人SIRT2基因结构和功能的生物信息分析及原核表达

目的:通过生物信息学方法预测和分析人沉默信息调节因子2(Silent Information Regulator 2,SIRT2)基因结构和功能,利用分子生物学方法构建SIRT2重组质粒并进行原核表达。方法:利用NCBI、STRING、ProtParam、Genecards和SWISS-MODEL等软件和数据库对SIRT2蛋白的理化性质、跨膜结构域、亚细胞定位、翻译后修饰、二级结构、三级结构及相互作用网络等生物学特性进行了预测分析,采用PCR扩增技术获得SIRT2基因的cDNA序列全长,通过同源重组的方法构建p ET-28aSIRT2重组表达质粒并进行原核表达。结果:人SIRT2蛋白由389个氨基酸组成,是一种呈酸性、不稳定的、亲水的胞内蛋白质。SIRT2主要分布在细胞质,具有38个潜在的磷酸化修饰位点,其二级结构主要是无规则卷曲。成功构建了重组质粒p ET-28aSIRT2,并通过IPTG诱导大肠杆菌BL21后成功获得SIRT2蛋白的表达,SIRT2主要存在于细菌裂解液离心之后的沉淀中。结论:本研究成功克隆了人SIRT2的编码区,结合多种生物信息软件对SIRT2的性质和功能进行了了解,为进一步研究SIRT2蛋白的生物学功能和肿瘤的靶向治疗作用机制提供思路。