类鼻疽血清ICA诊断试纸的研制及初步应用

目的 研制免疫层析法类鼻疽血清诊断试纸 (ICA) ,用于检测哺乳动物血清中类鼻疽特异性抗体 ,从而诊断类鼻疽病。方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒 ,并标记上金黄色葡萄球菌蛋白A ;用类鼻疽多糖抗原致敏硝酸纤维素膜 ;最后组装成免疫层析检测条。用该检测条检测了 3份兔血清、16份猪血清、2 6份人血清标本。结论 我们所研制的类鼻疽血清ICA诊断试纸检测不同哺乳动物血清标本的结果与IHA结果与ELISA实验结果一致 ,具有较好的特异性和敏感性 ,并且更简便快速 ,适合基层单位使用。

鹦鹉热衣原体重组主要外膜蛋白免疫肉鸡效果观察

利用鹦鹉热衣原体重组主要外膜蛋白 (MOMP)在大肠杆菌中的表达产物 ,纯化后与白油佐剂乳化成疫苗。对 3批疫苗物理性状、无菌试验、安全试验、最小保护剂量、效力检验、免疫期、保存期和田间试验等各项技术指标进行了测定。重组MOMP疫苗为乳白色油包水型疫苗 ,黏度为 8s·0 4mL-1;细菌培养阴性 ;10d肉鸡分别以5 0和 10 0 μg注射免疫后 ,观察 14d ,免疫鸡群除一过性发蔫外 ,临床采食、饮水 ,注射部位剖检无异常变化 ;以 2 5 ,5 0 ,10 0和 2 0 0 μg分别免疫肉鸡后 ,30d龄攻毒 ,发现 5 0 μg免疫组可以抵抗病原的攻击 ;选择每只 5 0 μg免疫肉鸡 ,分别在 4 0 ,5 0和 6 0d攻毒 ,其保护率分别为 94 % ,95 %和 84 %。疫苗 2～ 8℃可储存 2 4 0d ,室温 ( 2 1～ 2 5℃ )、37℃不要超过 30d ;利用本疫苗免疫肉鸡 4 0 0 0 0只 ,保护率达 93% ,对照组为 85 %。本疫苗安全性高、保护率高、无副作用 ,能有效控制鹦鹉热衣原体的侵害。

鼠疫胶体金法快速诊断试剂盒的研制

目的研制一种敏感、特异、快速并适用于非专业人员的鼠疫胶体金法快速诊断鼠疫FI抗体的试剂盒。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记金黄色葡萄球菌A蛋白作为探针,同时用鼠疫多糖抗原致敏硝酸纤维素膜,共同组装成基于免疫层析原理的胶体金法快速诊断盒。结果间接血凝法检测阳性300份血清标本,胶体金法检测全部为阳性,间接血凝法检测阴性100份血清标本,胶体金法检测全部为阴性,两种方法符合率100%;并且鼠疫胶体金法快速诊断盒不与假结核耶尔森氏菌等相关细菌的免疫血清发生交叉反应。结论鼠疫胶体金法快速诊断盒具有较好的特异性和敏感性,并且具有更简便快速的优点,适合基层单位现场使用。

放射性碘标记CL-3体外肿瘤细胞结合及瘤内注射动物实验研究

为评价瘤内注射(131)~I 标记单抗对提高肿瘤放射免疫治疗效果的作用,用(125)~I 标记抗人结肠癌单抗 CL-3,测定与人结肠癌细胞系 LS174T 及人胃印戒细胞癌细胞系 KATOⅢ的结合率。用34只 LS174T 荷瘤裸鼠,在瘤内注射(131)~I-CL-3后1、3、5、17天进行体内分布与放射免疫显像,以腹腔注射及(131)~I-正常鼠 IgG 瘤内注射组作对照。结果:(131)~I-CL-3与LS174T 及 KATOⅢ细胞结合率达73%;荷瘤裸鼠的瘤/非瘤比值瘤内注射组比腹腔内注射组大2～7倍;每克组织结合注入量的百分数瘤内注射组比腹腔内注射组大2倍多,比(131)~I-IgG 瘤内注射组大5～7倍,且放射免疫显像图清晰。故瘤内注射是提高放射免疫治疗效果的重要途径。单抗标记物在瘤内的存留主要是免疫结合,而不是 IgG 的非特异结合。

骨骼肌转移瘤的罕见性及骨骼肌微血管内皮细胞粘附分子意义的研究

目的 :建立恶性肿瘤细胞经血循环向骨骼肌运行的动物模型 ,观察骨骼肌转移瘤罕见性现象 ,并进一步探讨骨骼肌微血管内皮细胞粘附分子 ( VCAM- 1)的意义。方法 :Wistar大鼠 60只 ,随机分成实验组与对照组。实验组经髂动脉注入 Walker2 5 6癌肉瘤单细胞悬液 ( 10 4) ,对照组经尾静脉注入同一瘤细胞 ( 10 6) ,两组分别于 2h、 1d、 7d、 14 d各处死 6只 ,余下 6只自然死亡 ,观察比较肺内、大腿骨骼肌内肿瘤形成情况及微血管内皮细胞VCAM- 1表达情况。结果 :实验组注入瘤细胞后 ,第 7天在大腿骨骼肌微血管周围见瘤细胞团 ( 3只 ) ,肌组织内无转移灶形成 ,部分鼠见骨骼肌旁软组织内有转移灶形成 ;对照组注入瘤细胞后肺内 7d形成肿瘤灶 ,14 d及自然死亡者 10 0 %形成广泛肺转移灶 (共 17只 ) ,两组比较差异有显著意义 ( P<0 .0 0 1)。实验组大腿骨骼肌微血管内皮VCAM- 1阳性率在注瘤 d7以后显著上升 ,且实验组大腿骨骼肌与对照组肺微血管内皮细胞 VCAM- 1阳性率无显著差异 ( P=0 .5 )。结论 :临床上广泛存在的恶性肿瘤骨骼肌转移罕见性 ,可在动物模型中观察到。骨骼肌微血管内皮细胞 VCAM- 1的表达 。

重组融合蛋白Fab/IFNαA体外抗HBV作用的实验研究

在体外细胞水平上观察重组融合蛋白 (Fab/IFN αA)对乙型肝炎病毒 (HBV)基因表达的抑制作用。方法 :应用HBVDNA转染细胞系 (HepG2 .2 .15细胞 )作模型 ,通过固相放射免疫方法检测Fab/IFN αA作用后细胞上清液的HBsAg、HBeAg水平的变化 ,结合细胞存活率来评价其抗HBV作用 ,并与α 干扰素 (IFN αA)进行比较。结果 :经 12d作用 ,Fab/IFN αA在细胞存活率、对HBsAg、HBeAg抑制率均优于IFN αA ,尤其在 2 5 0 0～5 0 0 0IU/ml浓度下 ,其细胞存活率为 82 .41%～ 83.19% ,HBsAg抑制率 5 5 .5 5 %～ 6 8.18% ,HBeAg抑制率 45 .0 7%～ 48.5 5 % ,而相应浓度IFN αA的HBsAg、HBeAg抑制率均低于Fab/IFN αA (P <0 .0 1或P <0 .0 5 )。结论 :具有抗体的导向作用和IFN的抗病毒作用的Fab/IFN αA体外抗HBV作用优于IFN αA ,为进一步研制抗乙型病毒性肝炎的生物导向治疗的基因工程多肽类药物提供了依据。

免疫胶体金法提取环境标本中细菌DNA技术

将抗DNA单克隆抗体标记在胶体金颗粒上制成免疫胶体金试剂,提取标本中DNA,直接用于PCR检测,从而建立一种简单、快速、高效的免疫胶体金方法提取环境标本中的DNA。结果表明:应用免疫胶体金试剂可有效去除环境标本中PCR抑制剂,浓缩模板,提高PCR检测敏感度3～4个数量级。操作步骤简单,无需使用有机溶剂,避免环境污染,吸附了DNA的免疫胶体金可直接用于PCR扩增。研制了免疫胶体金试剂并确定其最佳反应条件,有效提高PCR技术在检测现场环境标本中的敏感性和实用性。

人抗乙肝表面抗原抗体Fab片段/αA-干扰素融合蛋白原核表达载体的构建

目的：为深入开展乙型肝炎的生物导向治疗，我们构建了人抗乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）抗体Ｆａｂ片段／αＡ－干扰素（ＩＦＮ－αＡ）融合蛋白原核表达载体ｐＨＳ／ＩＦＮ－α。方法：采用ＰＣＲ方法，将ＩＦＮ－αＡＤＮＡ两端引入酶切位点及５端引入－Ｌｉｎｋｅｒ，重组入抗ＨＢｓＡｇ抗体Ｆａｂ表达载体ｐＨＳ相应酶切位点，酶切鉴定并筛选出阳性克隆ｐＨＳ／ＩＦＮ－αＡ，并对插入基因片段测序。结果：重组阳性克隆经酶切鉴定证实重组片段已正确插入载体相应酶位点，片段与ＰＣＲ扩增片段大小相同，硷基序列正确。结论：ｐＨＳ／ＩＦＮ－αＡ的成功构建。

TPN中脂肪乳剂对大鼠血浆和组织脂质过氧化的影响

本实验利用ＴＰＮ大鼠模型观察ＴＰＮ液体中ＬＣＴ，ＭＣＴ／ＬＣＴ，以及不含脂肪乳剂对血浆和组织脂质过氧化的影响。２１０ｇ左右Ｗｉｓｔａｒ大鼠随机分为五组，在ＬＣＴ组、ＭＣＴ／ＬＣＴ组、ＧＳ组ＴＰＮ中提供１２５５ｋＪ·ｋｇ－１／ｄ，非蛋白热能：氮＝１８２∶１，输液速度３３０ｍｌ·ｋｇ－１／ｄ。ＴＰＮ７天停泵８ｈ后，腹主动脉采血，解剖取肝、左肺、左股四头肌，分析血浆和组织中超氧化物岐化酶（ＳＯＤ）和丙二醛（ＭＤＡ）的量。结果表明，ＬＣＴ组由于提供的多不饱和脂肪酸（ＰＵＦＡ）是ＭＣＴ／ＬＣＴ组的２倍，肝脏、肌肉、肺组织和血浆的ＭＤＡ明显高于ＭＣＴ／ＬＣＴ组、Ｓｈａｍ组，而ＬＣＴ组血浆和组织ＳＯＤ的水平比ＭＣＴ／ＬＣＴ组、Ｓｈａｍ组低。本研究提示过量提供ＰＵＦＡ将增加脂质过氧化，ＭＣＴ和ＬＣＴ的物理混合，减少了ＰＵＦＡ供给，降低了脂质过氧化。

鹦鹉热衣原体HSP60基因克隆及其表达产物抗原性的实验研究

目的验证新获得的鹦鹉热衣原体HSP60基因在E.coli中高效表达的产物是否具有足够的抗原活性,为进一步研究其在鹦鹉热衣原体感染检测上的应用奠定基础。方法根据GenBank鹦鹉热衣原体Hsp60基因序列X51404,设计一对特异性引物,扩增了鹦鹉热衣原体HSP60全长基因,克隆入pET32a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,利用IPTG诱导获得高效表达。结果扩增了鹦鹉热衣原体HSP60全长基因,表达产物分子量约为68kD,经Western blotting和胶体金免疫层析技术检测,表明表达产物具有较好的抗原性。结论扩增了鹦鹉热衣原体HSP60全长基因,并对其表达产物的抗原性进行免疫印记分析和免疫层析初步检测,表明具有较好的抗原性,为进一步研究其在鹦鹉热衣原体感染检测上的意义打下了基础。

原发性甲状旁腺功能亢进症的外科治疗

原发性甲状旁腺功能亢进症的外科治疗１００８５３北京解放军总医院郑伟杜晓辉尹茹宋少柏檀华关键词甲状旁腺功能亢进；诊断，内分泌；外科手术，内分泌中国图书资料分类号Ｒ７８１．６３原发性甲状旁腺功能亢进症（简称甲旁亢）在我国比较少见。约有９０％是由甲状旁腺腺...

三苯氧胺对MCF-7人乳腺癌细胞系周期动力学影响

本实验观察了三苯氧胺对雌激素受体阳性MCF-7人乳腺癌细胞系指数生长期影响,同时,应用流式细胞计(Flow Cytometry FCM)分析了三苯氧胺对细胞周期动力学作用。结果表明,三苯氧胺对MCF-7细胞生长具有显著抑制作用。其主要抑制机理为阻止细胞自G^0/G^1期向S期转化。三苯氧胺对MCF-7细胞的这种作用具有时间及剂量的依赖性。

表皮生长因子受体在胃癌中的表达及其意义

表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）是分子量为１７０ｋｕ的跨膜糖蛋白，与细胞的分裂增殖有关。本研究应用放射配基结合分析法，测定了３０例胃癌患者的癌组织及正常胃组织，结果胃癌组织的ＥＧＦＲ含量为（１０．３６±２．２１）ｆｏｍｌ／Ｌ蛋白，明显高于正常胃组织的ＥＧＦＲ含量（４．２２±１．８０）ｆｍｏｌ／ｍｇ蛋白，（Ｐ＜０．０１）。不同胃癌病理类型中，分化差的ＥＧＦＲ高于分化好的，但统计学处理无显著性差异。胃癌组织中的ＥＧＦＲ具有很高的亲和力Ｋｄ＝（２．２５±０．６８）ｎｍｏｌ。我们的结果表明ＥＧＦＲ在胃癌组织中的高表达可能在胃癌的发生、发展中起重要作用，但ＥＧＦＲ能否作为判断胃癌分化好坏及预后的指标尚难定论，有待进一步研究。

恶性疟原虫乳酸脱氢酶基因的克隆表达及表达产物免疫原性的鉴定

目的:克隆表达恶性疟原虫(Plasmodium falciparum,p.f)海南株(FCC1/HN)乳酸脱氢酶(LDH),并对其免疫原性进行鉴定,为制备抗LDH抗体用于胶体金法快速检测疟原虫奠定基础。方法:应用PCR技术对恶性疟原虫乳酸脱氢酶(LDHpf)基因进行特异性扩增,将扩增产物克隆入表达载体pET-32a(+),重组表达载体经鉴定后诱导表达;重组LDHpf(rLDHpf)经纯化后,免疫家兔制备兔抗rLDHpf免疫血清,间接免疫荧光和Western印迹鉴定表达产物的免疫原性。结果:构建了pET-32a/LDHpf重组表达载体,测序后同源性分析显示p.f不同株间LDH氨基酸序列同源性大于98%,不同种间同源性也在90%以上;间接免疫荧光和Western印迹分析显示rLDHpf具有较好的免疫原性。结论:LDHpf基因高度保守;rLDHpf得到高效表达并具有良好的免疫原性。

结核分枝杆菌ESXB-ESXA融合蛋白的表达及其作为检测抗原的初步应用

目的:探索一种大量表达结核分枝杆菌ESXB-ESXA融合蛋白的方法,分析其抗原性,评价其在结核抗体检测中的初步应用。方法:采用PCR方法从结核分枝杆菌基因组中分别扩增esxB和esxA基因,用Linker(G4S)3连接2条目的片段,连接pET-32a(+)载体,构建ESXB-ESXA融合蛋白表达载体;重组表达载体转化宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达、纯化,Western印迹分析重组蛋白的抗原性;建立以融合重组蛋白为抗原的ELISA和胶体金检测方法,分析其在结核病抗体检测中的应用。结果:构建了ESXB-ESXA融合蛋白的表达载体,重组ESXB-ESXA在大肠杆菌中得以高效表达,表达量占菌体总蛋白的70%以上;Western印迹分析表明该重组蛋白具有较好的抗原性;ELISA和胶体金检测结果显示,用重组ESXB-ESXA抗原检测临床结核病患者有较好的特异性。结论:重组ESXB-ESXA融合蛋白表达量高并具有较好的抗原性,可作为结核病抗体检测的备选抗原。

支原体肺炎快速诊断试纸的研制及初步应用

目的研制支原体肺炎免疫胶体金法快速诊断试纸,用于支原体肺炎血清抗体的检测,从而诊断肺炎支原体感染。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并标记金黄色葡萄球菌蛋白A;用支原体肺炎可溶性蛋白抗原致敏硝酸纤维素膜;组装成免疫层析法诊断试纸,用于临床血清标本检测。结果用该试纸检测了88份肺炎血清标本,与两家国外公司、1家国内公司生产的ELISA血清学实验结果一致。结论该试纸具有较好的特异性和敏感性,并且更简便快速,适合基层单位使用等特点。

支原体肺炎快速诊断试纸的研制及初步应用

目的研制支原体肺炎免疫胶体金法快速诊断试纸,用于支原体肺炎血清抗体的检测,以诊断肺炎支原体感染。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,并标记金黄色葡萄球菌蛋白A；用支原体肺炎可溶性蛋白抗原致敏硝酸纤维素膜；组装成免疫色层析法诊断试纸,用于临床血清标本检测。结果用该试纸检测了88份肺炎患者血清标本和80份正常人血清标本,结果与两个国外公司、一个国内公司生产的ELISA血清学实验结果一致。结论该诊断试纸具有较好的特异性和敏感性,简便快速,适合基层单位使用。

呼肠病毒,在SARS患者中分离与初步鉴定

严重急性呼吸综合征(SARS)疫情在北京造成了严重后果,冠状病毒已被广泛认定为导致SARS的病原体。但是临床和实验提示,SARS病因可能不是单一冠状病毒感染。本文报道了我们从北京市第1例SARS患者和其母亲的咽拭子中分离出呼肠病毒。在电子显微镜下,可观察到典型的呼肠病毒。血清学实验显示,38例SARS患者中24例对呼肠病毒呈阳性反应。针对呼肠病毒的基因保守序列(S2基因片段)设计引物,RT-PCR实验扩增出特异性DNA片段。进一步DNA序列分析表明是一种独特的呼肠病毒(呼肠病毒科正呼肠病毒属)。初步动物实验显示,该呼肠病毒可导致非典型样肺炎发生和小鼠死亡,尽管如此,呼肠病毒感染是否与SARS疫情有关,还有待进一步研究才能阐明。