静心止动方治疗小儿抽动障碍靶点的体外研究

目的:网络药理学分析静心止动方(JXZDF)治疗小儿抽动障碍(TD)的作用机制,并进行体外细胞验证。方法:利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和中医药百科全书(ETCM)数据库筛选JXZDF的有效成分,借助SwissTargetPrediction数据库预测成分靶点。通过GeneCards、人类孟德尔遗传数据库(OMIM)、治疗性靶标数据库(TTD)、PharmGkb DisGeNET数据库获取TD疾病靶点。将成分和疾病2个靶点集取交集,即JXZDF治疗TD的潜在靶点。将交集靶点导入STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络;利用Cytoscape软件,构建“中药-活性成分-疾病靶点”网络图,并利用“CytoNCA”插件筛选核心靶点。最后通过基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析获得潜在的信号通路。通过活化的小胶质细胞进行实验验证,将JXZDF作用于活化的小胶质细胞,通过干预目标信号通路关键分子,采用蛋白质印迹法验证JXZDF作用于小胶质细胞的作用靶点。结果:网络药理学发现JXZDF的主要活性成分为槲皮素、豆甾醇、高车前素、β-谷甾醇、山柰酚等,PI3K/AKT信号通路可能是JXZDF治疗TD的关键通路。实验发现JXZDF能够下调活化后的小胶质细胞p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达(P<0.05),而当JXZDF与PI3K激动剂740 Y-P联合应用后,该抑制效应被逆转(P<0.05)。结论:研究阐述了JXZDF治疗TD的潜在分子信号通路,证实了JXZDF能够通过下调PI3K/AKT信号通路干预小胶质细胞的功能,验证了网络药理学结果,为深入研究JXZDF治疗TD提供了依据。