线粒体膜电位下降和核损伤有关。

淫羊藿苷伍用三七总皂苷对Aβ-淀粉肽_(25-35)侧脑室注射所致大鼠行为异常及脑组织AchE活性的影响

目的研究淫羊藿苷(icariin,ICA)伍用三七总皂苷(Panaxnotoginsengsaponins,PNS)对Aβ淀粉肽2535(betaamyloidpeptide2535,βAP2535)大鼠侧脑室注射空间学习和记忆障碍的影响。方法取经跳台法和八臂迷宫法筛选的正常大鼠采用侧脑室注射βAP2535,制成阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease,AD)大鼠模型,应用跳台法和八臂电迷宫法判断给药前后大鼠的空间学习和记忆能力;采用化学比色法测定脑组织中乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AchE)活性。结果与溶剂组大鼠相比,模型大鼠八臂电迷宫错误次数明显增加(P<0.05),跳台学习和记忆错误次数明显增加(P<0.01)。大鼠造模前后连续igICA+PNS5+40,10+80mg/kg21d后,模型大鼠上述行为学指标得到明显改善(P<0.05),脑组织AchE活性降低(P<0.05)。结论ICA伍用PNS(5+40,10+80mg/kg)对βAP2535侧脑室注射所致大鼠空间学习和记忆障碍有显著的预防和治疗作用,该作用与降低脑组织中AchE活性呈相关性。

人参皂苷Rg1经线粒体通路抗Aβ_(25-35)致原代大鼠皮层神经元凋亡

目的:通过人参皂苷Rg1与原代培养大鼠皮层神经元预培养,评价抗β淀粉样肽(β-amyloid peptide,Aβ)所致神经元损伤,并探讨Rg1的神经保护作用及相关分子机制。方法:原代神经元培养7 d成熟后,分别以1、10、20μmol/L Rg1预处理24 h,加入Aβ毒性片段Aβ25-3510μmol/L模拟阿尔茨海默病(Alzheimer's Disease,AD)脑组织局部微环境。孵育72 h后,光镜观察细胞形态学改变,评价Rg1是否具有神经保护作用及相关量效关系。采用JC-1染色,考察神经元线粒体膜电位(ΔΨm)变化,并运用Western blot技术,检测凋亡相关蛋白的表达变化。结果:Aβ25-35作用72 h严重损伤原代皮层神经元,引起神经元碎裂和死亡。Rg1预处理能对抗Aβ25-35的细胞损伤作用,显著提高神经元存活率,并呈现剂量依赖性,其中Rg1(20μmol/L)活性最强。Aβ25-35处理24 h能降低神经元的线粒体ΔΨm,下调Bcl-2/Bax的比值,引起细胞色素c从线粒体释放入胞浆,活化caspase 3和caspase 9,从而引起神经元凋亡。而Rg1预培养能保护原代神经元,减轻或避免上述损伤作用,且其抗凋亡效应可被雌激素受体(ER)拮抗剂ICI182,780和糖皮质激素受体(GR)拮抗剂RU486部分拮抗。结论:Rg1在1μmol/L至20μmol/L浓度具有抗Aβ25-35损伤原代培养大鼠皮层神经元作用,该活性与抑制线粒体凋亡通路相关联。

淫羊藿苷衍生物的制备及其雌激素样作用研究

目的研究淫羊藿苷(icariin,ICA)及其衍生物淫羊藿素(icaritin,ICT)和去甲淫羊藿素(desmethyli-caritin,DICT)的雌激素样作用及其相关的构效关系。方法ICA经纤维素酶水解成ICT,进一步在BBr3和CH2Cl2的体系中反应生成DICT;用不同浓度的化合物与雌激素敏感性人乳腺癌细胞株MCF-7和T47D分别共培养6d和9d,MTT法检测其对细胞的促增殖率,以此评价化合物雌激素样作用的强弱。结果ICT、DICT促细胞增殖作用显著,10-6mol/L浓度时促MCF-7细胞增殖作用分别是雌二醇(10-9mol/L)的90.0%和94.0%(P<0.01);促T47D细胞增殖作用分别是雌二醇的65.6%,50.0%(P<0.01)。ICA未呈现促MCF-7细胞和T47D细胞增殖作用。ICT、DICT的促细胞增殖作用被10-7mol/L雌激素受体完全拮抗剂ICI182、780完全抑制。结论ICT和DICT具有促MCF-7细胞和T47D细胞增殖的雌激素样作用,而ICA未体现该作用。

三萜类化合物对化学损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用

目的:研究三萜类化合物对半乳糖胺(D-GalN)和四氯化碳(CCl4)损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用及其机制。方法:两步灌流法分离大鼠肝细胞进行原代培养,评价积雪草酸(asiaticacid,AA)和β-甘草次酸(β-glycyrrhetinicacid,GA)对D-GalN和CCl4损伤原代培养肝细胞的保护作用。光镜评价细胞生长形态,MTT法测定细胞活性,测定细胞上清天冬氨酸氨基转移酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH);并以荧光分光光度法测定细胞中活性氧(ROS),细胞上清活性氮终产物(NOx)和细胞内谷胱甘肽(GSH)含量;用JC-1法测定细胞线粒体膜电位(ΔΨm)。结果:AA和GA均可显著抑制D-GalN所致的AST和LDH升高(P<0.05),AA尚能提高细胞存活率(P<0.05);AA和GA也能显著抑制CCl4所致的LDH释放(P<0.05)。AA和GA均显著减少两种化学损伤细胞ROS生成和NOx释放,明显改善D-GalN所致细胞线粒体ΔΨm的降低;AA尚显著抑制两种化学损伤细胞内GSH降低。结论:三萜类化合物对D-GalN和CCl4致原代培养大鼠肝细胞损伤有保护作用,其机制与抑制细胞ROS、NOx生成和GSH降低相关,对D-GalN损伤尚有改善线粒体膜电位作用。

三七总皂苷提取工艺研究

目的:优化三七总皂苷提取工艺。方法:在考察提取溶媒和粒径的前提下,采用正交试验法,以提取物中三七总皂苷含量为考察指标,对影响三七提取的因素进行了考察。结果:提取次数对三七总皂苷得率有显著影响。选择过8目筛的药材,用10倍量70%乙醇提取3次,每次1.5h,所得三七总皂苷为85.74±3.16mg/g生药。结论:该工艺简便易行,得率较高,适于大生产。

四方蒿化学成分的研究

目的:研究四方蒿的化学成分.方法:硅胶、聚酰胺柱色谱进行分离纯化,通过理化性质和波谱数据鉴定结构.结果:分离得到5个黄酮类化合物,分别鉴定为木犀草素(Ⅰ),木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅱ),木犀草素-5-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅲ),5-羟基-7,8-二甲氧基黄酮(Ⅳ)和5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮(Ⅴ).结论:化合物Ⅲ～Ⅴ为首次从该植物中分得,工为首次从该属植物中分得.

淫羊藿素诱导小鼠胚胎干细胞体外定向分化为神经细胞

目的:采用淫羊藿素(icaritin,ICT)改变小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)体外培养微环境,论证ICT提高ES细胞体外定向分化为神经细胞的效应。方法:采用拟胚体培养法,评价ICT对ES细胞体外定向分化为神经细胞的诱导作用;并利用RT-PCR法和免疫荧光法鉴定神经细胞特异基因和蛋白表达谱。结果:ICT在10-7mol/L浓度时,对ES细胞定向分化为神经细胞表型呈现最佳诱导效应,在分化d8+8时,分化率高达80%(P<0.001),并呈良好的量效和时效关系。分化神经表型者表达神经元特异性微管蛋白(β-tubulin Ⅲ)基因和神经胶质细胞特异性胶质纤维酸性蛋白(GFAP)基因,同时伴有神经前体细胞特异性标志蛋白(nestin)及β-tubulin Ⅲ和GFAP特异性蛋白阳性表达。结论:应用拟胚体培养微环境调控法,ICT可诱导小鼠ES细胞定向分化为神经细胞,并与神经发育依赖性特异基因和蛋白表达呈正相关。

生殖毒理研究的现状与动向

本文综述了近年来国外在生殖毒理研究方面的进展。许多国家及地区制订了生殖毒理试验的规范或草案。各国现行的实验方法及结果评价仍以体内试验为主,其中单代及多代试验的内容体现了当前评价药物生殖毒性的标准。