嗜热古菌超高温α-淀粉酶在枯草芽孢杆菌中的分泌表达

本研究将来源于嗜热古菌Pyrococcus furiosus的超高温α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中成功表达,通过信号肽筛选和伴侣蛋白基因共表达提高超高温α-淀粉酶在枯草芽孢杆菌中的分泌表达,并对重组超高温α-淀粉酶的酶学性质进行初步研究。首先构建信号肽筛选文库,结合高通量筛选方法对枯草来源的173种信号肽进行筛选,最终筛选出一种新的信号肽AspB’,引导PFA胞外分泌表达,摇瓶发酵60 h后其酶活达到119.01 U/mL。在此基础上,共表达伴侣蛋白PrsA,使酶活进一步提高,发酵培养60 h后其酶活进一步提高12.72%,达134.15 U/mL。该菌株发酵潜力较好,摇瓶培养310 h后其酶活可达938.35 U/m L。对枯草芽孢杆菌中重组PFA的酶学性质进行测定,最适反应温度为100℃,最适反应pH值为4.5,在100℃条件下处理4 h仍有50%以上的酶活,在pH值4.5~7.0的条件下其稳定性良好。这在淀粉制糖工艺中具有重要的工业价值。