饲料禁抗背景下规模化猪场胞内劳森菌的流行病学调查

为掌握在饲料禁抗和养殖端限抗背景下规模化猪场胞内劳森菌的流行情况,为猪增生性肠炎的精准防控提供依据。该研究运用巢式PCR和间接ELISA方法对饲料禁抗后不同来源的粪便样品和血清样品进行检测。饲料禁抗背景下,对采自不同猪场695份粪样的巢式PCR检测显示,猪群胞内劳森菌的总体感染率为23.88%,保育猪、肥育猪和种猪感染率分别为16.56%、29.58%和24.63%。对饲料禁抗和饲养期间限抗猪群的跟踪调查结果为,保育猪在30、44、58、72日龄的感染率分别是16.67%、20.00%、50.00%和70.00%;后备母猪的感染率44.44%—66.67%。对338份不同猪场送检血清样品的ELISA检测显示,胞内劳森菌的抗体阳性率为42.6%,不同猪场的阳性率10%—75.90%。上述结果表明,现阶段我国规模化猪场胞内劳森菌PCR检测阳性率和ELISA检测的阳性率均处于较高水平。饲料禁抗以及饲养期间限抗的保育猪和后备母猪群跟踪调查的最高感染率分别达70%和66.67%,保育猪随着饲养日龄的增加感染率呈明显地升高趋势。因此,在饲料禁抗背景下,规模化猪场应更加重视猪增生性肠炎的防控。

十二指肠贾第虫谷氨酸脱氢酶原核表达及动力学分析

为探索十二指肠贾第虫(Giardia duodenalis)谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GDH)在滋养体中的分布和酶动力学等生物学特性,对GDH进行了克隆并构建原核表达质粒pET-28a-GDH,然后转化至BL21(DE3)plysS感受态细胞中经IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析,以Ni 2+亲和层析纯化。对纯化的重组GDH进行体外酶动力学分析并免疫小鼠制备多克隆抗体,最后用间接免疫荧光技术对滋养体中的GDH进行定位。结果显示,贾第虫GDH的编码序列长1350 bp,试验成功构建pET-28a-GDH重组表达质粒并诱导表达,重组蛋白约为49.7 ku,且大部分以可溶性形式存在。ELISA和Western blot结果表明,贾第虫GDH具有良好免疫原性,获得的多克隆抗体具有较强特异性。间接免疫荧光定位显示GDH主要位于滋养体的胞质中。酶动力学研究结果显示,GDH最适反应pH约为9.3、最适温度约为42℃,对L-谷氨酸和NADP+的Km值分别为4.485 mmol/L±0.5062 mmol/L和119.5μmol/L±10.1μmol/L。研究结果为深入研究贾第虫GDH的生物学功能奠定了基础。

棘球蚴疫苗及诊断试剂候选抗原研究现状

棘球蚴病是人或动物感染棘球绦虫的中绦期幼虫即棘球蚴所致的慢性寄生虫病,在全世界范围内流行。根据感染寄生虫的种类不同可分为泡型棘球蚴病和囊型棘球蚴病。临床所用药物,如阿苯达唑、吡喹酮、奥苯达唑等治愈率不高,副作用大,且可能出现耐药性等潜在风险,而疫苗具有安全、无残留、动物无休药期等优点。因此,研制有效的棘球蚴病疫苗对畜牧业发展和提高人类生活质量都有重要意义。目前,疫苗抗原的研发成果中已出现了较为成熟的Eg95抗原,以及大量亟待证明的候选抗原如EgA31、EgM、EgTpx、P29及TSP3等。利用这些抗原制成的不同种类的疫苗都起到了不同程度的免疫保护效果。不仅如此,在使用疫苗进行预防的同时,对易感动物进行准确甄别尤其是早期甄别在防控棘球蚴病的过程中也非常重要。目前,诊断试剂的研发也有大量候选抗原如AgB、Ag5以及Eg95-5等可供选择。论文将对疫苗和诊断候选抗原进行汇总、讨论,以期为该病疫苗和诊断试剂的研发提供参考。

产气荚膜梭菌四环素耐药基因双重荧光定量PCR检测方法的建立

旨在开发一种快速、灵敏的针对产气荚膜梭菌四环素类耐药基因tetA(P)和tetB(P)的双重荧光定量PCR检测方法,为快速检测产气荚膜梭菌四环素类抗生素耐药性提供新策略。本研究针对tetA(P)和tetB(P)的保守序列设计引物和探针,构建重组质粒,对退火温度和体系进行优化,同时采用药敏纸片琼脂扩散法测定菌株对四环素类药物的敏感性加以验证。结果发现,优化后的反应程序为95℃30 s;95℃5 s,56℃30 s,共39个循环。使用该反应程序仅能扩增重组质粒,对照菌株无扩增曲线;组内变异系数小于1.3%,组间变异系数小于1.8%,重组质粒最低检测限度为102 copies·μL^(-1)。使用本方法对33份产气荚膜梭菌临床分离株样品进行耐药基因检测,同时进行药敏试验,发现本研究建立的检测方法对四环素耐药基因的检出率均为75.8%(25/33),且与药敏试验结果一致。综上,本研究建立了一种特异、敏感、重复性好的产气荚膜梭菌四环素类耐药基因tetA(P)和tetB(P)的双重荧光定量PCR检测方法。