自适应遗传算法用于自动组卷中的数学模型设计

针对传统组卷算法组卷速度慢,成功率较低,组卷质量不高等缺点,利用自适应遗传算法,设计出一种智能抽题算法的数学模型,能有效地解决试题库中的智能组卷问题.

半离散矩阵分解改进算法在网页信息检索中的应用研究

利用潜在语义索引的最新技术半离散矩阵分解算法来解决大规模网页索引计算的问题,在实践中根据稀疏矩阵的特点,对该算法进行改进,有效降低检索的响应时间,提高检索效率。

批评的错位——关于赵树理的身份问题

对身份定位的漠视往往造成批评与言说对象的错位,这在一定程度上影响了赵树理研究的进一步深入。该文通过考察赵树理对文学的最初选择、创作实践中的价值取向及其最终对小说形式的放弃这三个阶段,得出结论:从主体的角度来说,赵树理对"作家"这一身份缺乏自我认同感;但从文学创作的客观事实来看,赵树理的创作为中国文学的当代发展提供了独特的文本。这是评价赵树理文学作品的一个基点。

3-溴丙酮酸通过糖酵解抑制人肺腺癌H1975细胞增殖及诱导凋亡研究

目的探究3-溴丙酮酸(3-bromopyruvate,3-BP)对肺腺癌H1975细胞抑制增殖和诱导凋亡的影响。方法采用3-BP(0、10、20、40、80、160μmol·L^-1)处理H1975细胞,使用MTT检测3-BP对肺腺癌H1975细胞增殖的影响。采用集落克隆实验观察低浓度的3-BP(0、5、10、20μmol·L-1)对H1975细胞的增殖抑制作用。划痕和Transwell小室实验检测不同浓度3-BP(0、25、50、75μmol·L^-1)3-BP对H1975细胞迁移能力的影响。Annexin V-FITC/PI双染法检测3-BP对肺腺癌H1975细胞凋亡的影响。试剂盒检测3-BP对H1975细胞内活性氧及ATP水平的改变。Western blot检测3-BP对H1975细胞糖酵解及凋亡相关蛋白的影响。结果3-BP对肺腺癌H1975细胞具有明显的增殖抑制作用并明显降低了H1975细胞的迁移能力。3-BP可以明显增加肺腺癌H1975细胞的凋亡并在此过程中伴随着ATP水平的下降和活性氧水平的增高。Western blot检测表明3-BP上调了促凋亡蛋白Bax的表达,抑制了抑凋亡蛋白Bcl-2、糖酵解相关蛋白MCT1、HK-Ⅱ的表达。结论3-BP可以通过抑制糖酵解抑制人肺腺癌H1975细胞增殖并诱导肺腺癌细胞发生凋亡。

PI3K/Akt通路在内吗啡肽-1后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的探讨内吗啡肽-1对心肌缺血再灌注损伤中PI3K/Akt信号通路的作用以及对细胞凋亡的影响。方法将50只SD雄性大鼠随机分为5组:假手术组(S组)、缺血再灌注组(IR组)、内吗啡肽-1后处理组(EM50组)、内吗啡肽-1+渥曼青霉素后处理组(EM50+Wort组)和PI3K/Akt信号通路抑制剂渥曼青霉素后处理组(Wort组)。采用结扎大鼠心脏左冠状动脉前降支30 min,再灌注120 min复制心肌缺血再灌注模型,实验期间动态监测大鼠心率、平均动脉压;再灌注结束后检测大鼠血浆乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α、氧化应激指标超氧化物歧化酶和丙二醛等生化指标,RT-PCR检测Bax和Bcl-2基因的表达情况,Western blot检测心肌组织中凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、磷酸化Akt蛋白和总Akt蛋白的表达。结果与S组比较,IR组心率和血压降低(P<0.05);与IR组比较,EM50组心率和血压有所增高(339.94±26.65 vs 284.01±34.99;75.02±14.45 vs 55.83±20.98,P<0.05);血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α和丙二醛含量或活性下降(P<0.05),氧化应激指标超氧化物歧化酶活性增加(132.77±8.25 vs 84.10±12.42,P<0.05);p-Akt蛋白表达水平较高(0.61±0.06 vs 0.38±0.04,P<0.05),Bax基因和cleaved caspase-3蛋白表达量降低(1.70±0.39 vs 3.78±0.71;0.30±0.08 vs 0.53±0.07,P<0.05),Bcl-2基因的表达量升高(1.20±0.44 vs 0.55±0.25,P<0.05);与EM50组比较,EM50+Wort组心率和血压降低(P<0.05);血浆中乳酸脱氢酶、肌酸激酶、肌钙蛋白I、白介素-6、肿瘤坏死因子-α和丙二醛含量或活性增加(P<0.05),氧化应激指标超氧化物歧化酶活性降低(P<0.05);p-Akt蛋白表达水平较低(P<0.05),Bax基因和cleaved caspase-3蛋白表达量升高(P<0.05),Bcl-2基因表达量降低(P<0.05)。结论 EM-1后处理可调节细胞凋亡,减轻心肌缺血再灌注损伤。PI3K/Akt信号通路可能对EM-1后处理产生的心肌保护效应发挥一定的介导作用。

3-溴丙酮酸通过抑制糖酵解阻止A549肺腺癌细胞增殖并诱导其凋亡

目的探究3-溴丙酮酸(3-BP)对人肺腺癌A549细胞的增殖和凋亡的影响及机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测(10、20、40、80、160)μmol/L3-BP处理24、48 h,对肺腺癌A549细胞存活率的影响;采用(0、50、100、150)μmol/L 3-BP处理肺腺癌A549细胞24 h,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双染法结合流式细胞术检测A549细胞的凋亡率;试剂盒检测A549细胞ATP水平、2′,7′-二氯二氢荧光黄二乙酸酯(DCFH-DA)染色结合流式细胞术检测细胞活性氧(ROS)水平变化,Western blot法检测糖酵解及凋亡相关蛋白己糖激酶2(HK-2)、单羧酸转运蛋白1(MCT1)、丙酮酸脱氢酶激酶1(PDK1)和凋亡相关B细胞淋巴瘤分子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)的表达。近红外荧光蛋白(iRFP)和荧光素酶双标记的A549细胞接种至裸鼠皮下,当皮下肿瘤体积达到100 mm^(3)时,将所有裸鼠随机分成PBS组、5 mg/kg顺铂(DDP)组、7 mg/kg 3-BP组;每组5只,采用腹腔注射方式进行给药。HE染色检测肿瘤病变情况,免疫组织化学染色检测KI-67抗原(ki67)表达确定对肿瘤细胞增殖的影响,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡情况,评估3-BP的体内抗肿瘤效果并进行肝肾功能检测确定3-BP肝肾毒性。结果3-BP可以抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡;与对照组相比,3-BP处理组ATP水平明显下降,ROS水平明显升高,HK-2、MCT1、PDK1、Bcl2蛋白表达明显降低,BAX表达明显增加。动物模型结果显示,与PBS组相比,3-BP可以抑制裸鼠肺腺癌移植瘤的生长,3-BP可以抑制肿瘤细胞的增殖并诱导其凋亡,3-BP对裸鼠肝肾毒性较为轻微,安全性较高。结论3-BP通过抑制糖酵解抑制A549人肺腺癌细胞增殖并诱导其凋亡,对荷肺癌裸鼠的抗肿瘤效果较好且肝肾毒性较低。

IL -15、IL-21和4-1BBL 增强NK-92细胞增殖和细胞毒性的实验研究

目的:探讨IL-15、IL-21和4-1BBL组成的不同培养体系,对体外扩增的NK-92细胞毒活性的影响。方法:以三质粒系统包被携带IL-15、IL-21和4-1BBL基因的慢病毒,用慢病毒感染的方式制备2组饲养层细胞;筛选后经MMC处理分5组体外扩增NK-92细胞(NK-92组:NK-92细胞;K562组:K562细胞+NK-92细胞;IL-15组:表达IL-15和4-1BBL的K562细胞+NK-92细胞;IL-21组:表达IL-21和4-1BBL的K562细胞+NK-92细胞;IL-15+IL-21组:表达IL-15和4-1BBL的K562细胞、表达IL-21和4-1BBL的K562细胞+NK-92细胞);通过CCK-8法,乳酸脱氢酶释放法检测体外扩增后NK-92细胞的细胞毒性;ELISA检测NK-92细胞上清中IFN-γ的水平,以评估NK-92细胞的抗肿瘤效应。结果:两组转染后的HEK293FT细胞以及慢病毒感染的K562细胞携带绿色荧光,两组饲养层细胞成功表达目的基因;各组饲养层细胞都能刺激NK-92细胞大量增殖;随着效靶比的逐渐增加,IL-15组扩增后的NK-92细胞毒性显著高于其余各组(P<0.05);效靶比为5∶1和10∶1时,IL-15组NK细胞IFN-γ的释放量显著高于其余各组(P<0.05)。结论:膜结合型IL-15、IL-21与4-1BBL联合都能引起NK-92细胞的大量增殖,且IL-15与4-1BBL联合运用扩增的NK-92细胞有更强的杀伤肿瘤细胞的能力。

靶向c-Met的嵌合抗原受体T细胞制备及其对非小细胞肺癌的杀伤作用

目的:制备靶向c-Met蛋白的嵌合抗原受体T细胞(CAR-T),并检测其对人非小细胞肺癌(NSCLC)H1975细胞的体外杀伤作用。方法:将含c-Met抗体scFv片段的CAR序列插入慢病毒质粒中,用酶切质粒电泳,检测目的基因正确性。质粒转染工具为HEK293细胞,收集浓缩慢病毒,通过慢病毒感染的方式制备第二代c-Met CAR-T,通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot验证CAR序列的表达,采用流式细胞术检测c-Met CAR-T的阳性率、细胞亚型,流式细胞术验证NSCLC细胞H1975中c-Met蛋白的阳性表达并选择c-Met蛋白阴性表达的卵巢癌细胞A2780作为对照,采用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测c-Met CAR-T在效靶比为1∶1、1∶5、1∶10、1∶20时对H1975细胞的杀伤作用。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测c-Met CAR-T在靶抗原刺激下,细胞因子白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IFN-γ的释放情况。结果:成功合成c-Met CAR慢病毒重组质粒,酶切条带位置符合理论值。基因测序结果符合原设计序列,并成功包装慢病毒。Western blot和qRT-PCR结果显示,CAR分子存在于慢病毒感染后的T细胞中,c-Met CAR-T构建成功。c-Met CAR-T阳性率可达38.4%以上,且在慢病毒感染过后CD8 + T细胞比例有所上调。流式细胞术验证结果显示,NSCLC细胞H1975有较强的c-Met蛋白表达,卵巢癌细胞A2780 c-Met蛋白表达阴性。LDH释放实验提示,c-Met CAR-T的抗肿瘤作用随效靶比的提升而增强,且均高于对照组,当效靶比为20∶1时杀伤率达到51.12%。ELISA检测结果显示,与对照组比较,在靶细胞刺激下c-Met CAR-T能释放出更多的IL-2、TNF-α和IFN-γ,而Non target组无此效应。 结论:c-Met在NSCLC细胞系H1975中表达,可以作为NSCLC免疫治疗的靶点;靶向c-Met的CAR-T能对c-Met阳性肺癌细胞产生较强的体外杀伤作用。

来华留学生分层教学模式初探

现阶段,我国的来华留学生汉语教育正处在一个由量的飞跃到质的提升的转折时期.一方面,来华留学生的规模越来越大,学习者群体结构越来越复杂;另一方面,国内各个高校的留学生汉语教学水平参差不齐.面对挑战,高校应做好留学生汉语教学的顶层设计,积极探索分层教学的模式,优化教学效果,提升教学质量.

双荧光标记的肺癌皮下移植裸鼠模型的建立

目的 建立荧光素酶(Luc)和近红外荧光蛋白(iRFP)双标记的肺癌皮下移植裸鼠模型.方法 采用Gateway法构建表达Luc和iRFP的慢病毒载体,经酶切测序验证后,制备慢病毒,感染肺癌A549细胞.嘌呤霉素筛选阳性A549细胞(即mA549细胞)并进行扩增,荧光显微镜下观察Luc和iRFP的表达,免疫荧光检测细胞表面c-Met蛋白的表达.将A549和mA549细胞分别接种至裸鼠皮下,每组6只,采用活体成像技术观察瘤体生长和荧光表达情况,HE染色和免疫组化染色评估成瘤状况.结果 成功构建了稳定表达Luc和iRFP的mA549细胞系.荧光显微镜下观察到mA549细胞中iRFP与Luc成功表达.免疫荧光检测显示,A549细胞和mA549细胞均可表达c-Met蛋白.mA549细胞接种裸鼠后,模型生长周期适中,成瘤率为100%;mA549细胞移植瘤的生长趋势与A549细胞移植瘤无明显差异(P>0.05).HE染色显示,mA549与A549细胞移植瘤的细胞形态和组织结构相同.免疫组化染色显示,A549和mA549细胞移植瘤均表达c-Met蛋白.结论 成功构建了稳定的、可实时监测的iRFP-Luc-A549肺癌细胞裸鼠模型.

斑蝥酸钠诱导非小细胞肺癌H1975细胞凋亡的作用及机制研究

目的:探究斑蝥酸钠(Sodium cantharidate,SCA)对非小细胞肺癌H1975细胞增殖和凋亡的影响并探究其相关机制。方法:人非小细胞肺癌H1975细胞分为空白对照组(生理盐水)、斑蝥酸钠4、8、16μmol/L组。药物处理24 h和48 h后,使用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测各组细胞存活率;集落克隆试验检测细胞增殖能力;Transwell试验检测细胞迁移和侵袭能力的变化。AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色检测细胞核变化;Western Blot法检测斑蝥酸钠对H1975细胞蛋白激酶B(AKT)通路磷酸化和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白及抑凋亡蛋白B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)、促凋亡蛋白BCL-2相关X蛋白(BAX)和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达的影响。结果:与空白对照组相比,4、8、16μmol/L的斑蝥酸钠组H1975细胞的增殖能力受到显著抑制,细胞存活率、侵袭、迁移能力明显降低,细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。磷酸化AKT、mTOR蛋白的表达下调,BCL-2/BAX比值明显降低,cleaved-Caspase-3蛋白的表达明显上调(P<0.05)。结论:斑蝥酸钠能抑制人非小细胞肺癌H1975细胞增殖,侵袭迁移,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制AKT/mTOR通路,调控BCL-2和BAX的表达有关。