树舌灵芝菌丝体发酵工艺条件试验

树舌灵芝是灵芝属真菌中的一种,是我国中医药宝库中的珍贵药用菌。为寻求高产的生长条件和经济的培养基,进行了转速、温度、pH值、装瓶体积、接种量、碳源、氮源、C/N等单因素试验和多因素试验设计,利用菌丝体液体培养探索这些条件对菌丝体产量的影响。结果表明,菌丝生长的最适转速为150r/min,最适温度为25～30℃,最适pH值为5.5～6.5,最适装瓶体积为125ml,最适接种量为5ml/100ml;最适碳源为葡萄糖,最适氮源为米糠,最适C/N为25:1。液体培养的最佳营养条件为:3%的葡萄糖,0.072%的KNO3,0.02%的NaH2PO4,pH为8.5。通过生长曲线实验得出logistic方程:Y=0.616/(1+17.732e-8.874x),菌丝体干重达到500～700mg/100ml。

pVAX-iNOS真核表达载体的构建及其抗肺癌作用研究

背景与目的 iNOS与NO介导的抗肿瘤效应有关。本研究旨在构建pVAX-iNOS载体并转染A549肺癌细胞,检测其基因的表达并初步探讨iNOS基因表达增高后对A549肺癌细胞的抗肿瘤作用。方法应用RT-PCR方法扩增人iNOS编码序列的CDS片段,构建pVAX-iNOS载体后转染肺癌A549细胞,通过RT-PCR和Western blot方法检测目的基因的表达;采用M法、Hoechst 3235染色和划痕实验分别检测iNOS高表达在体外对肺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移作用的影响。结果真核表达质粒载体pVAX-iNOS构建成功,iNOS蛋白在转染后的A549细胞中表达升高。pVAX-iNOS转染A549肺癌细胞后能明显诱导细胞发生凋亡并抑制肿瘤细胞的生长和迁移。结论本研究成功构建pVAX-iNOS真核表达质粒,高表达iNOS能明显抑制A549细胞的增殖、迁移并促进细胞发生凋亡。本研究有望为临床治疗肺癌提供一个新的有效策略。

新课程理念下的新课堂整合

本文旨在阐述小学语文课堂教学的结尾艺术，为从事小学语文教学的同行们，交流课堂教学的结尾艺术。即：（1）教师合作与学科之同的交流-（2）以学生为主体，发挥学生的特长t（3）自主探究，合作交流的学习；（4）超越教材，拓展教学内容，（5）教师要尊重学生，创建民主，平等的学习氛围。

FUS1/hIL-12双基因阳离子脂质体复合物特性研究

研究FUS1/hIL-12双基因阳离子脂质体复合物的生物学和药剂学特性,评估其作为肺癌基因治疗药物的转染效率、稳定性以及毒性。阳离子脂质体与质粒以不同质量比配制后用凝胶阻滞实验和激光粒度仪测定粒径和zeta电位确定阳离子脂质体与质粒DNA的最佳配比;通过分别转染增强型绿色荧光蛋白质粒EGFP和PVITO2-hIL12/FUS1双基因质粒入A549肺癌细胞,倒置荧光显微镜、细胞爬片免疫组化和酶联免疫法分别检测EGFP、FUS1和hIL-12在肺癌细胞中的表达;以琼脂糖凝胶电泳检测双基因脂质体复合物与血清和DNaseⅠ孵育的稳定性;通过双基因脂质体复合物与红细胞孵育后显微镜观察其对红细胞形态的影响。研究结果为将来FUS1/hIL-12双基因阳离子脂质体复合物用于肺癌的基因治疗奠定了基础。