克癃胶囊对良性前列腺增生模型大鼠的作用机制研究

目的基于核因子E2相关因子(nuclear factor erythroid2-related factor,Nrf)2信号通路探讨克癃胶囊改善前列腺增生的分子机制。方法取雄性SD大鼠60只随机分为正常组、模型组、假手术组、非那雄胺组和克癃高、中、低剂量组。采用睾丸切除术和皮下注射丙酸睾酮的方法建立良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)大鼠模型,各药物治疗组大鼠在睾丸切除术后第8天,注射丙酸睾酮的同时以相应药物灌胃,持续给药28 d后处死。苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察前列腺组织病理学变化;ELISA检测各组大鼠血清中睾酮(testosterone,T),二氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT),雌二醇(estradiol,E2)的含量;实时荧光定量PCR法检测各组大鼠前列腺组织中TNF-α、IL-1β、IL-6、Nrf2和NQO1的mRNA表达。结果与假手术组比较,BPH模型组大鼠前列腺组织中腺上皮呈立方状或高柱状,腺腔明显扩张,腺腔内分泌物明显增加;血清中T和DHT水平明显升高(P<0.05),E2水平明显降低(P<0.01);前列腺组织中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA水平显著升高(P<0.01),Nrf2 mRNA和NQO1 mRNA的表达水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,克癃高剂量组大鼠高柱状腺上皮的数量明显减少,前列腺腺腔扩张也明显改善;克癃胶囊高、中剂量组大鼠血清E2表达水平明显升高(P<0.05),T和DHT表达水平显著降低(P<0.05),前列腺组织NQO1 mRNA水平显著升高(P<0.01);克癃高、中、低剂量组大鼠前列腺组织Nrf2 mRNA水平均显著升高(P<0.05),TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA水平均显著降低(P<0.05)。结论克癃胶囊可改善BPH大鼠前列腺组织的病理性增生,具体机制可能与其激活Nrf2信号通路、抑制炎症有关。

乌头汤对CIA大鼠MCP-1/CCR2/ERK1/2信号的作用

目的:研究乌头汤对胶原诱导关节炎大鼠体内MCP-1/CCR2/ERK1/2信号的影响。方法:50只SD大鼠,随机选10只为正常组,剩下40只造胶原诱导关节炎模型,造模成功后随机分成模型组、乌头汤低剂量组(3.75 g·kg^(-1)·d^(-1))、乌头汤高剂量组(7.5 g·kg^(-1)·d^(-1))和甲氨蝶呤组(1 mg·kg^(-1)·w^(-1)),灌胃给药28 d后取材。采用ELISA法检测大鼠血清中单核细胞趋化蛋白1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)的含量,免疫组织化学法检测大鼠踝关节中MCP-1的表达水平,利用Western Blotting检测大鼠踝关节中CC趋化因子受体2(CC chemokine receptor 2,CCR2)和细胞外信号调节激酶1/2(extracellular-signal-regulated kinases 1/2,ERK1/2)及其磷酸化形式的表达水平。结果:乌头汤能显著降低胶原诱导关节炎大鼠血清及踝关节中MCP-1的含量,同时能够显著降低模型大鼠踝关节中CCR2的含量及ERK1/2的磷酸化水平,但对总的ERK1/2没有明显影响。结论:乌头汤具有下调胶原诱导关节炎大鼠体内MCP-1/CCR2/ERK1/2信号的作用。

基于生物信息学方法探析川芎嗪对类风湿性关节炎作用机制

目的:通过生物信息学方法探析川芎嗪对类风湿性关节炎作用机制,为其后续的实验验证及应用拓展提供预测性科学依据。方法:将Pubchem数据库中查找到的川芎嗪人类靶蛋白和类风湿性关节炎Gene数据库中获得的人类靶基因导入IPA分析平台,把两者相关的网络、信号通路进行比较分析,进而得出川芎嗪作用于类风湿性关节炎的可能机制。结果:通过本研究,发现川芎嗪主要通过第二信使信号通路参与类风湿性关节炎发生发展中细胞的生长、增殖和发育、生存与死亡等功能。川芎嗪通过三条路径影响了类风湿性关节炎中细胞的转录功能,分别是Gaq-PI3K-AKT-NF-κB路径、Gas-c AMP-RAF-ERK1/2-CREB路径和Gai-STAT3路径。川芎嗪可能通过RGS蛋白对G蛋白偶联受体信号进行了负调控。结论:通过查找川芎嗪靶蛋白、类风湿性关节炎基因并通过IPA软件进行分析可以得出川芎嗪作用于RA的可能机制。

雷公藤甲素对胶原诱导关节炎大鼠MIP-1α、Eotaxin和MCP-1表达的影响

目的:探讨雷公藤甲素(TP)对胶原诱导关节炎(CIA)大鼠血清和踝关节中MIP-1α、Eotaxin及MCP-1的影响。方法:建立CIA大鼠模型,用不同浓度的TP进行灌胃治疗,治疗期间,对大鼠的足趾厚度和宽度进行测量。治疗3周以后,将大鼠处死,收集血清标本,用ELISA法检测血清中MIP-1α、Eotaxin及MCP-1的表达水平;同时收集关节标本,采用RT-PCR法对大鼠踝关节滑囊组织的MIP-1α、Eotaxin及MCP-1的m RNA表达进行检测;采用western blot对踝关节滑膜组织的MIP-1α、Eotaxin及MCP-1蛋白表达进行检测。结果:与正常组相比,模型组大鼠的关节肿胀程度明显加重;与模型组相比,治疗组大鼠关节肿胀程度明显减轻。与正常组相比,模型组大鼠血清及踝关节中MIP-1α、Eotaxin及MCP-1的表达明显增加(P<0.05);与模型组相比,各用药组大鼠血浆及踝关节滑膜组织的MIP-1α、Eotaxin和MCP-1表达水平较明显降低(P<0.05)。结论:TP能通过抑制CIA大鼠MIP-1α、Eotaxin和MCP-1的表达而发挥治疗关节炎的作用。

利用文本挖掘技术探索玉屏风散的用药规律

目的:采用文本挖掘技术,探索玉屏风散用药规律,为临床应用提供依据。方法:在中国生物医学文献服务系统中收集玉屏风散文献数据,利用文本挖掘的方法挖掘相关中医证候、疾病、中成药、西药等规律。结果:在与疾病关系中,常用于治疗呼吸道感染,哮喘,咳嗽等疾病;在与证候关系中,常用于风寒,气虚,脾虚等证。在与中成药关系,常联用肾气丸,四君子汤,生脉散等中成药。在与西药联用关系中,常联用西替利嗪,干扰素,抗生素等药。结论:使用文本挖掘方法较为全面、系统的探索了玉屏风散的用药规律,为玉屏风散深入研究提供了有益参考。

川芎嗪联合来氟米特对胶原诱导关节炎大鼠血小板活化和炎症反应的影响

目的:探讨川芎嗪联合来氟米特对胶原诱导关节炎大鼠血小板活化和炎症反应的影响。方法:将50只SD大鼠随机取10只作为正常组,其余制备大鼠关节炎模型,将成模大鼠分为模型组(CIA组)、川芎嗪组(TMP组)、来氟米特组(LEF组)、川芎嗪联合来氟米特组(T+L组),各药物干预组分别给予相应药物,计算关节炎指数并观察关节病理变化,检测血清CRP及PDGF-BB水平,血浆GMP-140及VCAM-1水平。结果:与正常组比较,CIA组大鼠关节滑膜出现明显细胞增生、炎细胞浸润、血管翳形成浸入软骨,CRP及PDGF-BB水平、GMP-140及VCAM-1水平均显著上升;与CIA组比较,各药物干预组大鼠关节病理变化中滑膜增生、炎性细胞浸润、血管翳和骨破坏形成均有改善,大鼠关节炎指数均减小,双后肢关节红肿程度评分均降低,CRP、PDGF-BB蛋白水平、GMP-140水平及VCAM-1水平均降低,其中联合用药组效果优于TMP组和LEF组。结论:川芎嗪联合来氟米特能够显著抑制胶原诱导关节炎大鼠的血小板活化和炎症反应,对于RA患者具有潜在的应用价值。

雷公藤甲素对胶原诱导关节炎大鼠缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子表达影响

目的:探讨雷公藤甲素(triptolide,TP)对胶原诱导关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠血清和踝关节中缺氧诱导因子(hypoxia-inducible factor,HIF)-1α和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:建立CIA大鼠模型,不同浓度雷公藤甲素灌胃治疗,治疗期间进行足趾厚度和宽度的测量。治疗3周后,处死大鼠,收集血清标本,ELISA法检测HIF-1α和VEGF表达水平。收集关节标本,采用RT-PCR法检测踝关节中HIF-1α和VEGF的m RNA表达水平。结果:雷公藤甲素治疗后,关节肿胀明显下降。模型组大鼠血清及踝关节中HIF-1α和VEGF的表达明显高于正常组(P<0.05),各用药组大鼠血清及踝关节中HIF-1α和VEGF的表达水平较模型组均有明显降低(P<0.05)。结论:雷公藤甲素能通过抑制CIA大鼠HIF-1α和VEGF的表达而发挥治疗作用。

胶原诱导类风湿关节炎小鼠的重要脏器病理变化

目的:观察胶原诱导关节炎(Collagen Induced Arthritis,CIA)小鼠发病高峰期重要脏器的病理变化。方法:20只雄性DBA/1小鼠随机分为正常组和模型组,模型组给予牛II型胶原混合完全弗氏佐剂诱导CIA模型。造模后每周进行关节炎指数评分,于第63天处死小鼠,取心、肝、脾、肺、肾各组织和踝关节,利用HE染色法观察各脏器的病理变化,并采用Real-time PCR法检测小鼠肺组织中转化生长因子β1(Transforming GrowthFactor Beta 1,TGF-β1)以及肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor Alpha,TNF-α)的m RNA表达水平。结果:成功建立了DBA/1小鼠胶原诱导关节炎模型。HE染色结果表明,除了踝关节出现明显的病理变化外,CIA小鼠的肺部有大量的炎细胞浸润,肺泡间隔增厚,肺泡腔中有炎性浸出物,而心脏、肝脏、脾脏和肾脏没有出现明显的病理变化。Real-time PCR结果显示病变的小鼠肺组织中TGF-β1和TNF-α的含量均显著高于正常的肺组织。结论:胶原诱导的DBA/1小鼠,其踝关节呈现严重的病理变化,其肺部也出现明显的炎症,且与类风湿关节炎肺部并发症的病理变化有相似之处,这些结果提示该模型可用于类风湿关节炎肺部病变的相关研究。

实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统不同部位病理变化比较

目的:探索实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠中枢神经系统不同部位间的病理变化,为疾病机制探索及治疗研究提供实验取材依据。方法:采用PLP139-151和百日咳毒素诱导SJL小鼠建立EAE模型,至发病高峰期分别取小鼠的大脑、小脑、脑干、颈髓、胸髓、腰髓进行HE染色及LFB髓鞘染色观察,比较各部位组织病理变化和髓鞘脱失情况。结果:脑干和大脑的病理变化显著,具有明显的血管袖套样炎性细胞浸润,小脑病理变化较小。三段脊髓均呈现出明显的病理变化,并以颈段和腰段最显著,出现明显的炎性细胞浸润和神经元细胞空泡状坏死。结论:在评判SJL小鼠EAE模型的病理特征时,脑干、大脑、颈髓和腰髓是最具特征的病变部位。

周龄对C57BL/6小鼠胶原诱导关节炎造模成功率的影响

目的:建立C57BL/6小鼠胶原诱导关节炎(CIA)模型,探讨小鼠周龄对造模成功率的影响。方法:取C57BL/6小鼠50只,雌雄各半,随机分为5组,每组10只。相同饲养条件下分别饲养到7,10,11,12及14周龄,相同造模方法构建小鼠CIA模型,观察小鼠造模成功率。结果:7周,10周,11周,12周及14周小鼠造模成功率分别为20%,30%,30%,50%及60%,其中雌性小鼠占46%,雄性小鼠占54%。结论:胶原诱导关节炎小鼠造模成功率受周龄影响,14周时成功率可达60%;造模成功率不受小鼠性别影响。

常山酮对人急性单核细胞白血病细胞增殖、凋亡及相关基因表达的影响

目的:研究常山酮对人急性单核细胞白血病(THP-1)细胞增殖、凋亡及Bax、Bcl-2 mRNA表达的影响。方法:取对数生长期的THP-1细胞,分别加入不同浓度的常山酮,CCK-8法检测THP-1增殖率;流式细胞术检测THP-1凋亡情况;实时定量PCR检测Bax及Bcl-2 mRNA的表达情况。结果:常山酮能抑制THP-1细胞增殖、诱导其凋亡,呈剂量依赖关系。常山酮作用后,THP-1细胞内Bax mRNA表达显著升高,而Bcl-2 mRNA表达显著下降。结论:常山酮能抑制THP-1细胞增殖、诱导其凋亡,其作用机制可能与上调Bax mRNA表达、下调Bcl-2 mRNA表达相关。

白术黄芪汤乙酸乙酯提取物对巨噬细胞NLRP3炎症小体的作用研究

目的:观察白术黄芪汤乙酸乙酯提取物对巨噬细胞NOD样受体-3(NLRP3)炎症小体的影响。方法:用佛波酯(PMA)(10 ng·m L-1)刺激U937细胞48 h,诱导其成为巨噬细胞,观察不同剂量白术黄芪汤乙酸乙酯提取物(0,3.125,6.25,12.5,25,50,100μg·m L-1)对细胞活力的作用,并选择合适的浓度。采用实时荧光定量(RT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)测定细胞中NLRP3,半胱天冬酶-1(caspase-1)的含量,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清液中白细胞介素(IL)-1β的含量。结果:细胞计数试剂盒(CCK-8)实验表明,当药物浓度低于25μg·m L-1时,对细胞活力没有影响,当药物浓度高于50μg·m L-1时,对细胞活力有抑制作用(P<0.05),选择25μg·m L-1浓度进行后续实验。与空白组相比,LPS组细胞中NLRP3,caspase-1表达明显增加(P<0.01),细胞培养上清中的IL-1β浓度也明显增高(P<0.01)。白术黄芪汤乙酸乙酯提取物作用后,NLRP3,caspase-1,IL-1β表达均明显下降(P<0.05)。结论:白术黄芪汤乙酸乙酯提取物对LPS刺激的巨噬细胞NLRP3炎症小体有抑制作用。

N-6甲基腺嘌呤在免疫调控中的研究进展

作为遗传物质,核酸在生命系统中起着基础性的作用。表观遗传修饰广泛存在于DNA和RNA中,这表明核酸不仅是遗传物质,而且在各种生物过程中具有复杂的调节功能,从而在遗传、生长和疾病等各方面都具有深远的影响。RNA的表观遗传修饰是核酸领域最重要的研究方向之一。迄今为止,已在所有生物体的RNA中鉴定出100多种转录后修饰类型。

“第六碱基”——5-羟甲基胞嘧啶研究进展

表观遗传学是目前生物领域最热门的研究之一,其中DNA甲基化是表观遗传学修饰的一种重要方式,指在DNA分子中加入甲基的过程。大量研究表明,DNA甲基化可引起DNA构象、染色质结构、DNA稳定性以及DNA与蛋白质相互作用方式的改变,从而调控基因表达。

基于系统药理学探索甘草有效成分甘草甜素的药理作用机制

该文拟通过一系列系统药理学方法探讨甘草甜素的药理作用机制。运用文本挖掘工具,获得甘草甜素主要相关疾病;在Polysearch和Pub Chem数据库获得甘草甜素的靶蛋白;运用网络可视化软件,构建甘草甜素靶蛋白质相互作用网络;借助基因本位论(GO)工具分析甘草甜素蛋白质群;通路富集分析甘草甜素靶蛋白的作用通路。文本挖掘结果表明甘草甜素主要相关疾病有慢性丙型肝炎、慢性肝炎、肝炎、HIV病毒、肝癌等;基因本位论分析结果表明甘草甜素主要通过修饰蛋白、修饰染色质等作用发挥生物学功能;信号通路富集结果表明甘草甜素主要作用蛋白与MAPK信号通路、Toll样受体信号通路、神经营养因子信号通路、癌症途径以及细胞凋亡等信号通路相关。可见,甘草甜素可能主要通过调控MAPK信号通路、Toll样受体信号通路等多途径发挥其药理作用。综合运用系统药理学的方法可以实现快速而全面的分析药物的药理作用。

一种基于EDTA脱钙法的改良骨组织脱钙方法

目的:探索操作方法简便、脱钙时间更短且对骨组织伤害较小的脱钙方法。方法:DBA/1小鼠40只,随机分组为胶原诱导关节炎模型组和正常组,并对模型组小鼠建立胶原诱导关节炎模型。分别取模型组和正常组踝关节,使用改良前后的脱钙方法进行脱钙,从关节病理及其评分、免疫组织化学方面进行比较脱钙效果。结果:经改良后,在脱钙温度4℃和脱钙液更换周期24 h条件下,脱钙速度较高(7 d),且此时对骨组织结构和骨组织内蛋白表达无明显影响。结论:优化的螯合剂脱钙法可以有效提高脱钙速度,可为快速制备病理诊断用骨切片提供了参考。

雷公藤甲素毒性作用及减毒研究的整合探析

雷公藤甲素是从卫矛科植物雷公藤的木质部提取到的环氧二萜内酯类化合物,是雷公藤的主要活性成分之一,具有抗炎、免疫调节及抗肿瘤等生物活性及药理学作用,可以用于治疗类风湿关节炎,多种肿瘤如白血病、乳腺癌、胰腺癌和肺癌等疾病。近年来,雷公藤甲素制剂虽然在临床中得到了一定的应用,但在发挥治疗作用的同时,其对机体消化系统、泌尿系统、生殖系统、循环系统、免疫系统等器官也产生了一些毒性作用,包括肝功能损伤,生育能力下降,胸闷、心悸、心动过缓、房室传导阻滞、心律失常,肾脏功能异常,淋巴器官的萎缩、淋巴组织内淋巴细胞的坏死和细胞数目的减少,免疫功能受损等。这些毒性作用极大限制了雷公藤甲素在临床中的应用,也限制了与其相关的制剂研发,引起了临床医生和科研人员的广泛关注。为了确保雷公藤甲素发挥治疗作用的同时,降低其在使用过程中对机体脏器的毒性,国内外研究者做了大量研究和尝试,如改变雷公藤甲素的化学结构提高其溶解性,开发载药系统削减其毒性,与中草药联合使用增效减毒等。该文对雷公藤甲素在基础研究中产生毒性作用的致毒剂量和机制,以及雷公藤甲素衍生物、载药系统、配伍减毒研究方面进行了整理分析,以期为雷公藤甲素毒性作用及减毒研究的深入探索提供参考。

多环芳香烃暴露与类风湿关节炎的相关性研究

目的基于大样本数据分析多环芳香烃(PAHs)暴露与类风湿关节炎(RA)的相关性。方法从美国国家健康与营养调查数据库筛选2005—2014年资料完整的RA患者(RA组)和非RA人群(非RA组)为研究对象,通过Logistic回归模型分析尿中8个单羟基(OH-)PAHs与RA之间的关系。结果共有357例RA患者和5256例非RA对照者纳入研究,经Logistic分析调整混杂因素后,与最低四分位数(Q1)浓度水平比较,OH-PAHs混合物在最高四分位数(Q4)浓度水平会增加RA患病的风险(OR=1.60、95%CI:1.16~2.23,P<0.05)。对于单个化合物,与Q1比较,1-羟基萘(OR=1.59、95%CI:1.14~2.23)、2-羟基萘(OR=1.66、95%CI:1.19~2.32)、2-羟基芴(OR=1.61、95%CI:1.17~2.22)、3-羟基芴(OR=1.64、95%CI:1.18~2.27)和1-羟基菲(OR=1.38、95%CI:1.00~1.94)、在Q4浓度水平下显著增加RA患病的风险(均P<0.05);而1-羟基芘(OR=0.60、95%CI:0.43~0.83)却在Q2浓度水平下能够降低RA的风险(P<0.01)。结论PAHs混合暴露是RA的危险因素,而单个OH-PAH化合物与RA发病之间的关联性是双向的,其依赖于OH-PAHs的种类和浓度。