APP/PS1+SCN2B-/-转基因小鼠模型的建立及鉴定

目的建立APP/PS1+SCN2B-/-转基因小鼠,为深入研究SCN2B基因在AD发生发展中的作用提供实验工具。方法将APP/PS1转基因小鼠与SCN2B-/-转基因小鼠合笼,子代同胞兄妹交配,子代的后代中选取APP/PS1高表达和SCN2B阴性的小鼠再同胞兄妹交配,并培育。得到的目的基因的小鼠与WT小鼠对照,进行表型鉴定。运用PCR鉴定子代小鼠尾部组织基因组DNA,用RT-PCR验证Aβ和SCN2B在大脑中的蛋白的表达,通过免疫荧光观察SCN2B在转基因小鼠神经系统中的表达,最后用水迷宫在行为学上对转基因鼠进行鉴定。结果经PCR鉴定成功构建APP/PS1+SCN2B-/-转基因鼠杂交群体,并扩群培育,经免疫染色和RT-PCR分析转基因小鼠的Aβ和SCN2B在大脑中的蛋白的表达,发现Aβ在转基因鼠的海马和皮质中高表达,SCN2B在海马中几乎检测不到,免疫染色也未发现SCN2B在神经系统中的表达。水迷宫结果显示转基因鼠与同月龄野生型(WT)小鼠相比在空间记忆和认知差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建APP/PS1+SCN2B-/-转基因小鼠模型,从基因型、组织学表现到行为学表现均具备了2种品系转基因鼠的特质,为进一步研究SCN2B基因在AD发生发展中的作用提供了动物研究模型。

G6PD表达敲减对人宫颈癌细胞miRNAs表达谱的影响

目的比较G6PD表达敲减后人宫颈癌细胞HPV-C33A与HPV16+Siha以及HPV18+Hela中mi RNAs的表达差异,进一步了解G6PD致瘤的分子机制。方法构建G6PD表达敲减的人宫颈癌细胞株,运用mi RNAs芯片对各细胞株中mi RNAs进行对比分析,q RT-PCR对结果进行验证。结果 (1)成功获得G6PD表达敲减的人宫颈癌细胞株C33A、Siha和Hela;(2)与HPV-C33A相比,G6PD表达干扰后高危型HPV16+/18+人宫颈癌细胞株中出现多种mi RNAs差异表达的情况(P<0.05)。结论 G6PD在高危型HPV+人宫颈癌中的致瘤性与多种mi RNAs的差异表达相关。

miR-1对HR HPV 16^+/18^+宫颈癌细胞周期相关蛋白的调控

目的比较miR-1过表达及表达抑制后人宫颈癌细胞HPV16+Siha以及HPV18+Hela中细胞周期蛋白的表达影响,了解miR-1在HR HPV致瘤过程中的分子机制。方法构建miR-1过表达慢病毒载体及miR-1缺陷表达载体,转染高危型(HR) HPV16+/18+人宫颈癌细胞,运用Western blot方法对各组转染细胞中细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin D2、Cyclin E的表达进行检测。结果 (1)成功获得miR-1过表达及表达抑制的人宫颈癌细胞株Hela和Siha;(2)与空白对照组相比,miR-1过表达及表达抑制后HR HPV16+/18+人宫颈癌细胞株中细胞周期蛋白出现了相应的表达改变。结论 miR-1在HR HPV+人宫颈癌中的致瘤性与其对细胞周期蛋白的表达调控密切相关。

电压门控性钠离子通道2B对阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆功能的作用

目的探讨阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)中,淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)在电压门控性钠离子通道2B(sodium channel-voltage-gated-beta 2B,SCN2B)介导的学习记忆认知功能改善中可能发挥的作用。方法将SCN2B基因敲除小鼠(SCN2B^(-/-))与APP基因敲除小鼠(APP^(-/-))、APP基因杂合子(APP^(+/-))以及APP基因过表达小鼠(APP^(+/+))配对杂交,用PCR基因检测技术对同窝小鼠尾组织进行基因分型,分为SCN2B^(-/-)APP^(-/-)组,SCN2B^(-/-)APP^(+/-)组以及SCN2B^(-/-)APP^(+/+)组,C57BL/6野生型小鼠则为野生型(wild type,WT)组,每组9只。并将6月龄、12月龄、18月龄的SCN2B^(-/-)APP^(-/-)、SCN2B^(-/-)APP^(+/-)、SCN2B^(-/-)APP^(+/+)转基因小鼠和同龄野生型小鼠进行Morris水迷宫与Y迷宫行为学实验来检测每组之间的认知功能;取6、12、18月龄SCN2B^(-/-)APP^(-/-)、SCN2B^(-/-)APP^(+/-)、SCN2B^(-/-)APP^(+/+)的三种转基因小鼠和同龄野生型小鼠进行海马CA1区神经元突起的检测,同时对海马CA1区神经元的基底及远端突起数量进行定量分析。采用SPSS 21.0统计软件进行数据统计和分析。两组之间的差异用独立样本t检验比较分析,多组间比较用单因素方差分析,行为学实验结果使用重复测量方差分析进行统计。结果(1)水迷宫实验数据使用重复测量方差分析,数据显示18月龄小鼠中逃避潜伏期的组别和时间交互效应显著(F时间×组别=3.63,P<0.01)。简单效应分析发现18月龄小鼠中,与SCN2B^(-/-)APP^(+/-)组和SCN2B^(-/-)APP^(-/-)组小鼠比较,SCN2B^(-/-)APP^(+/+)组小鼠第4~6天的逃避潜伏期明显延长[第4天:(47.00±2.00)s,(43.11±1.96)s,(41.89±3.06)s,t=-4.16,1.00,均P<0.05;第5天:(45.22±2.54)s,(36.33±2.78)s,(37.00±2.45)s,t=-7.08,-0.54,均P<0.05;第6天:(38.11±2.03)s,(34.11±2.32)s,(33.00±2.91)s,t=-3.90,0.90,均P<0.05。],目标象限停留时间缩短[(18.00±1.73)s,(25.56±1.33)s,(24.33±1.94)s;t=10.37,1.56,均P<0.05]。(2)Y-迷宫结果显示,与SCN2B^(-/-)APP^(-/-)组和SCN2B^(-/-)APP^(+/-)组小鼠比较,18月龄SCN2B^(-/-)APP^(+/+)组小鼠新颖臂进入次数减少[(50.22±3.68)次,(57.22±3.74)次,(58.44±5.14)次;t=3.40,-0.48,均P<0.05],在新颖臂内停留时间减少[(10.89±0.62)min,(14.33±0.59)min,(13.89±0.74)min;t=8.16,0.44,均P<0.05]、在新颖臂活动距离明显减少[(37.26±2.01)m,(45.67±2.45)m,(46.11±3.27)m;t=7.81,0.91,均P<0.05]。(3)Golgi染色结果显示,与SCN2B^(-/-)APP^(-/-)组和SCN2B^(-/-)APP^(+/-)组小鼠比较,18月龄SCN2B^(-/-)APP^(+/+)组小鼠海马神经元的顶端树突数量[顶端树突数量:(1.78±0.37)个,(3.67±0.81)个,(3.00±1.21)个;t=3.36,1.41,均P<0.05]和基底树突数量[基底树突数量:(1.11±0.50)个,(3.11±0.50)个,(2.56±0.69)个;t=4.06,1.21,均P<0.05]均显著减少。结论SCN2B敲低可以改善老年小鼠的空间学习记忆能力,而过表达APP可以部分抵消SCN2B敲低引起的小鼠认知功能改善,其机制可能是通过影响小鼠海马CA1区神经元基底及远端的突起数量而发挥作用的。