人骨髓间充质干细胞的超微结构

目的 :分离培养人骨髓间充质干细胞 ,进行超微结构观察。方法 :冲洗出流产胎儿股骨骨髓内容物 ,梯度离心 ,取含有骨髓间充质干细胞的低密度血小板层进行培养 ,分别在透射电镜、扫描电镜下进行超微结构的全面观察。结果 :透射电镜下可见细胞有两种不同的形态结构 ,细胞间有许多缝隙连接 ;扫描电镜下可见细胞表面有短而粗的微绒毛突起。结论

海水直接肺损伤的犬模型研究

目的建立海水直接肺损伤的犬模型,为研究海水及其成分对肺直接损伤机制及其治疗提供研究平台。方法排除低氧血症和酸中毒等因素对海水直接肺损伤的影响,选择18只健康犬随机分为3组(n=6), 即全肺海水灌注组( A组)、右肺海水灌注组( R组)和右膈叶海水灌注组即海水直接肺损伤组(D组)。对比观察三组血流动力学、血气酸碱、电解质等指标以及肺组织细胞学改变,以支气管纤维镜连续观察D组三级支气管内海水灌注前后的变化,检测支气管肺泡液和血液乳酸脱氢酶(LDH-L)、碱性磷酸酶(ALP)浓度。结果(1)D组的动脉氧分压(PaO2)、动脉二氧化碳分压(PaCO2)、pH、实际重碳酸盐(AB)、过剩碱(BE)、呼吸频率、潮气量值与其余两组比较有显著差异(P<0.01)。(2)A组和R组各时段PaO2、Pa-CO2、pH、AB、BE、潮气量、呼吸频率值与海水灌注前相比有显著差异(P<0.01)。(3)D组血流动力学和血气酸碱及电解质等指标与海水灌注前相比无统计学差异(P>0.05)。(4)三组海水灌注区肺组织损伤均明显,出现充血水肿,局部有暗红色片状改变和梗死出血灶,光镜下可见肺泡水肿、肺泡萎陷、肺间质充血水肿明显及大量中性粒细胞浸润和肺出血。电镜下可见肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤、呼吸膜增宽、血小板附壁。(5)支气管纤维镜连续观察D组海水灌注区支气管有不同?

人发角蛋白人工腱植入部位的形态学观察

人发角蛋白人工腱植入部位的形态学观察朴英杰刘连璞戴云王铁丹肖应庆郭明秋（第一军医大学，广州５１０５１５）多年来，国内外先后开展了自体腱和同种异体腱的应用研究。由于自体腱取材受限而难以广泛应用，而植入同种异体腱则可出现不同程度的排斥反应。不能腱化成为自...

自噬的抑制影响长春新碱诱导的肝癌细胞自噬性凋亡

目的 研究自噬特异性抑制剂 3 甲基腺嘌呤 (3 methyladenine ,3MA)对长春新碱 (vincristine,VCR)诱导的肝癌细胞系HepG2细胞自噬性凋亡的影响。 方法 利用已建立的VCR诱导HepG2细胞自噬性凋亡之模型 ,采用monodansylcadaverin(MDC)染色及流式细胞术荧光强度测定方法对自噬进行定量研究 ,采用流式细胞术及DNA电泳检测细胞凋亡。结果 3MA可以特异性地阻止自噬泡形成 ,还可以部分地抑制HepG2细胞自噬性凋亡。 结论 自噬是VCR诱导的HepG2细胞自噬性凋亡所必需的。

人发角蛋白人工腱体内降解的形态学及泛肽、溶酶体酶的活性变化

目的阐明人发角蛋白(HHK)人工腱植入体内后的降解过程.方法选取30只新西兰大白兔,随机分为术后第1、3、6、9、12周实验组和正常对照组.实验组行跟腱切除后植入HHK人工腱,按期进行常规形态学观察和泛肽组化及酸性磷酸酶(AcP)酶细胞化学观察.结果光镜形态学观察显示,人工腱植入后第l周出现人发毛小皮脱落、消失,人发呈均质状,表面附着巨噬细胞和多核巨细胞,到第3～6周可见降解成颗粒的人工腱被巨噬细胞和多核巨细胞吞噬.泛肽酶组化显示第l～3周,人发周围的巨噬细胞、多核巨细胞和成腱细胞内反应呈强阳性,周围组织呈中等阳性,到第9周,大部分人发被降解,泛肽酶反应在基质呈弱阳性,在腱细胞中呈中等阳性.电镜形态学观察显示毛发之间出现成腱细胞,并开始分泌蛋白多糖和前胶原蛋白,第9～12周,人工腱基本被降解,同时完成了新生自体腱的形成.酶细胞化学观察显示被吞噬的颗粒呈AcP酶反应阳性.结论在HHK人工腱的降解过程中,泛肽系统首先在细胞外将大体积的人发降解,降解后期细胞内泛肽系统通路和溶酶体通路分别对吞入的人工腱颗粒进行降解,且具有协同作用.

大鼠坐骨神经再生过程中的施万细胞自噬作用

目的探讨大鼠坐骨神经再生过程中的细胞自噬作用。方法横切大鼠坐骨神经制作wallerian变性模型,分别于造模后0、0.5、1.0、1.5、2.0、3.0、4、5、7、10、15 d取远断端组织行电镜结构观察。结果轴突在第0.5天时从髓鞘脱离,溃变呈空泡状。第2天开始髓鞘皱褶、断裂形成碎片,神经膜细胞(Schwann cell, 施万细胞)内见大的膜结合髓鞘碎片和许多散在小碎片,并与溶酶体融合形成自噬泡,呈酸性磷酸酶(AcPase)阳性。第4天时内膜区偶见幼稚细胞,1周后见大量幼稚细胞。第7天后施万细胞内自噬泡数量开始减少。实验全程偶见巨噬细胞,内有吞噬泡。结论大鼠坐骨神经再生过程中溃变髓鞘主要经施万细胞自噬清除,施万细胞脱分化为施万细胞祖细胞后大量增殖分化参与神经再生过程。

人发角蛋白人工腱诱导自体腱形成中胶原原纤维的形态学变化

目的观察人发角蛋白(HHK)人工腱诱导自体腱形成过程中胶原原纤维形成的形态学变化。方法制备肌腱损伤动物模型,植入HHK人工腱,于术后3、6、9、12、16周取出,进行光镜及电镜观察。结果自体腱形成过程中,先后有一级、二级和三级胶原原纤维形成。结论HHK人工腱诱导自体腱形成过程中,人工腱植入区肌腱断端和腱膜下的腱细胞去分化,分泌大量的胶原蛋白,并在细胞外生成一级胶原原纤维,再逐级融合形成二级和三级胶原原纤维,最终多数腱细胞胶原化而消失。

ROS对小鼠腹腔巨噬细胞凋亡的影响

目的探讨 ROS影响巨噬细胞凋亡的机制。方法激光扫描共聚焦显微术、流式细胞术和荧光标记技术等。结果 1凋亡巨噬细胞内 NADPH氧化酶活性急剧降低使得胞内 ROS水平快速下降 ;2 ROS清除剂促进地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡 ;3PKC促进巨噬细胞凋亡和 ROS急剧减少 ;c AMP抑制巨噬细胞凋亡和 ROS急剧减少。结论 1ROS抑制地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡 ;2 PKC、c AMP等因素通过影响地塞米松介导巨噬细胞凋亡时发生的 ROS变化促进或抑制巨噬细胞凋亡。由此可见 ,ROS作为一种巨噬细胞的信使分子和效应分子 ,一方面抑制巨噬细胞自身凋亡 。

人骨髓间充质干细胞的分化与端粒酶活性

目的 研究人骨瞩间充质干细胞（Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，ＭＳＣｓ）的分化特性及其端粒酶活性。方法 取人胚胎股 骨骨瞩，分离、培养、扩增ＭＳＣｓ，原位杂交法检测ＭＳＣｓ的端粒酶活性。将ＭＳＣｓ种植于裸鼠皮下，４周后观察ＭＳＣｓ的 分化情况。结果人 ＭＳＣｓ呈端粒酶反应阳性。植入裸鼠体内后可分化成骨、软骨、脂肪、骨骼肌、肌腱样组织和无髓神经 纤维束样结构。结论人ＭＳＣｓ是一种具有多向分化能力的干细胞，具有较高的端粒酶活性。

大蒜油诱发瘤灶内中性粒细胞和巨噬细胞的超微结构观察

给腹水型及实体型荷瘤小鼠的瘤灶注射大蒜油后,瘤灶内的中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞数量增多,以中性粒细胞和巨噬细胞的数量最为显著。可观察到多个中性粒细胞或巨噬细胞包围一个肿瘤细胞,并有突起顶入肿瘤细胞的现象。实验结果表明,大蒜油可能具有增强中性粒细胞及巨噬细胞的抗肿瘤作用。

放线菌酮诱导大鼠胸腺细胞凋亡的电镜观察

利用透射电镜详细观察了放线菌酮体内诱导大鼠胸腺细胞凋亡的形态学变化.观察显示,腹腔注射放线菌酮4小时后,大鼠胸腺细胞发生凋亡,凋亡胸腺细胞胞核和胞质发生一系列形态学变化,产生凋亡小体.主要表现为染色质断裂、浓缩、边集,大部分细胞核变成花瓣状,其它细胞核变成半月状、黑洞样和空泡状;粗面内质网大量增殖,并包裹细胞成分形成自噬体;线粒体增多、嵴紊乱并空泡化.凋亡细胞及其形成的凋亡小体被其它细胞吞噬清除.结果表明:放线菌酮体内诱导大鼠胸腺细胞发生自噬性凋亡,凋亡胸腺细胞的细胞器主动参与了凋亡过程.

荧光定量测量方法在共聚焦显微镜上的应用

根据共聚焦显微镜ACAS570测量原理，结合巨噬细胞研究，认定性和定量方面，叙述了通过荧光图像测量细胞胞内游离Ca2＋、胞浆pH、细胞膜电位、线粒体膜电位、细胞膜磷脂和受体流动性、细胞内蛋白的方法，给出了用于定量测量的荧光探针工作曲线的制定方法和不同实验中选择荧光探针所需注意的问题。

白藜芦醇对脊髓损伤后继发性脊髓水肿,乳酸脱氢酶及ATP酶活性的影响

目的 探讨脊髓损伤 (SCI)后使用白藜芦醇 (resvera trol,Res)对继发性脊髓水肿及受损脊髓组织中乳酸脱氢酶(LDH)与Na+ ,K+ ATP酶活性的影响。方法 采用重物下落撞击法制备成年大鼠的脊髓损伤模型 ,于损伤后即刻腹腔注射给予Res 5 0mg·kg-1,10 0mg·kg-1或甲基强的松龙(MPSS) 10 0mg·kg-1,观察给药后 1、2 4、4 8h时Res组受损脊髓组织含水量、LDH及Na+ ,K+ ATP酶活性的变化 ,并与MPSS组进行疗效对比。结果 Res能够明显抑制SCI后继发性水肿 ,以 4 8h为最明显 ,抑制率为 11 5 % ;明显降低LDH活性 ,以 2 4h最大 ,抑制率大于 4 0 % ;明显改善Na+ ,K+ ATP酶活性 ,以 4 8h最显著 ,最大改善率在 6 0 %以上 ,上述作用均与强的松龙相当或更优。结论 Res可以有效抑制脊髓损伤后的水肿及改善能量代谢系统 。

长春新碱诱导的自噬性细胞凋亡对线粒体膜电位的影响

目的:了解长春新碱（VCR）诱导的自噬性细胞凋亡是否与线粒体跨膜电位（△Ψm）改变有关及其可能的机制。材料与方法:以正常人的肝细胞系为体外模型,应用碘化丙啶（PI）/Rhodamine123（Rh123）双重染色检测△Ψm,通过亚G1期细胞和透射电镜鉴定细胞凋亡。结果与结论:VCR可明显诱导线粒体△Ψm下降,也可以诱导L-02细胞自噬性凋亡。线粒体△Ψm下降可能是VCR诱导自噬性细胞凋亡的关键环节。

利用激光扫描共聚焦显微镜检测巨噬细胞呼吸爆发

用过氧化物和超氧化物荧光探针ＤＣＦＨ－ＤＡ标记巨噬细胞后，在激光扫描共聚焦显微镜下，用最适发射波长为５３０ｎｍ的检测器１检测巨噬细胞内ＤＣＦＨ－ＤＡ的荧光强度变化，结果显示：检测器１可检测单个和多个巨噬细胞内ＤＣＦＨ－ＤＡ的荧光强度变化，经ＰＭＡ作用后，巨噬细胞内ＤＣＦＨ－ＤＡ的荧光强度增强，而且各细胞增强的幅度不同。表明：通过检测ＤＣＦＨ－ＤＡ荧光强度变化可原位实时观察单个或多个活细胞内呼吸爆发的动态变化，ＰＭＡ刺激巨噬细胞呼吸爆发作用。

平阳霉素诱导人食管癌细胞EC8712凋亡的研究

】目的 :以平阳霉素诱导食管癌细胞凋亡 ,并探索药物浓度与诱导凋亡之间的关系。材料与方法 :应用电镜、DNA电泳、TUNEL、荧光显微镜、激光共聚焦扫描显微镜等手段 ,观察食管癌细胞在不同浓度平阳霉素作用不同时间后的变化特征及诱导凋亡之作用。结果 :细胞形态学及DNA水平的变化均证实靶细胞发生了凋亡 ,但较大浓度较长时间的平阳霉素作用可致其坏死 ;平阳霉素对EC8712凋亡的诱导效率呈浓度、时间依赖性增强。结论 :一定浓度平阳霉素作用一定的时间可以诱导食管癌细胞株EC8712发生凋亡。诱导癌细胞凋亡可能是平阳霉素化疗作用的重要机制。临床化疗时可根据量效关系合理用药以诱导肿瘤细胞达到最大的凋亡率 ,而又不致其坏死。

小鼠腹腔巨噬细胞凋亡时线粒体的改变及其调控

目的 研究小鼠腹腔巨噬细胞凋亡过程中线粒体和磷酸烟酰胺腺嘌呤 (NADPH)氧化酶活性的变化以及信使分子对线粒体膜电位、细胞内活性氧 (reactive oxygen species,ROS)和凋亡的影响。 方法 激光扫描共聚焦显微术、流式细胞术和荧光标记技术等。 结果 1.地塞米松诱导巨噬细胞快速凋亡 ;2 .线粒体膜电位快速去极化 ,NADPH氧化酶活性剧降 ,ROS快速减少 ,ROS清除剂促进凋亡 ;3.蛋白激酶 C(protein kinase C,PKC)促进凋亡、ROS急剧减少、线粒体膜去极化 ;环腺苷酸 (c AMP)抑制凋亡、ROS急剧减少、线粒体膜去极化 ;环鸟苷酸(c GMP)、酪氨酸蛋白激酶 (TPK)略抑制凋亡 ,不影响 ROS变化 ,但影响线粒体膜去极化。 结论 1.地塞米松处理使线粒体内 NADPH氧化酶活性剧降 ,生成 ROS迅速减少从而促进巨噬细胞凋亡 ;2 .信使分子影响线粒体生成ROS的变化以及线粒体膜去极化从而影响巨噬细胞凋亡。提示线粒体变化 ,尤其是 ROS和膜电位的变化影响巨噬细胞凋亡。

人骨髓间充质干细胞的培养及性质鉴定

目的 分离培养并鉴定人胚胎骨髓间充质干细胞。方法 抽取流产胎儿股骨骨髓，梯度离心，取含有骨髓间充质干细胞的低密度血小板层进行培养；免疫细胞化学法鉴定细胞膜抗原和细胞基质中的蛋白属性；酶细胞化学法测定细胞碱性磷酸酶活性。结果 培养的细胞呈现纺锤形外观；细胞膜抗原 PDGFR、CD29、CD44有阳性表达，IGF-1R、CD34、CD45呈阴性表达，细胞基质中纤维粘连蛋白、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ有表达，而胶原蛋白Ⅱ和层粘蛋白没有表达；碱性磷酸酶检测呈阴性反应。结论 培养的细胞不是骨髓中的造血干细胞或骨髓基质中的成纤维细胞，是处于未分化阶段的骨髓间充质干细胞。

应用组织工程化肌腱修复兔跟腱缺损

目的:由于肌腱来源受限及人工代用品力学性能差等缺点限制了临床肌腱损伤的修复,为此探索组织工程化肌腱修复兔跟腱缺损的可行性,以期为肌腱修复提供实验依据。方法:实验于2000-08/2001-12在第一军医大学中心实验室完成。30只新西兰白兔分为2组:人发角蛋白(HHK)组:用HHK材料修复兔跟腱缺损;组织工程化肌腱组:骨髓间充质干细胞(MSCs)与HHK在模拟微重力条件下形成细胞-材料复合体,修复兔跟腱缺损。采用组织学和免疫组织化学方法观察术后3,6和12周损伤肌腱的修复情况。利用分子生物学手段检测新生肌腱Ⅰ型胶原mRNA表达。结果:扫描电镜下可见MSCs-HHK组织工程化肌腱上有大量梭形的MSCs贴附生长,细胞平行排列,细胞间有突起相连。与HHK组相比,组织工程化肌腱组新生肌腱组织Ⅰ型胶原mRNA呈较高表达,腱细胞增生活跃,胶原纤维更为成熟。结论:在模拟微重力条件下以MSCs为种子细胞,HHK为支架材料构建的组织工程化肌腱能够有效地修复兔跟腱缺损。

大蒜乳剂对小鼠S180腹水癌细胞作用的电镜和电镜细胞化学观察

本文证实大蒜乳剂具有显著抑制肿瘤的作用,荷瘤小鼠的生命延长率和抑瘤率分别为81％和72％。在此基础上,我们利用电镜和电镜细胞化学技术,观察大蒜乳剂对S180腹水癌细胞超微结构及几种酶活性的影响。单次用药后2、6小时,部分肿瘤细胞表面微绒毛肿胀、脱落,核染色质浓缩,胞质内出现大量空泡;48小时后,肿瘤细胞膜表面微绒毛肿胀,脱落现象仍很严重,但细胞核和细胞质的受损程度已经减弱;72小时受损肿瘤细胞恢复正常。连续4次给药后,肿瘤细胞数量明显减少,细胞体积变小,部分肿瘤细胞的损伤程度与单次用药后6小时基本相似。连续4次给药后,肿瘤细胞的碱性磷酸酶(AlPase)、5核苷酸酶(5Nase),葡萄糖6磷酸酶(G6-Pase)活性下降。实验结果证明,大蒜乳剂对小鼠S180腹水癌细胞有明显的细胞杀伤作用。