氟西汀调节TLR4/NF-κB/NLRP3炎症体信号通路改善CUMS大鼠抑郁样行为

目的基于Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症体信号通路探究氟西汀对慢性不可预知性轻度应激(CUMS)模型大鼠抑郁样行为的作用。方法18只SD大鼠随机分为对照组、模型组和氟西汀组。模型组和氟西汀组大鼠随机给予不可预知性轻度刺激11周,制备抑郁症模型。氟西汀组于第7~11周灌胃氟西汀(10 mg·kg^(-1)·d^(-1)),其余组大鼠灌胃1 mL生理盐水。干预结束后进行行为学检测,酶联免疫吸附试验检测脑组织中白细胞介素(IL)-1β和IL-18的含量,免疫荧光染色观察海马CA3区和皮质区中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和胱天蛋白酶1(Caspase-1)的表达情况。Western blot测定脑组织TLR4、NF-κB、NLRP3、Caspase-1和活化的Caspase-1(cleaved Caspase-1)蛋白的表达水平。结果与模型组比较,氟西汀组大鼠在旷场的运动距离及站立次数显著增多,在高架十字迷宫的运动距离增加,且在闭臂的停留时间减少,大鼠脑组织中IL-1β和IL-18含量显著降低,TLR4、NF-κB、NLRP3、ASC、Caspase-1和cleaved Caspase-1蛋白的表达降低(P<0.05)。结论氟西汀可能通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3炎症体信号通路,降低脑组织中炎性因子IL-1β和IL-18的水平,从而改善CUMS大鼠的抑郁样行为。

基于外泌体蛋白质组学探讨叶酸缺乏对N2a-APP细胞β-淀粉样蛋白的影响

目的观察叶酸缺乏对N2a-APP细胞β-淀粉样蛋白(amyloid-β,Aβ)、外泌体数量的影响,利用外泌体蛋白质组学探讨叶酸缺乏影响神经细胞外泌体分泌的可能分子机制。方法体外培养N2a-APP细胞,根据有无叶酸添加,分成叶酸缺乏(folic acid deficiency,FD)组(0μmol/L)和叶酸正常(folic acid normal,FN)组(10μmol/L)。采用酶联免疫吸附法测定检测细胞内外Aβ_(1-40)和Aβ_(1-42)水平;试剂盒提取细胞培养液外泌体;电镜观察、粒径分析鉴定外泌体;Western blot检测外泌体标志蛋白及细胞内自噬相关蛋白;非标记定量技术检测外泌体蛋白质组变化,进行生物信息学分析。结果FD组N2a-APP细胞内外Aβ_(1-40)和Aβ_(1-42)水平高于FN组(P<0.05)。两组N2a-APP细胞分泌的物质均呈现外泌体典型结构,表达外泌体标志蛋白CD36和Flotillin-1。FD组外泌体蛋白浓度高于FN组[(637.56±47.31)μg/mL vs.(365.76±76.21)μg/mL,P<0.001]。蛋白质组学结果显示,FD组与FN组间有50种蛋白差异表达,其中FD组细胞分泌的外泌体内14种蛋白表达下降,36种蛋白表达增加。FD组细胞内自噬相关蛋白Beclin-1(1.33±0.11 vs.0.88±0.13)、LC3Ⅱ/Ⅰ(0.55±0.08 vs.0.40±0.04)表达高于FN组,p62(0.88±0.07 vs.1.27±0.16)低于FN组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论叶酸缺乏可影响N2a-APP细胞自噬水平、外泌体的分泌数量及内容物,增加细胞内外Aβ水平。

慢性应激对大鼠认知及小胶质细胞Aβ沉积的影响

目的 观察慢性应激对大鼠认知功能和小胶质细胞β-淀粉样蛋白(Aβ)沉积的影响。方法 16只雄性SD大鼠,随机分为模型组和对照组各8只。模型组大鼠经历12周慢性不可预知性刺激(CUMS),对两组大鼠进行行为学检测,检测脑组织Aβ和Aβ含量及其在小胶质细胞中沉积情况,检测小胶质细胞内Toll样受体4(TLR4)和晚期糖基化终产物受体(RAGE)的表达。结果 与对照组比较,模型组旷场实验和高架十字迷宫实验中的静止时间增加(P<0.01),运动距离缩短(P<0.05);模型组大鼠脑内Aβ和Aβ水平均升高(P<0.05);模型组大鼠海马区和皮质区活化的小胶质细胞的数量增加(P<0.05);模型组大鼠海马区和皮质区中小胶质细胞内的Aβ和Aβ增加(P<0.05);海马和皮质区内的小胶质细胞内TLR4和RAGE表达增加(P<0.05)。结论 慢性应激可引起大鼠认知功能减退,促进小胶质细胞激活和Aβ摄取受体表达上调,使小胶质细胞内Aβ含量增加。