DNA甲基化与胃癌诊治研究进展

胃癌是常见的消化道肿瘤之一,其早期诊断和治疗一直是临床上的重要课题。在肿瘤形成过程中,表观遗传学改变特别是DNA甲基化在胃癌发生、发展中扮演着重要角色。基因启动子Cp G岛甲基化参与了肿瘤细胞的多种代谢,而转录因子可能通过募集DNA甲基转移酶至抑癌基因的Cp G岛催化甲基化形成,因此一些DNA甲基转移酶抑制剂有望用于胃癌的治疗。

不同分期老年肌少症患者睾酮、雌二醇、IL-6水平的相关性

目的研究不同分期老年男性肌少症患者睾酮、雌二醇及白介素-6(interleukin 6,IL-6)的表达水平及相关性。方法收集162例患者作为研究对象,根据肌力、肌量及步速分为非肌少症组和肌少症组。采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血液中睾酮、雌激素、IL-6的水平,并分析与老年肌少症的相关性。结果本研究入组162例研究对象中,肌少症患者68例(41.98%),其中Ⅰ期16例,Ⅱ期31例,Ⅲ期21例。肌少症患者的睾酮、雌二醇水平低于非肌少症患者,且肌少症分期越晚,睾酮、雌二醇水平下降越明显,差异有统计学意义(P<0.01)。相反,肌少症患者的IL-6水平明显高于非肌少症患者(P<0.01)。肌少症组患者的睾酮水平与雌二醇水平呈正相关(r=0.832,95%CI:0.780~0.916,P<0.01),而与IL-6水平呈负相关(r=-0.946,95%CI:-0.961~-0.935,P<0.01)。在睾酮水平降低的51例肌少症患者中,雌二醇水平降低者占78.4%(40例),IL-6升高者占74.5%(38例)。结论不同分期的老年肌少症患者睾酮水平与雌二醇、IL-6存在相关性,可能是肌少症患者肌肉质量下降、高炎性反应的潜在机制。

老年新型冠状病毒肺炎患者的临床特征

目的分析老年新型冠状病毒肺炎患者的临床特征。方法收集老年新型冠状病毒肺炎患者的临床资料,并分为轻症组和重症组,分析两组一般情况、主要临床症状、实验室检测指标和胸部CT特征。结果共纳入86例老年新型冠状病毒肺炎患者,轻症组41例,重症组45例;其中死亡5例(5.8%),合并1种以上基础疾病者55例(64.0%),伴糖尿病者18例(72%)为重症。65例(75.6%)患者有发热症状。重症组中性粒细胞百分比明显升高(P=0.01),而淋巴细胞计数明显降低(P<0.01)。重症组C反应蛋白(CRP),白细胞介素(IL)-6、D-二聚体水平明显升高(P<0.05)。所有患者胸部CT有不同程度的改变,符合新型冠状病毒肺炎的影像学特征。结论老年新型冠状病毒肺炎患者的病情复杂,多合并1种以上基础疾病,易向重症/危重症进展。

BDNF及其受体TrkB在慢性应激大鼠结肠动力紊乱中的调节作用及其机制

目的 观察脑源性神经营养因子（BDNF）及其受体酪氨酸激酶B（TrkB）在慢性应激大鼠结肠动力紊乱中的作用及其机制.方法 将20只Wistar雄性大鼠称重后按完全随机方法分成两组,避水应激组（WAS组）和假避水应激组（SWAS组）,每组10只.记录两组在慢性避水应激模型造模期间粪便粒数;酶联免疫吸附试验（ELISA）、实时定量PCR、Western印迹和免疫组化法检测BDNF和TrkB在大鼠血清及结肠肌层的表达.分别用河豚毒素（TTX）、BDNF和TrkB抑制剂K252a、BDNF孵育各组近端结肠肌条,记录近端结肠环形肌条肌张力的变化.结果 WAS组大鼠造模期间粪便粒数明显多于SWAS组（P＜0.05）.WAS组大鼠血清BNDF水平高于SWAS组[（158.30±9.82）比（84.68 ±7.80） pg/ml]、结肠肌层TrkB蛋白表达水平高于SWAS组（0.44±0.03比0.30±0.02）（均P＜0.05）,而肌层BDNF mRNA表达两组差异无统计学意义（P＞0.05）.TrkB主要在肌层神经元的细胞核表达,且WAS组表达明显强.WAS组近端结肠环形肌条收缩幅度明显高于SWAS组[（0.35±0.02）比（0.22±0.03）g,P＜0.05];加入TTX阻断肠神经作用后,WAS组环形肌条收缩幅度仍大于SWAS组[（0.89±0.07）比（0.53 ±0.06）g,P＜0.05];用BDNF孵育肌条,记录不同时间点的标准化率（R值）,其中孵育6、12 min时两组肌条R值差异有统计学意义（均P＜0.05）,BDNF能诱导收缩波峰;用K252a孵育环形肌条30 min后加入BDNF,导致BDNF引起的峰值延后且降低.结论 BDNF通过作用于TrkB受体在慢性应激大鼠结肠动力紊乱中发挥一定的调节作用.

硫化氢对大鼠结肠收缩活动的影响及其离子通道机制

目的 探讨硫化氢（H2S）对大鼠结肠收缩活动的影响及其离子通道机制.方法 取30只雄性Wistar大鼠远端结肠制备纵行肌条（LMS）及环形肌条（CMS）；张力换能器及多通道生理信号采集处理系统记录H2S供体硫氢化钠（NaHS）对LMS和CMS自发性收缩活动的影响及河豚毒素（TTX）孵育后NaHS对LMS和CMS收缩活动的影响；采用酶消化法分离近端结肠平滑肌细胞,运用全细胞膜片钳技术记录NaHS对平滑肌细胞L型钙通道电流（ICa.L）和大电导钙激活钾电流（IBKCa）的影响.结果 NaHS[（1～ 12）× 10-5mol/L]浓度依赖性促进结肠LMS和CMS的收缩活动,其中（2 ～ 12）×10-5mol/L NaHS使LMS和CMS收缩显著增加（均P＜0.05）,且该促进作用不被TTX阻断；NaHS（6 ×10-5和12×10-5 mol/L）浓度依赖性促进ICa.L,使0 mV处ICa,L由（-3.16 ±0.47）pA/pF分别增加至（-3.33 ±0.54）、（-3.65±0.66）pA/pF（均P＜0.05）；NaHS（12×10-5 mol/L）作用前后,最大峰电流均在0 mV处,不改变L型钙通道的电压依赖特性,亦不影响L型钙通道的激活态；NaHS（12×10-5 mol/L）对L型钙通道的促进作用具有时间依赖性、可逆性；NaHS（6×10-5和12×10-5 mol/L）浓度依赖性抑制IBKCa,使60 mV处IBKCa由（16.68±1.23） pA/pF分别降低至（15.26±2.67）、（13.80±3.04）pA/pF（均P＜0.05）.结论 低浓度H2S可能通过开放平滑肌细胞L型钙通道,抑制大电导钙激活钾通道,进而促进大鼠结肠平滑肌收缩.

P物质与慢性应激诱导的大鼠结肠动力紊乱的关系及其机制

目的:研究P物质(SP)在慢性应激引起的大鼠结肠动力紊乱中的作用及其机制。方法:采用SPF级Wistar大鼠,体重180-200g,随机分为模型组(WAS组,即避水应激组)和对照组(SWAS组,即假避水应激组)。WAS组采用经典避水应激模型,每天给予避水应激处理1h,连续10d。造模结束后,用10%水合氯醛麻醉大鼠,分别留取心脏采血标本及结肠肌层标本。采用酶联免疫分析法检测血清SP水平,采用实时荧光定量PCR技术检测结肠肌层神经激肽受体1(NK1R)mRNA的表达水平。此外,应用膜片钳技术检测结肠平滑肌细胞L型钙电流的变化。结果:WAS组大鼠血清SP水平显著高于SWAS组(P<0.01),WAS组结肠肌层NK1R mRNA表达水平明显高于SWAS组(P<0.05),WAS组大鼠平滑肌细胞的峰电流加SP前后的比值与SWAS组比值相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:慢性应激可诱导结肠肌层NK1R表达增加,而SP可通过作用于表达于结肠肌层NK1R引起结肠动力的改变,在肠易激综合征的肠动力紊乱中发挥重要作用。

P物质对大鼠结肠平滑肌细胞钾钙电流的影响

目的 研究P物质（SP）对大鼠近端结肠平滑肌细胞大电导钙激活钾通道电流（IBKCa）和L型钙通道电流（ICaL）的影响,探讨其促结肠动力的作用机制.方法 选取健康雄性Wistar大鼠24只,采用RM6240生理信号采集处理系统记录SP对大鼠近端结肠平滑肌肌条收缩的影响;采用全细胞膜片钳技术检测SP对近端结肠平滑肌细胞IBKCa和ICaL的影响.结果 10-7～10-6 mol/L的SP能促进大鼠离体结肠平滑肌纵行肌肌条的自发性紧张性收缩;10-8～10-6mol/L的SP能促进环行肌肌条的自发性收缩（均P ＜0.05）.SP（10-6 mol/L）减低IBKCa,在＋60 mV刺激电压下,施加SP干预后,IBKCa电流密度为（11.71±1.65） pA/pF,较对照组的（14.42 ±2.89） pA/pF明显降低（P＜0.05）;SP（10-mol/L）还增大ICaL,在0 mV刺激电压下,施加SP干预后,ICaL电流密度为（-5.04±0.67）pA/pF,较对照组的（-4.25±0.46）pA/pF明显增大（P＜0.01）.结论 SP能够促进大鼠离体结肠平滑肌肌条的自发性收缩,且呈浓度依赖性.SP减低IBKCa,增大ICaL.可能是SP促胃肠动力的机制之一.

慢性应激大鼠模型肠道P物质及其受体表达的变化

目的建立慢性应激模型，观察慢性应激对P物质（sP）及其受体表达的影响。方法将实验大鼠随机分为反复避水应激（WAS）模型组（WAS组）和对照组（SWAS组），采用连续10d的WAS建立动物模型；腹腔麻醉处死大鼠后取近端结肠，制备纵行肌（LM）和环形肌条（CM），采用浴槽实验观察WAS组和SWAS组结肠平滑肌细胞自发性的收缩活动并比较两组收缩的强度；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测WAS组和SWAS组血清及结肠黏膜sP水平；采用免疫组织化学法检测神经激肽1型受体（NKlR）和神经激肽2型受体（NK2R）在结肠的分布；采用Westernblot测定NK!R和NK2R在WAS组和SWAS组中结肠肌层的表达。结果反复WAS使大鼠结肠LM和CM自发性收缩幅度增加[LM：（1．14±0．05）g比（0．94±0．04）g；CM：（0．36±0．02）g比（0．25±0．02）g，P〈0．01]，且使模型组于造模第1、3、5、7、10天的大鼠排便增加；与对照组比较，WAS组大鼠m清sP浓度显著升高[WAS组：（212．1±10．6）pg／ml比SWAS组：（105．5±4．4）pg／ml，P〈0．01]；反复避水应激使大鼠结肠黏膜sP水平增加[WAS组：（661．5±20．6）pg／mg蛋白比SWAS组：（250．1±12．1）pgJmg蛋白，P〈0．01]；NK1R主要分布于WAS和SWAS大鼠结肠黏膜上皮、固有层平滑肌细胞及肠神经元；NK2R主要分布于WAS和SWAS大鼠结肠黏膜上皮及肠神经元，固有层平滑肌细胞散在分布；反复WAS使大鼠结肠肌层NKlR表达上调而NK2R表达无明显改变。结论慢性应激诱导大鼠结肠动力增强，SP-NK1R信号系统可能参与该病理生理过程的发生。

脑源性神经营养因子对慢性应激诱导的大鼠结肠高动力的调节作用

目的观察脑源性神经营养因子（BDNF）对慢性应激诱导的大鼠结肠高动力的调节作用。方法建立假避水应激（SWAS）和避水应激（WAS）大鼠模型，取结肠黏膜层检测BDNF和P物质（SP）含量；采用免疫组织化学及Westernblot检测酪氨酸蛋白激酶受体（TrkB）在近端结肠的分布；取近端结肠制备纵行肌（LM）及环形肌（CM）肌条，用张力换能器及多通道生理信号采集处理系统观察BDNF及其受体抗体（TrkB-antibody）对SP诱导的LM和CM收缩活动的影响。结果WAS组黏膜BDNF和SP浓度明显高于对照组[BDNF（6．4±0．3）ng／mg比（3．3±0．2）ng／mg，P〈0．01；SP（661．5±20．6）pg／mg比（250．1±12．1）pg／mg，P〈0．01]；TrkB主要分布于肠神经元及黏膜层，且WAS组肌层TrkB表达显著高于SWAS组（P〈0．01）；BDNF预处理肌条后，WAS组sP诱导的结肠CM收缩显著高于对照组[R值（SP诱导的3min内收缩峰值与基础值的比值定义为R值），8．71±0．90比5．38±0．75，P〈0．05]，且该作用被TrkB—antibody阻断。结论BDNF通过TrkB参与慢性应激诱导的结肠高动力的发生，其受体拮抗剂对应激诱导的肠道动力紊乱有潜在的治疗作用。