基于网络药理学与分子对接探究中兽药复方乳康颗粒治疗奶牛乳房炎的作用机制

【目的】探究中兽药复方乳康颗粒(RKG)治疗奶牛乳房炎的作用机制。【方法】通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)、中医药百科全书(ETCM)平台获取中兽药复方乳康颗粒中黄芪、王不留行、益母草的有效成分及靶点,利用Cytoscape v 3.7.2构建中兽药复方乳康颗粒中药-成分-靶点网络图,从NCBI、OMIM、GeneCards、MalaCards平台获取奶牛乳房炎靶点,使用Cytoscape v 3.7.2中的Bisogenet插件对中兽药复方乳康颗粒成分靶点及奶牛乳房炎的靶点进行综合分析,构建蛋白互作(PPI)网络图,并使用DAVID进行GO功能和KEGG通路富集分析,探讨其治疗奶牛乳房炎的作用机制。采用分子对接对网络药理学预测结果进行初步验证。【结果】通过网络药理学筛选出槲皮素、山奈酚、异鼠李素等23个中兽药复方乳康颗粒相关的活性成分,文献检索得到奶牛乳房炎相关靶点有肿瘤坏死因子(TNF)、Toll样受体4(TLR4)、白细胞介素17A(IL17A)等49个,通过Bisogenet插件对其进行PPI分析后得到中兽药复方乳康颗粒作用于奶牛乳房炎的关键靶点77个,涉及到靶点肿瘤蛋白P53(TP53)、核因子κB P65(RELA)及乳腺癌1号基因(BRCA1)等。GO功能富集分析结果表明,生物过程富集在DNA修复、蛋白质泛素化等;主要通过泛素蛋白连接酶结合、ATP结合等分子功能发挥作用;细胞组分条目涉及胞浆、细胞质和细胞核等。KEGG通路富集分析结果表明,中兽药复方乳康颗粒主要调节丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)、PI3K-Akt等信号通路。分子对接结果表明,槲皮素、山奈酚、异鼠李素与BRCA1、RELA和TP53之间均形成了氢键,且结合能<-3 kJ/mol,其中RELA与上述成分亲和力最强。【结论】网络药理学分析表明,中兽药复方乳康颗粒主要通过槲皮素、山奈酚、异鼠李素等有效成分作用于TP53、MAPK、BRCA1、RELA等靶点,调节MAPK、PI3K-Akt等信号通路,从而达到治疗奶牛乳房炎的作用。

高效液相色谱法测定天然植物饲料原料中绿原酸含量

本文旨在建立一种高效液相色谱法测定天然植物饲料原料中绿原酸含量的分析方法。样品用甲醇水溶液(1:1,V/V)提取后,滤过,高效液相色谱法测定。色谱柱为岛津InertSustain C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.4%醋酸溶液为流动相,梯度洗脱。柱温25℃,流速1.0 mL/min,检测波长330 nm。结果表明:该方法在0.025~0.5 mg/mL内线性良好,R^(2)=0.999 9;该方法具有较好的重复性、准确度和精密度,加样回收率为93.08%~104.86%,相对标准偏差(RSD)小于3.07%,可用于测定天然植物饲料原料中绿原酸含量。

基于网络药理学和分子对接探究马齿苋治疗溃疡性结肠的作用机制

为探究马齿苋治疗溃疡性结肠炎的作用机制,本试验采用网络药理学联合分子对接技术对其作用机制进行初步预测。利用TCMSP数据库,寻找马齿苋的活性成分及其作用靶点,使用Uniprot对靶点名称进行规范。溃疡性结肠炎的相关靶点来自Genecard、OMIM、Malacards疾病数据库,随后与马齿苋的靶点取交集,得到马齿苋治疗溃疡性结肠炎的关键靶点。网络药理学分析结果显示,马齿苋可能通过槲皮素、山萘酚、β-谷甾醇等10个活性成分作用于IL-1β、IL-6、VEGF等76个核心靶点发挥作用。通过对上述76个核心靶点进行富集分析后,发现癌症通路(Pathway in cancer)、PI3K-Akt通路及MAPK通路参与了马齿苋的治疗。分子对接结果也显示,马齿苋的活性成分与关键靶点均具有良好的连接活性,证明了网络药理学预测结果的准确性。本试验结果初步表明,马齿苋可以通过多成分、多靶点、多通路发挥治疗溃疡性结肠炎的作用。

高效液相色谱法测定天然植物饲料原料中甘草酸含量

试验旨在建立一种高效液相色谱法测定天然植物饲料原料中甘草酸含量的分析方法。样品用甲醇-0.2 mol/L乙酸铵溶液-冰醋酸(67:33:1,V/V/V)提取后,过滤,高效液相色谱法测定。色谱柱为岛津InertSustain C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-0.2 mol/L乙酸铵溶液-冰醋酸(67:33:1,V/V/V)为流动相,柱温30℃,流速1.0 mL/min,检测波长为250 nm。结果表明:该方法在0.01~0.2 mg/mL内线性良好,r2大于0.999。该方法具有较好的重复性、准确度和精密度,加样回收率为92%~105%,相对标准偏差小于1.35%,可用于测定天然植物饲料原料中甘草酸含量。

茵山莲水提物对四氯化碳诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

为探讨茵山莲水提物对四氯化碳(CCl_(4))诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用及可能机制,以对后续茵山莲的深入研究及临床转化提供理论指导。将60只ICR小鼠随机分为6组,每组10只,分别为空白对照组、模型对照组、联苯双酯对照组、茵山莲低(1.17 mg·g^(-1))、中(2.34 mg·g^(-1))、高(4.68 mg·g^(-1))剂量组,按不同剂量药物每天灌胃1次,给药7 d。在末次给药1 h后,除空白对照组以外,其余各组小鼠腹腔注射0.2%四氯化碳构建急性肝损伤模型。12 h后小鼠眼球采血并分离血清,收集肝组织。采用生化分析检测血清总蛋白(TP)和谷胱甘肽S转移酶(GST)活性,肝组织中GST、琥珀酸脱氢酶(SDH)、过氧化氢酶(CAT)和总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性,利用HE染色和Masson染色观察肝组织病理及肝纤维化情况,采用蛋白免疫印迹法和免疫组织化学法检测肝组织白介素1beta(IL-1β)、肿瘤坏死因子alpha(TNF-α)、血管生成因子A(VEGFA),金属基质蛋白酶9(MMP9)及转录因子NF-κBp65、蛋白激酶IKK、p38MAPK等蛋白表达及定位情况。结果表明,与模型对照组相比,2.34 mg·g^(-1)茵山莲水提物能显著降低小鼠血清GST水平,显著升高肝内CAT水平,各组间T-SOD无显著差异,但2.34 mg·g^(-1)茵山莲水提物组小鼠与空白对照组、模型对照组在肝GST、SDH和血清TP水平上无显著差异。2.34 mg·g^(-1)茵山莲水提物能缓解CCl_(4)诱导的小鼠肝病理损伤和纤维化病变,抑制肝IL-1β、TNF-α、VEGFA、NF-κBp65和IKK的表达。提示茵山莲水提物可能通过NF-κB和p38MAPK通路抑制肝氧化应激和炎症水平,从而缓解小鼠急性肝损伤。

中兽药创新研发与实验动物模型应用

动物与人类健康息息相关,中兽药在健康养殖、动物性食品安全中扮演重要的角色,我国应用中兽药防病治病、提高机体免疫力有数千年的历史,近年来随着标准化、规模化健康养殖发展和动物性食品安全的需要,需要在传统应用经验的基础上结合现代养殖需要研发创新中兽药,更好的服务动物健康、保障人类健康。在现代中兽药的研究过程中,实验动物模型在开发新型中兽药和有效性、安全性以及作用机理等方面有着巨大的贡献,现已被广泛的应用于研究中兽药的相关研究中,基于这样的一个背景下,本文围绕中兽药创新研发的实验动物应用研究进展展开综述。

仔猪断奶应激综合征与腹泻型肠易激综合征肝郁脾虚证对比研究

仔猪断奶后1~2周,通常发生食欲差、消化功能紊乱、腹泻、生长缓慢、饲料利用率低、精神状况以及外貌表现不佳等一系列变化的现象,总称仔猪断奶应激综合征。其病死率较高,即使耐受也会严重影响到仔猪后期生长发育和成年后的生产性能,临床治愈率不高,并缺乏合适的实验动物模型用以研究。经文献分析,仔猪断奶应激综合征和腹泻型肠易激综合征肝郁脾虚证在病因、病机和证型上有共同之处。因此该文就仔猪断奶应激和腹泻型肠易激综合征动物模型的病因、病机、证型和相关实验动物模型做一综述,为应用腹泻型肠易激综合征肝郁脾虚证动物模型研究临床复杂性疾病仔猪断奶应激综合征提供支持。

铁苋菜对RAW 264.7细胞NLRP3及炎症因子表达的影响

利用中药网络药理学结合脂多糖(LPS)诱导RAW 264.7细胞建立的炎症模型,共同探讨铁苋菜(AAL)治疗溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。基于文献研究并结合OMIM、Drugbank、TDD数据库筛选得到AAL以及UC相关靶标,进行GO功能分析和KEGG通路富集分析。将RAW 264.7细胞分为空白对照组、LPS组、阳性药物组、铁苋菜高、中、低剂量组(900,800,700 mg/L)。观察高、中、低剂量AAL对RAW 264.7的细胞活力和细胞凋亡的影响,同时采用qRT-PCR和Western blot检测高、中、低剂量AAL对NLRP3、GSDMD、Caspase-1、ASC、IL-1β、IL-18、MUC-2、OCLN的mRNA与蛋白表达水平的影响。网络药理学结果显示AAL治疗UC主要涉及凋亡过程的负调控及PI3K-Akt信号通路等过程。体外试验显示700,800,900 mg/L AAL显著抑制LPS处理的巨噬细胞的活力,减少细胞凋亡,降低NLRP3、GSDMD、Caspase-1和ASC mRNA和蛋白的表达。以上结果表明AAL可通过抑制NLRP3/Caspase-1信号通路,减少炎症因子IL-18和IL-1β的分泌,从而减轻LPS诱导的炎症,治疗UC。