保卵安坤颗粒HPLC特征图谱的建立及多成分含量测定

目的:建立保卵安坤颗粒高效液相色谱法(HPLC)特征图谱及其葛根素、虎杖苷、淫羊藿苷的含量测定方法。方法:按传统方法制备保卵安坤颗粒样品,以葛根素为参照峰,建立保卵安坤颗粒HPLC特征图谱,采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”(2012版)进行相似度评价,确定共有峰并建立保卵安坤颗粒中3个指标成分的含量测定方法。结果:在特征图谱研究中,共标定10个共有峰,与对照品比较后,指认了6个色谱峰,并对其中的葛根素、虎杖苷、淫羊藿苷进行含量测定,3批保卵安坤颗粒与其对照图谱相似度均大于0.99。葛根素、虎杖苷、淫羊藿苷质量浓度在一定范围内与峰面积呈良好线性关系,平均加样回收率分别为99.58%、102.34%、101.82%,RSD分别为1.94%、2.33%、2.00%,3批样品中葛根素、虎杖苷、淫羊藿苷的质量分数分别为13.48~13.50、1.03~1.08、2.14~2.23 mg·g^(-1)。结论:建立方法简便、准确、重复性好,可为保卵安坤颗粒质量评价提供参考。

中药靶向递药入脑策略的研究进展

血脑屏障是中枢神经系统的一层特殊屏障,调节中枢神经系统稳态,允许正常的神经元功能,保护中枢神经系统免遭毒素、病原体和炎症的侵害。然而,脑毛细血管内皮细胞紧密连接的特性在保护的同时也极大程度限制了药物分子向内的递送效果。近年来,纳米制剂在中药靶向递药领域被广泛应用,较大的系统结构受制于血脑屏障导致疗效并不理想。基于血脑屏障上各种内源性受体及转运蛋白的发现,以及血脑屏障表面荷负电的生理特征,构建安全高效的靶向递药系统,从而设计受体介导、载体介导及吸附介导的转运途径实现血脑屏障的跨越,使药物制剂富集于脑部病变组织,有效提高疾病的治疗效果。受芳香中药“通关开窍”的传统功效启发,阐述其调节血脑屏障通透性的机制,并将这一功效与新兴纳米制剂结合,发挥中药特色进而实现制剂透过血脑屏障入脑释药。

中药酒制法的研究现状及展望

酒制是中药炮制工艺的常用方法之一,目前关于中药酒制的研究较多,但如何阐明中药酒制的炮制机制并制定相应的工艺标准和质量标准仍是亟须解决的关键问题。回顾中药酒制近10年来的相关研究,介绍"酒制升提"理论的学术探讨,归纳酒制工艺和酒制中药类饮片的质量标准研究。在分析从物质基础和作用机制研究中药酒制炮制机制的同时,强调了研究过程中存在的实验操作不规范、缺乏中医药研究思维等关键问题,并提出肠道微生物群及其代谢物应与其相表里脏腑进行关联研究的解决思路,以期推动中药酒制的现代化研究。

不同炮制方法盐泽泻饮片的等级评价

目的:建立盐泽泻饮片的等级评价方法。方法:分别按照《中华人民共和国药典》2020年版和《江西省中药饮片炮制规范》2008年版制备盐泽泻和樟帮特色盐泽泻饮片各15批,在前期研究基础上,采用质量常数评价方法对两者进行等级评价,评价指标涉及饮片大小、饮片厚度和指标成分含量3个方面。结果:15批盐泽泻饮片的质量常数为1.50~3.62;一等盐泽泻质量常数≥2.90,二等盐泽泻质量常数≥1.81且<2.90,三等泽泻质量常数<1.81;15批樟帮特色盐泽泻饮片的质量常数为1.61~3.61,一等特色盐泽泻饮片质量常数≥2.89,二等特色盐泽泻饮片质量常数≥1.81且<2.89,三等特色盐泽泻饮片质量常数<1.81。结论:建立的评价方法具有一定的可行性,可为盐泽泻饮片的市场流通提供参考。

微乳对泽泻汤提取液不同相态中指标成分含量的影响

目的:基于高效液相色谱法(HPLC)及相态拆分工艺探讨微乳对泽泻汤提取液不同相态中指标成分分布的影响。方法:采用粒径仪和透射电镜对空白微乳、泽泻汤水提液和泽泻汤微乳提取液中胶体粒子进行表征;采用高速离心法及透析法建立相态拆分工艺,并依据该工艺,将泽泻汤水提液和泽泻汤微乳提取液分别拆分为真溶液相态,胶体相态和沉淀相态;采用HPLC测定不同相态中白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅱ、23-乙酰泽泻醇C、泽泻醇A、泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B共6种指标成分的含量,流动相水(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0~5 min,40%~43%B;5~20 min,43%~45%B;20~45 min,45%~60%B;45~75 min,60%~80%B);采用饱和溶解度方法测定泽泻汤指标成分在水和微乳溶剂中的溶解度。结果:泽泻汤水提液、微乳提取液和空白微乳中的胶体粒子形态均呈圆球形,胶体粒子的粒径、多分散指数(PDI)和Zeta电位大小排序均为水提液>微乳提取液>空白微乳。相态拆分结果显示,透析2.5 h即可将胶体相态和真溶液相态拆分完全,经检验该工艺稳定可行。与泽泻汤水提液比较,以微乳作为提取溶剂可以提高白术内酯Ⅲ、23-乙酰泽泻醇C、白术内酯Ⅱ、泽泻醇A、泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B在胶体相态内的含量约3.75、6.82、35.47、10.66、35.41、27.75倍,并可提高后5种成分的提取效率2.03、1.15、1.70、6.43、5.53倍。溶解度试验显示,微乳能提高白术内酯Ⅱ、泽泻醇A、泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B的溶解度,但对白术内酯Ⅲ和23-乙酰泽泻醇C的溶解度影响较小。结论:微乳可不同程度提高泽泻汤指标成分的提取效率并增加指标成分在胶体相态中的分布,为微乳作为中药提取溶剂的可行性提供参考。

基于UPLC-Q-TOF-MS的泽泻盐制前后血清药物化学比较分析

目的:基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF-MS)对泽泻、盐泽泻水提液灌胃给药后大鼠血清中的移行成分进行比较分析。方法:SD大鼠随机分为空白组、泽泻组(10 g·kg^(-1))和盐泽泻组(10 g·kg^(-1)),每组3只,给药组分别灌胃给予泽泻、盐泽泻水提液,空白组灌胃等体积饮用水,早晚各1次,连续3 d,末次给药60 min后,眼眶采血,制备血清样品。采用ACQUITY UPLC BEH C1(82.1 mm×50 mm,1.7μm)色谱柱,流动相乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B),梯度洗脱(0~10 min,10%~50%A;10~27 min,50%~95%A;27~27.1 min,95%~10%A;27.1~30 min,10%A),流速0.3 mL·min^(-1),正离子模式下采集数据,扫描范围m/z 100~1200。在自建泽泻化学成分库的基础上借助UNIFI 1.9.2软件对泽泻、盐泽泻水提液及给药血清、空白血清的总离子流图和二级质谱碎片信息进行比对,推导泽泻、盐泽泻可能的入血移行成分及其裂解规律,并计算各化学成分炮制前后的响应强度比。结果:在给予泽泻水提液大鼠血清中分析推测得到20个成分,包括5个原型成分和15个代谢产物;在给予盐泽泻水提液大鼠血清中分析推测得到14个成分,包括5个原型成分和9个代谢成分;其中两者共有成分13个,包括5个原型成分和8个代谢成分。5个原型成分分别为16-氧代泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇A、泽泻醇B、泽泻醇C,代谢产物主要涉及Ⅰ相代谢(氧化反应)和Ⅱ相代谢(葡萄糖醛酸化反应);盐泽泻组大鼠血清中原型成分16-氧代泽泻醇A、泽泻醇B、泽泻醇C的响应强度升高,而代谢成分种类及响应强度则普遍降低。结论:泽泻盐制后可能通过减缓萜类成分代谢速率从而促进原型成分吸收入血,可为泽泻、盐泽泻的药效物质基础研究提供了数据支撑。

微乳提取液中聚氧乙烯(35)蓖麻油GC定量分析方法的建立

随着微乳作为中药提取溶剂的不断探索,聚氧乙烯(35)蓖麻油(polyoxyethylene 35 castor oil,CrEL)作为常用的表面活性剂正在被相关科研工作者使用,然而微乳提取液中该表面活性剂残留的检测问题,极大地限制了微乳溶剂的进一步开发。该文依据CrEL中成分的化学结构和2020年版《中国药典》四部蓖麻油的含量测定方法,采用气相色谱法(gas chromatography,GC)和单因素试验优选CrEL生成蓖麻油酸甲酯的制备方法,验证分析两者的换算系数,并以最优的制样方法处理3批泽泻汤微乳提取液,测定其生成的蓖麻油酸甲酯含量,按照上述换算系数计算泽泻汤微乳提取液中CrEL的含量。结果显示,CrEL的最优制备方法为1 mol·L^(-1) KOH-甲醇溶液10 mL,60℃水浴加热回流时间15 min,三氟化硼乙醚-甲醇(1∶3)溶液10 mL,60℃水浴加热回流时间15 min,正己烷萃取2次,CrEL能稳定生成20.84%蓖麻油酸甲酯,按照该换算系数3批泽泻汤微乳提取液中CrEL质量浓度均值为11.94 mg·mL^(-1),与微乳液配制时CrEL质量浓度11.57 mg·mL^(-1)无显著性差异,表明该研究建立的含量测定方法准确度高,灵敏度和重复性良好,可用于泽泻汤微乳提取液的后续研究并为其他含有CrEL的药物制剂的质量控制提供参考。

基于AHP-CRITIC优选苁蓉舒痉颗粒的提取工艺

通过比较层次分析法(AHP)、基于指标相关性的权重确定方法(CRITIC)、AHP-CRITIC混合加权法确定指标权重系数,并对正交试验各组指标成分(松果菊苷、丹酚酸B、芍药苷、出膏率)进行综合评分比较,优选苁蓉舒痉颗粒的提取工艺。结果显示AHP-CRITIC混合加权法科学优选出最佳提取工艺为加复方饮片6倍量水、提取2次、每次1 h,3次重复性验证试验指标成分松果菊苷、丹酚酸B、芍药苷的平均质量分数分别为0.72、9.34、5.92 mg·g^(-1),平均出膏率为47.18%。AHP-CRITIC混合加权法结合正交试验确定苁蓉舒痉颗粒的提取工艺稳定可行,可用于产业化生产。

超高效合相色谱法检测短链脂肪酸的研究展望

短链脂肪酸(Short-chain fatty acids,SCFAs)的检测多以气相色谱法(gas chromatography,GC)为主,但随着研究的深入,GC在食品、化工和临床应用中所表现出的弊端也越发突出。通过对现有的研究结果进行分析,发现超高效合相色谱法(ultra performance convergence chromatography,UPC^2)适用于对脂质的高效分析。UPC^2是近五年发展起来的新型色谱分离技术,而SCFAs的水平与人体多种代谢性疾病的研究相关联,因此将UPC^2运用于SCFAs的检测将有助于国内外学者对其展开更为深入的研究,也有助于指导多种代谢性疾病的治疗。本文回顾了SCFAs近十年来的相关研究,分析了GC和液相色谱(liquid chromatography,LC)在SCFAs检测中存在的不足之处,介绍了UPC^2的发展历程、基本特性和国内外研究现状,总结了其应用于SCFAs检测分析的可行性和创新性。归纳了UPC^2应用于粪便、血清中SCFAs检测的样品预处理方法,指出了样品预处理过程中应注意的问题,同时对UPC^2检测SCFAs进行方法学的研究展望。着重探讨了提取溶剂、流动相、辅助溶剂对色谱行为的影响以及UPC^2色谱柱的理化性质、类型和选择。简述了碱性改性剂、酸性改性剂、盐类改性剂的选择,以期为SCFAs的研究提供高效、简便、环保、经济的检测技术,为临床大规模样品的快速检测提供更具优势的参考方案。

泽泻汤的研究现状

泽泻汤出自《金匮要略》,该方由泽泻和白术2味中药配伍而成,具有利水除饮、健脾制水的功效。相较于西药治疗有关病证,泽泻汤不仅可以提高疗效,还能降低不良反应的发生,实现长期稳定给药。笔者通过整理泽泻汤的近些年研究情况,对其化学成分、药理作用及临床应用等方面进行整理与分析,发现泽泻汤中的主要活性成分为泽泻醇A和B,23-乙酰泽泻醇B和C,白术内酯(白术内酯Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ)和多糖等,具有利尿、降血脂、降血压、抗炎等药理作用,可加味配伍用于高血压病、高血脂症、眩晕病、脑血管供血不足等疾病的治疗,且疗效明显。通过对近些年泽泻汤的研究概况进行总结,可进一步明确其活性成分和药理作用机制,为泽泻汤的临床应用提供依据,并为下一步的研究指引方向。

泽泻及其炮制品对肾阴虚水肿模型大鼠的作用机制

目的:通过研究泽泻及其炮制品对肾阴虚水肿模型大鼠的药效作用,探讨泽泻及其炮制品改善肾阴虚水肿的作用机制。方法:将42只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药六味地黄丸组、泽泻低、高剂量组,盐泽泻低、高剂量组,每组6只。除正常组外,其余各组大鼠均通过尾静脉注射阿霉素和灌胃甲状腺素复制肾阴虚水肿模型,正常组和模型组给予等体积蒸馏水,阳性药组给予六味地黄丸(1.4 g·kg^(-1)),药物治疗组分别给予泽泻低、高剂量(1、4 g·kg^(-1)),盐泽泻低、高剂量(1、4 g·kg^(-1)),连续给药4周。末次给药后取大鼠肾脏,通过苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠肾脏组织病理变化,放射免疫法检测血清中三碘甲状腺原氨酸(T_(3))、甲状腺素(T_(4))、促卵泡生成激素(FSH)、睾酮(T)的含量,全自动生化分析仪测定血清中肌酐(CREA)、尿素(UREA)、胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)的含量;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中促性腺激素释放激素(GnRH),血浆中环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)的含量,分别用免疫组织化学法和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肾脏中水通道蛋白(AQP)-1、AQP-2的表达和mRNA的转录水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠体质量、尿量显著降低(P<0.01),饮水量明显增加(P<0.05),肾脏有大量炎症细胞浸润及纤维组织增生;T_(3)、T_(4)、cAMP/cGMP、CREA、FSH、AQP-1、AQP-2表达及转录水平显著上升(P<0.01),CHOL、TG含量明显升高(P<0.05),GnRH和T的含量显著降低(P<0.01)。与模型组比较,泽泻和盐泽泻低、高剂量组体质量均有所增加,其中泽泻低剂量组和盐泽泻低剂量组显著增加(P<0.01),各组大鼠尿量均有所增加,但差异无统计学意义,肾脏组织炎症细胞浸润减少;明显降低T_(4)、cAMP/cGMP、UREA、CREA、FSH、CHOL、TG的含量(P<0.05,P<0.01),升高GnRH的水平(P<0.01),其中泽泻高剂量组和盐泽泻低、高剂量组大鼠肾脏AQP-1、AQP-2 mRNA的转录水平显著下降(P<0.01)。结论:泽泻及其炮制品对肾阴虚水肿模型大鼠均有改善作用,其机制可能与下调AQP-1、AQP-2表达和纠正下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴紊乱有关。

栀子总环烯醚萜和总西红花苷的提取纯化工艺考察

目的:优化可用于工业化生产的栀子提取纯化工艺,得到总环烯醚萜和总西红花苷提取物。方法:采用正交试验,以京尼平苷、京尼平龙胆双糖苷、羟异栀子苷、西红花苷-1和西红花苷-2含量为评价指标,考察煎煮时间、煎煮次数和加水量,优选栀子水提取工艺;采用单因素试验优选栀子水提物的纯化工艺,筛选4种不同类型的大孔吸附树脂,主要考察树脂型号、最大上样量、水洗用量、乙醇体积分数、洗脱剂用量、上样流速等工艺条件;此外,对提取物的干燥方式(真空干燥和喷雾干燥)进行考察,并进行中试放大验证试验。结果:栀子的最佳水提取工艺为分别加15、10倍量水煎煮2次,每次1 h;最佳纯化工艺为水提取液滤过后通过SP825L型大孔树脂柱,生药量-树脂量(1∶1.5),药液上样流速3 BV·h^(-1),加水2 BV除杂,加30%乙醇4 BV洗脱得环烯醚萜部位,继续加70%乙醇3 BV洗脱得西红花苷部位,收集醇洗液,70℃减压干燥。在该条件下,总环烯醚萜提取量590.75 mg·g^(-1),转移率70.48%,干膏得率8.89%;总西红花苷提取量83.37 mg·g^(-1),转移率22.20%,干膏得率2.60%。结论:优选的提取纯化工艺稳定可行,有效成分提取率高,适合栀子有效部位的工业化提取纯化。

穿透血脑屏障靶向给药纳米载体的研究进展

纳米制剂具有体积小、载药适中、可靶向等诸多特性,是药物、基因或蛋白质等跨越细胞或血脑屏障(BBB)的良好传递工具。目前,利用纳米给药系统促进药物透过BBB被认为是预防、诊断和治疗中枢神经系统(CNS)疾病的一种战略途径。然而,随着研究的不断深入,纳米载体的不良反应和毒性也逐渐受到研究者们的重视。基于此,笔者拟从纳米载体的种类及性质分类角度,总结了近年来国内外穿透BBB的靶向纳米制剂的研究情况,分析每种载体的优点和缺点。结果发现以中药有效成分为载体的纳米制剂是一种非常有前景的癌症治疗方式,但中药成分复杂多样,这在一定程度上限制了其应用,后续应加强相关方面的研究,为中药纳米制剂在CNS疾病领域的应用与开发奠定基础。

载紫杉醇的叶酸靶向PTX@FA-PLGA-NMs纳米胶束的制备及其体外抗宫颈癌HeLa细胞作用的研究

采用乳化溶剂挥发法制备载紫杉醇的叶酸靶向纳米胶束PTX@FA-PLGA-NMs,以纳米胶束的粒径及PDI为评价指标,优选载紫杉醇纳米胶束的工艺参数,采用透射电镜观察纳米胶束的形态,并系统考察纳米胶束的稳定性、载药量和包封率等,体外细胞实验研究纳米胶束的细胞毒作用,细胞凋亡及细胞摄取等。结果以最佳工艺制备的纳米胶束粒径为(125.3±1.2)nm,多分散系数PDI为0.086±0.026,Zeta电位为(-20.0±3.8)mV,载药量为7.2%±0.75%,包封率为50.7%±1.0%,纳米胶束在透射电镜下为规则的球形,空白纳米胶束FA-PLGA-NMs对细胞的增殖与生长几乎没有抑制作用,而载药纳米胶束与游离PTX对肿瘤细胞的增殖与生长有明显的抑制作用,且PTX@FA-PLGA-NMs的半数抑制浓度IC50为0.56μg·mL^(-1),PTX的半数抑制浓度IC50为0.66μg·mL^(-1)。细胞划痕实验显示,载紫杉醇的纳米胶束具有良好的抑制细胞迁移的能力。PTX@FA-PLGA-NMs纳米胶束具有很好的促宫颈癌HeLa细胞凋亡作用,并且能够明显促进HeLa细胞的摄取。体外实验结果均表明PTX@FA-PLGA-NMs能够实现对宫颈癌HeLa细胞的靶向及治疗的目的。因此,具有抗癌作用的PTX@FA-PLGA-NMs作为纳米药物载体是一种有潜力的提高肿瘤治疗效果的纳米系统。