携带人Gfi1基因重组慢病毒载体稳定转染32D细胞株的建立

本研究建立真核细胞表达的Gfi1基因重组慢病毒载体包装系统,并实现Gfi1在32D细胞中长期、稳定的表达,为进一步研究Gfi1基因在恶性血液病中的发生发展建立一个有效的平台。制备完整的重组慢病毒载体三质粒系统:转移质粒(pLOX-Gfi1/pLOX)、包装质粒(pCMVΔR8.2)及包膜蛋白质粒(pMD.G)。用脂质体法将三质粒共转染包装细胞293T,48小时后收集病毒上清,并转染靶细胞32D;用Western-blot法检测293T及32D细胞中Gfi1的整合及表达。结果表明:慢病毒的3种质粒可以高效转染293T细胞,并成功包装出慢病毒。目的基因Gfi1能被重组慢病毒高效导入靶细胞32D,并稳定表达,在荧光显微镜下可直接观察到GFP。Western-blot能检测到Gfi1蛋白在包装细胞293T及32D细胞中的表达。结论:慢病毒介导的Gfi1基因可以高效稳定转染32D细胞并持续表达,证明本研究建立了一种有效的基因转移系统。

人类Gfi1基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立测定人类Gfi1mRNA表达量的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,为进一步研究新基因的功能奠定基础。方法以Gfi1基因为靶基因设计引物。构建携带Gfi1cDNA的质粒plox-Gfi1,经过纯化,质粒浓度测定,拷贝数的计算及10倍的梯度稀释制备标准品。应用ABI stepone PCR仪对Gfi1mRNA进行实时荧光定量PCR检测,建立标准曲线和熔解曲线。结果建立了Gfi1mRNA表达的实时荧光定量PCR方法,本法线性范围为6.36×102～6.36×108copies/μl,线性相关系数γ2为0.996,熔解曲线为单峰,Tm值为(89.98±0.22)℃,标准品的循环阈值批内变异系数和批间变异系数分别为1.35%～3.61%和1.49%～3.42%。结论本研究建立的Gfi1mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法速度快,灵敏度高,特异性强,重复性及稳定性好,可用于Gfi1基因的定量检测。

人Gfi1基因克隆及重组Gfi1慢病毒表达载体的构建

目的克隆人Gfi1基因的全长cDNA,构建用于真核细胞表达的含有Gfi1基因ORF区的重组慢病毒表达载体pLOX-Gfi1,为研究Gfi1基因的功能打下基础。方法应用RT-PCR从人K562细胞系中扩增出Gfi1 cDNA片段,经回收纯化与pGEM-T载体连接并转化感受态菌DH5α,通过蓝白筛选酶切鉴定出阳性菌落,质粒提取,BamHⅠ限制性内切酶酶切获得目的基因,插入慢病毒载体pLOX中并转化感受态细菌DH5α。质粒提取后进行酶切及PCR鉴定,对阳性克隆进行DNA序列分析。结果RT-PCR扩增获得含有约1.2 kb的DNA片段,酶切及PCR鉴定证实pLOX-Gfi1含有大小正确的正向Gfi1 cDNA,DNA序列分析的结果与发表于GenBank上的序列(NM005263)完全一致。结论成功克隆人Gfi1基因并构建用于真核细胞表达的重组慢病毒载体pLOX-Gfi1。

嵌入式Linux下高速USB主控制器的设计与实现

针对现有嵌入式Linux系统下USB读/写速度慢的问题,结合AT91RM9200处理器的开发实例,介绍一种基于Philips公司的USB接口控制芯片ISP1761来实现低成本高速USB主机控制器的硬件设计方法。在此基础上,给出了驱动程序的设计方案及相应驱动的配置、编译、下载使用等过程。测试表明,其速度达到USB 2.0规范的要求,对嵌入式下低成本USB主控制器的硬件设计和驱动开发有一定的参考价值。

电子技术实践环节的教学改革探索

在验证性课程实验、综合设计性课程设计、设计研究性实验选修课的分层次教学目标下,经电路设计、仿真应用、硬件制作等实践教学环节,学生的创新能力和综合运用能力得到明显提高,收到较好成效。

下沉式卫生间漏水原因及预防控制

文章对下沉式卫生间的优点与不足进行了分析,对其漏水原因及防控措施进行了介绍。

基于BP神经网络的应用型本科院校教师业绩考核研究

文章首先分析了国内外应用型本科院校教师业绩考核体系的研究现状,以职称、工资收入、业绩奖金、工作年限、学科背景五个维度来构建适合应用型本科院校教师业绩考核的评价指标体系;利用BP神经网络算法建立高校教师年度业绩考核的数学模型。最后以广东财经大学华商学院教师考核为例,选用trainlm网络训练函数获得了应有的效果。文章结果可以为同类型高校教师业绩考核提供借鉴。

公交车移动支付问题评估模型设计

本文重点分析了某城市公交车乘车人的出行特征,建立了公交车第三方支付平台的商业盈利模型,然后运用ARIMA模型经过一阶差分运算估计了该城市全部公交车实现第三方平台支付后的盈利情况,最后给出增加公司盈利的商业可行性报告。