天山雪莲HPLC指纹图谱研究

目的建立天山雪莲药材的HPLC指纹图谱，为雪莲药材的快速质量控制提供依据。方法以绿原酸、紫丁香苷、芦丁、木犀草素、芹菜素5种对照品为对照，采用HPLC法，测定了10批次不同产地天山雪莲的色谱图，确立参照指纹图谱。色谱条件：色谱柱Diamonsil^TM C18（250mm×4．6mm，5μm），甲醇-水（0．8％醋酸，0．2％三乙胺，pH3．5-4．0）线性梯度洗脱，柱温30℃，检测波长270nm，记录时间30min，体积流量1．0mL／min。结果标示出天山雪莲的13个特征指纹峰。结论该方法准确、重现性好，为天山雪莲的指纹图谱质量控制提供了参考。

天山雪莲RAPD反应条件的优化及再生体系DNA多态性分析

目的:用RAPD法研究天山雪莲再生过程中DNA的变异。方法:优化RAPD反应体系中各影响因素,分别以天山雪莲种子苗、愈伤组织、丛生芽及再生植株的总DNA为模板,进行多态性分析。结果:优化反应体系为:Mg2+2.50mmol·L-1、Taq DNA聚合酶1.00U、引物0.30μmol·L-1、模板DNA 20ng、dNTP0.20mmol·L-1,退火温度为37℃。20条随机引物共扩增出174条带,平均每条引物扩增8.7条带,其中多态性条带18条,多态性位点比率为10.3%。天山雪莲再生体系与种子苗之间相似性系数为0.75～0.80。结论:天山雪莲再生过程中在DNA水平上发生了一定程度的变异。

混合斑中精子细胞分离方法的应用研究进展

性侵犯案件中精阴混合斑的分离一直是法庭科学物证检验中的难点.现依据分离原理的不同,将各种精子细胞分离方法分为非免疫学方法与免疫学方法,同时对各方法的优缺点进行概述,进而总结精子细胞分离方法的研究进展,并对其应用前景作了进一步的分析与展望。

微流控技术在法医DNA快速检验方面的应用

微流控芯片技术因其微型化、自动化、高通量、集成化、快速等优势使得实验室研究产生革命性的变化,并在生物化学、医学等诸多领域得到广泛应用,但目前还没有基于微流控芯片技术的国产全集成自动化DNA分析仪。该文总结微流控技术在DNA提取、PCR扩增、电泳分离等DNA检验流程方面的研究现状与进展,尤其是在法医DNA快速检验方面的研究进展,同时介绍国内外全集成式DNA分析的研究状况。全集成与功能化是目前微流控技术研究的主流方向。未来,以微流控芯片为主导的全自动、便携式、集成化的DNA分析系统,将使得法医DNA检验从实验室走进案件现场甚至日常生活,实现真正的快速即时检验。

番红花球茎的快速高频诱导

以体外培养的脱毒番红花芽为材料,考察了外源激素及活性炭对球茎诱导的作用.外源激素水平对球茎诱导有重要影响,较低的激素浓度下球茎诱导时间较短,较高的激素浓度下诱导出的球茎较大,但诱导时间延长.培养基中添加活性炭后,由于活性炭的吸附作用降低了游离激素水平,显著缩短了球茎诱导时间,后期激素的缓慢释放提高了球茎质量.在优化的1/2MS+5mg/LNAA+5mg/L6-BA+0.5g/LAC培养基中,5周球茎诱导率高达85.7%,球茎均重0.53g,满足移栽要求.

利用Identifiler分型系统推断同胞关系

目的探讨自主开发的同胞关系鉴定自动分析软件（ASI）对Identifiler分型系统进行同胞关系鉴定的可行性。方法应用本课题组所开发的软件ASI,对151对同胞及31 224对人工模拟无关个体进行Identifiler系统的15个常染色体STR基因座分型进行分析,计算亲权指数（PI）、同胞关系概率（WFS）和等位基因匹配情况,所获数据进行统计分析,自动计算排序。结果当WFS大于99.999%时,同胞个体占39.07%,无关个体占0%,两组具有显著差异,可以推断两个体同胞关系。当WFS介于1%~99.999%范围内,同胞个体和无关个体有部分重叠,同胞个体占60.93%,无关个体占21.3%,两者具有一定差异,可以通过增加检测STR基因座,再结合案情加作Y-STR、m tDNA检测,以推断两个体是否具有同胞关系。当WFS小于1%时,同胞个体占0%,无关个体占78.7%,可以推断两个体不具有同胞关系。个体间等位基因匹配结果表明：在检测Identifiler体系15个STR基因座时,当两个体常染色体STR基因座的全相同数目≥5时,或全不同数目≤1时,提示为同胞关系;当两个体全不同数目≥6时,或全相同数目≤1时,提示为无关个体,以此作为预测有无同胞关系的界值。结论Identifiler系统及同胞关系鉴定自动分析软件ASI可用于推断同胞关系。

4种快速PCR检测试剂法医学应用的初步研究

采用快速PCR扩增,探索其法医学应用价值.将AmpFLSTRIdentifiler试剂盒分别与4种不同的快速PCR检测试剂联合构建快速PCR体系,以9947A为模板,采用各自优化的循环参数进行扩增,并将各分型结果与常规方法进行比较,结果表明:联合构建的4种快速PCR体系均可获得与常规方法一致的DNA分型结果,扩增用时最短可减少至22 min.可见应用快速PCR方法进行扩增,可获得与常规方法一致的STR分型,并且显著缩短扩增时间,提高DNA分型速率.

快速STR分型在法医DNA分析中的应用研究进展

STR分型是目前世界通用的DNA指纹分析方法．传统的分型方法包括DNA提取、DNA定量、PCR扩增和对扩增后的STR片段进行检测和分析，耗时较长（8～10h）．一些情况下很难满足案件的实际需求．法医学家们在加快STR分型的方法研究一直不懈努力．现从快速提取DNA、无提取直接PCR、快速PCR、微流控芯片技术在STR快速分型方面的应用四方面，对近年来出现的可进行快速STR分型的新技术、新方法进行综述．

法庭科学DNA STR分型标准物质初探

本文介绍了标准物质及法医DNA标准物质的概念,并就目前法庭科学DNA STR分型技术所需要的标准物质的制备及应用做一概述,以对法医DNA标准物质的生产提供参考。

酵母提取物对水母雪莲悬浮培养合成紫丁香苷的影响

研究了酵母提取物诱导的水母雪莲悬浮培养时紫丁香苷生产和相关次级代谢酶的活性.酵母提取物促进了紫丁香苷的生产,最优的添加方法是在培养15 d时添加1.5%的酵母提取物.最大紫丁香苷产量达671.9 mg/L,是对照实验的3.25倍.诱导子处理后G6DPH、PAL和POD活性显著增加,当处理6 h后酶活性达到最大值.

AmpFlSTR~ Identifiler~ Plus试剂盒快速直接PCR扩增初探

目的探索可应用于法医实践的快速直接PCR扩增方法,以缩短扩增时间,提高STR分型速率。方法联合运用AmpF詛STRR○IdentifilerR○Plus试剂盒与TaKaRa快速PCR检测试剂构建快速直接PCR体系,以FTA血卡为模板,采用优化后的扩增程序在快速PCR仪上进行扩增,分型结果与常规直接扩增方法相比较。结果 AmpF詛STRR○IdentifilerR○Plus试剂盒与TaKaRa的快速PCR检测试剂针对血卡的联合扩增,所得STR分型结果与常规方法一致,扩增用时由常规直接扩增所需的175 min缩短为55 min。结论采用快速直接PCR方法进行扩增,可得到与常规直接扩增一致的DNA分型,扩增时间明显缩短,DNA分型速率大幅提高。

15重快速STR复合扩增体系的构建

目的建立一套15重快速STR复合扩增体系。方法选择14个常染色体基因座以及1个性别基因座,采用Fast Start Taq DNA聚合酶系统,以DNA标准品9947A为模板,通过筛选扩增条件、选择热启动酶用量、调整引物平衡、优化快速扩增程序、筛选反应缓冲液、选择反应体系以及筛选添加剂等一系列复合扩增实验,比较各条件下等位基因丢失和非特异性扩增情况。结果在以1 ng DNA为模板、0.4μL聚合酶及10×Fast Start高保真反应缓冲液构成10μL快速体系的条件下,32 min即可获得标准DNA全部15个STR基因座的完整分型,无等位基因丢失和非特异性扩增现象,等位基因均衡性良好。同时,5%甘油、0.01%明胶、0.05%明胶和5 mmol/L硫酸铵可作为PCR扩增过程中拟加入的反应添加剂。结论本研究建立的15重快速STR复合扩增体系可以明显缩短反应时间,提高样品检测效率。

甘肃省汉族人群18个STR位点的遗传多态性

目的 调查18个短串联重复序列（Short Tandem Repeat,STR）位点在甘肃省汉族人群中的基因频率分布.方法 采用PCR扩增及毛细管电泳技术对272名个体的18个STR基因座进行分析.结果 共检出202种等位基因,基因频率分布在0.002～0.570之间.18个STR基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡（P＞0.05）,杂合度在0.599～0.893之间,个人识别能力在0.771～0.984,多态信息含量在0.534～0.910,非父排除概率在0.290～0.782.结论 本研究结果可为人类群体遗传学及法医学后续研究提供详实可靠的基础数据.

应用DNA Typer15^(TM) Direct试剂盒对河南地区汉族人群14个基因座遗传多态性的调查

目的调查河南地区汉族人群14个STR基因座的遗传多态性。同时简要介绍本实验室建库流程。方法应用DNA Typer15TM Direct试剂盒检测359名河南地区汉族无关个体14个STR基因座的等位基因频率,并应用统计软件计算群体遗传学参数。结果 14个STR基因座的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05),14个基因座的杂合度(H)在0.694～0.922之间,匹配概率(Pm)在0.017～0.131之间,个人识别率(PD)在0.869～0.983之间,多态信息含量(PIC)在0.670～0.910之间,非父排除概率(PE)在0.418～0.841之间。结论 14个STR基因座在河南汉族人群中有较高的多态性,所得的群体遗传学数据可为法医学个人识别和亲子鉴定提供结果评估的依据。应用DNA Typer 15TM Direct试剂盒构建DNA数据库简单经济实用。

广西汉族与苗族人群30个InDels的遗传学调查

目的 采用Investigator？DIPplex试剂盒调查广西汉族、苗族中的群体遗传学数据,并评估其法医学应用价值。方法 对广西汉族、苗族的100名无关个体的30个In Dels位点进行复合扩增,统计分析各位点的频率数据、群体遗传学参数。结果 经Bonferroni校正,30个In Dels位点的分布均符合Hardy-Weinberg平衡;各位点在广西汉族、苗族人群中的累积个体识别率分别为0.999 999 999 98、0.999 999 999 97,累积非父排除率均大于0.96。30个In Dels在广西汉族中6个位点（D111、D118、D99、D114、D64、D39）He〈0.3,苗族中8个位点（D111、D118、D99、D122、D64、D81、D39、D84）He〈0.3。通过Genepop 4.2软件计算Fst值,除D84（0.080 7）外,其余位点均小于0.06。结论 该组30个In Dels位点在广西汉族、苗族人群中具有较高的多态性,可以作为现有STR检验体系的补充。

北京地区汉族人群6个STR基因座的遗传多态性

目的对北京地区汉族人群遗传数据进行调查研究。方法利用PCR自动化检测技术检测中国北京地区汉族人群D1S1656，D10S2325，D11S2368，D12S391，D14S1434及GATA198B05共6个STR基因座的遗传多态性，获得6个STR基因座的群体遗传学数据，评价其法医学应用价值。结果6个STR基因座的个体鉴别力（Discrimination power，DP）在0．9777-0．8769之间，多态性信息含量（Polymorphism information content，PIC）在0．6867-0．8801之间，杂合度（Heterozygosity，H）在0．7219～O．8684之间，非父排除率（Probability of paternity exclusion，PE）在0．4456-0．6793之间，累积个体鉴别力为0．99999997，累积非父排除率为0．995765192。结论6个STR基因座等位基因频率分布均匀，多态性高，适用于法医学亲子鉴定及个人识别，可作为现有基因座的补充。

法医DNA提取纯化试剂盒在Hamilton Microlab~ Starlet DNA自动提取仪上的应用研究

本文利用自主研制的法医DNA提取纯化试剂盒在Hamilton Microlab~ Starlet DNA自动提取仪上提取276份血斑样本DNA,PCR扩增检测到270份样本STR分型,成功率达97.8%。结果表明法医DNA提取纯化试剂盒可与国外进口的DNA自动提取仪相配伍进行血斑样本的批量提取。

微流控PCR芯片研究进展及其在法医DNA检验中的应用

微流控PCR芯片技术是芯片研究领域的热点,具有较高的基础研究价值和市场价值。本文介绍了微流控PCR芯片技术的概况、研究进展及其在法医DNA检验中的应用。