湖南省首例人感染H3N8亚型禽流感病例的病毒分离及分子进化分析

目的本研究从流感样病例样本中分离出湖南省首例人感染H3N8亚型AIV毒株,并对该毒株进行了分子进化分析,为人感染H3N8亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的防控提供实验室依据。方法通过实时荧光RT-PCR方法检测甲型流感病毒核酸、接种MDCK细胞进行病毒培养并通过血凝试验进行初步鉴定,继而对分离到的AIV进行高通量二代基因测序,并将测序结果进行相似性比较、基因特征和进化分析。结果鉴定出人感染H3N8亚型AIV分离株(A/Changsha/1000/2022(H3N8),相似性分析显示HA和NA基因序列与来自河南省的人感染AIV株A/Henan/4-10CNIC/2022(H3N8)相似性最高,6个内部基因(MP、NS、PB1、PB2、NP、PA)均来源于H9N2亚型AIV。HA蛋白裂解位点为PEKQTR/GLF,未出现连续重复碱性氨基酸,符合低致病性AIV的特征,NA基因出现了耐药位点I312V突变,可能对奥司他韦有耐药性改变。PB2基因出现E627V宿主适应性突变,M2蛋白出现S31N金刚烷胺耐药性位点突变。分子进化显示HA基因属于欧亚分支,NA基因属于北美分支,NS、PB2、MP和PB1基因与湖南省内来源的H9N2毒株亲缘关系密切。结论此次新发现的人源A/Changsha/1000/2022(H3N8)毒株所有基因片段均来源于禽类,属于新型重组低致病性AIV,有可能突破物种屏障发生禽到人之间的传播,建议完善流感/AIV监测网络系统,增加对H3亚型AIV的监测。

2018—2021年长沙市诺如病毒暴发疫情流行特征分析

目的了解2018年1月至2021年3月长沙市诺如病毒(Norovirus,NoV)暴发疫情的流行病学和进化特征。方法采集2018年1月至2021年3月急性胃肠炎暴发疫情临床病例标本463份,采用实时荧光RT-PCR法进行诺如病毒GI和GII基因群的鉴定;对阳性标本采用特异引物RT-PCR扩增,所得扩增产物测序后进行进化分析。结果2018年1月至2021年3月共报告诺如病毒疫情64起,采集标本463份,NoV检出阳性率为57.67%,男性检出率为60.16%,女性检出率为54.71%;12~18岁年龄组检出率最高,达74.24%。每年冬春季(10月至次年3月)为流行高峰季节;有64.06%(41/64)的疫情发生在托幼机构。64起暴发疫情中由GII基因群NoV引起的占82.81%(53/64),由GI基因群NoV引起的占7.81%(5/64),混合基因型占9.38%(6/64)。GI基因群NoV的具体基因型别有GI.2[P2]、GI.3[P13]、GI.5[P4]、GI.6[P11];测序分型成功的GII基因群NoV具体基因型别有GII.1[P16]、GII.2[P16]、GII.3[P12]、GII.4[P31]、GII.6[P7]、GII.17[P17],以GII.2[P16]型为主。分子进化分析显示GII各型和GI.5[P4]型与同时期北京、上海等地的高度同源;其它GI基因群则主要与国外同时期流行株同源性最高。结论基于长沙市诺如病毒疫情的流行病学特征,应在高发季节对重点场所及重点人群加强监测和健康宣传,及时处置。

长沙市疾控系统离退休人员血糖、血脂异常调查及其相关性分析

目的了解疾控系统离退休人员血糖、血脂水平,分析高血糖与高血脂的相关性。方法利用生化分析仪对416名50岁以上离退休人员进行血糖、血脂检测。结果血脂异常率73.08%,高脂血症罹患率66.35%,血糖升高率24.04%,85.00%血糖升高患者伴有高脂血症。结论本组人群血脂、血糖异常率较高,女性高脂血症罹患率明显高于男性。高脂血症作为糖尿病的病理基础又是易患因素,应引起高度重视。

3株人源猪链球菌2型湖南株cps2J、gdh、ef基因进化分析

目的对3株人源猪链球菌2型(S.suis 2)湖南株(HNCS201001、HNCS201101、HNCS201102)cps2J、gdh、ef基因进行序列测定和进化分析,了解其变异和进化状况,为人感染S.suis疫情的防控提供数据。方法设计S.suis 2 cps2J、gdh、ef基因PCR引物,对HNCS201001、HNCS201101、HNCS201102株进行PCR扩增和序列测定,测序结果利用Lasergene和Mega5软件进行分析。结果 cps2J、gdh、ef基因包含的完整开放阅读框(ORF)分别为999bp、1 347bp、2 532bp,分别编码333、448、843个氨基酸。在线BLAST同源性分析表明,HNCS201001、HNCS201101、HNCS201102株属于S.suis 2,3菌株cps2J、gdh、ef基因组序列之间的核苷酸同源性均为100%;进化树显示,HNCS201001、HNCS201101、HNCS201102株与国内外猪源和人源S.suis 2菌株属于同一分支,同源性比较显示3株S.suis 2湖南分离株cps2J、gdh、ef基因与其他国内外S.suis株核苷酸序列同源性分别为99.8%～100%、96.4%～100%和99.7%～100%,氨基酸同源性分别为98.5%～100%、98.7%～100%和99.5%～100%。结论 3株人源S.suis 2湖南株cps2J、gdh、ef基因序列与国内外S.suis 2菌株相应基因序列同源性高,变异程度小。

1996～2005年人用狂犬疫苗免疫效果分析

目的观察人用狂犬疫苗的免疫效果。方法采用ELISA方法对1996～2005年被动物(以狗、猫为主)咬(抓)伤且全程足量注射狂犬疫苗免疫者3086例(男1659例,女1427例)进行抗体检测与分析。结果平均抗体阳转率为83.70%,1996～2005年免疫成功率分别为64.77%～92.06%。各年龄段抗体阳转率为68.57%～92.06%,男、女性抗体阳转率分别82.58%(1370/1659)、85.00%(1213/1427)。结论近10年来人用狂犬疫苗免疫平均阳转率为83.70%。1996～2005年抗体阳转率随年份推近逐年提高,尤其2002年采用Vero细胞狂犬病纯化疫苗代替精制狂犬疫苗进行免疫,抗体阳转率有了大幅度提高。低年龄组人群对狂犬疫苗刺激较高年龄组敏感,因此推荐50岁以上的中、老年人使用疫苗剂量在第1、2针次时加倍,并采用多点注射法以提高免疫成功率。

金黄色葡萄球菌食物中毒病原检测及方法比较

目的:可疑金黄色葡萄球菌食物中毒事件病原学检测,传统的分离培养与荧光PCR检测方法的方法比较。方法:本实验采用国家标准方法对食物中毒标本进行金黄色葡萄球菌分离培养,并对食物中毒标本及分离的阳性菌株作肠毒素定性测定;用荧光PCR(FQ-PCR)方法对可疑食品及患者呕吐物标本进行金黄色葡萄球菌快速检测。结果:用国标方法,9份呕吐物标本中7份分离出金黄色葡萄球菌,阳性率77.78%,荧光PCR快速法检测相同标本,9份呕吐物均呈阳性,阳性率100%,食品卤香干检出金黄色葡萄球菌,8个阳性菌株C型肠毒素检出率100%。结论:该中毒确诊为金黄色葡萄球菌C型肠毒素中毒,中毒食品为卤香干。荧光PCR检测法快速、灵敏,尤其适用于药后患者标本及已加热杀菌的可疑中毒食品的检测,作为初筛、辅助诊断手段,在食物中毒病原检测中值得广泛推广。

2014年长沙市禽类场所环境H9N2亚型禽流感病毒分子流行特征分析

目的了解2014年长沙市禽类场所环境中H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)血凝素(Hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)和非结构蛋白(ron-structural,NS)基因的分子进化特征,为人感染H9N2亚型AIV防控提供实验室科学证据支持。方法对2014年长沙市禽类场所中采集的501份环境标本(禽类饮水263份,污水221份,其他标本17份)利用real-time PCR方法进行A型、H5、H7和H9亚型流感病毒核酸检测,然后对单独H9阳性标本利用HA和NA基因通用引物进行RT-PCR扩增和核苷酸测序,病毒HA、NA及NS基因测序结果在线BLAST分析,利用Bioedit和Mega5软件进行氨基酸比对和进化树构建。结果从501份环境标本中检出A型AIV核酸阳性标本350份,H9亚型核酸阳性标本191份,占总标本数量的38.12%,H5亚型核酸阳性标本177份(35.33%),H7亚型核酸阳性11份(2.20%),H5和H9亚型混合核酸阳性标本68份(13.57%)。部分单独H9亚型核酸阳性标本经RT-PCR和核苷酸测序鉴定出阳性H9N2亚型病毒核酸标本23份,分子进化分析表明2014年长沙市禽类场所环境中的绝大部分H9N2亚型AIV HA、NA、NS基因来源于A/Chicken/Shanghai/F/98(F98)类似株病毒,属于新的S基因型,HA蛋白受体结合位点(Receptor binding site,RBS)第235位(对应H3流感第226位)氨基酸为Leu(L),表现为特异性结合人流感病毒受体特征,病毒HA、NA及NS蛋白关键分子位点表现为低致病性的分子特征。结论 2014年长沙市禽类场所环境中H9亚型AIV核酸阳性率最高,H9N2亚型AIV的HA、NA和NS基因表现为低致病性的分子特征,但具有容易感染人类的特征,需要进一步加强监测。

一起诺如病毒GⅡ.17型引起的急性胃肠炎病原学诊断及基因特征分析

目的对长沙市2014年12月某厂区暴发的一起急性胃肠炎疫情进行病原学诊断及对其致病原进一步的基因分型研究。方法共采集6例病人肛拭子标本和可疑水源标本4份,提取核酸后,诺如病毒GI/GII型real-time RT-PCR试剂盒检测;阳性标本普通RT-PCR扩增VP1基因片段,产物测序后BLAST比对确定其型别,并构建进化树分析其进化关系。结果 10份标本real-time RT-PCR扩增结果显示为诺如病毒GII型,VP1区片段RT-PCR扩增后产物测序,BLAST比对发现与2014年香港诺如病毒株GII/Hu/HKG/2014/GII.17/CUHK-NS-463同源性最高,达99%,证实为诺如病毒GII.17型;构建系统进化树分析显示本次疫情分离的毒株与日本、香港、台湾等亚洲地区的毒株亲缘关系更为接近,而与美国、法国等地区的毒株亲缘关系则较远。结论诺如病毒是引起此次急性胃肠炎疫情的病原体,且引起暴发的病毒株属于GII.17型。

2014年长沙市活禽市场污水中H5N1亚型禽流感病毒HA、NA及NS基因进化分析

目的分析2014年长沙市活禽市场污水中H5N1亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)血凝素(Hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)及非结构蛋白(Non-structural,NS)基因进化特征。方法从2014年长沙市活禽市场采集501份环境标本,利用Real-time PCR方法进行A型、H5、H7和H9亚型流感病毒核酸检测,并对单一H5阳性标本进行核苷酸测序,病毒HA、NA和NS基因测序结果进行在线BLAST分析,利用Mega5和Bioedit软件构建核苷酸进化树和氨基酸(Amino acids,aa)比对。结果从501份环境标本中检出A型H5亚型病毒阳性标本177份(检出率35.33%),其中8份标本经核苷酸测序鉴定为H5N1亚型病毒,进化分析表明大部分H5N1病毒HA基因位于2.3.2分支内,聚集形成一个新亚分支,NA及NS基因位于2.3.2.1b亚分支。HA蛋白受体结合位点aa为QSG,表现为禽流感病毒受体特征;NA蛋白未出现H275Y及N295Saa替换,对神经氨酸酶抑制剂敏感;HA、NA及NS蛋白关键分子位点表现为高致病性的分子特征。结论 2014年长沙市活禽市场污水中H5N1亚型禽流感病毒HA、NA和NS基因表现为高致病性的分子特征,但不具有对人易感的受体特征,需要进一步监测。

志贺菌和肠侵袭性大肠埃希菌LAMP检测方法的建立及应用

目的建立针对侵袭性质粒抗原H(ipaH)编码基因的环介导等温扩增(LAMP)方法。方法利用LAMP方法对4株志贺菌、1株肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)和20株其他肠道菌DNA在65℃恒温扩增30min或60min后观察结果。结果 4株志贺菌和EIEC可通过肉眼和电泳观察到阳性结果,而其他肠道菌为阴性。LAMP检测特异性与聚合酶链反应(PCR)相似,但敏感性比PCR高10倍。LAMP、PCR检出下限分别为1.2×102、1.2×103CFU/mL。LAMP和分离培养法对70例食物中毒患者和健康者肛拭子标本检测结果符合率为100%。结论 LAMP由于具有快速和无需特殊仪器的优点,可广泛用于肛拭子标本志贺菌和EIEC的检测。

猪链球菌长沙分离株的鉴定与16S rRNA系统进化分析

目的对2株猪链球菌(Streptococcus suis,SS)长沙分离株进行分离培养和分子鉴定,并对其16SrRNA基因进行测序,阐明其系统进化关系。方法利用分离培养法对2株SS进行分离鉴定,同时对分离株16SrRNA基因进行PCR扩增和核苷酸序列测定,将测序结果提交GenBank,通过在线Blast同源性分析进行菌株鉴定,并与传统培养鉴定方法进行比较,利用Mega4.0软件构建SS长沙分离株系统进化树。结果成功扩增出2株菌的目的片段,通过测序后Blast同源性分析,证实2株菌株均为SS,且与传统鉴定方法结果一致,进化树显示长沙2株SS和国内外2型位于同一进化分支上,同四川的05ZYH33参考株亲缘关系最近。结论通过16SrRNA基因可以准确快速鉴定SS,可应用于应急检测,长沙2株猪链球菌属于SS2型,与其他SS2分离株16SrRNA基因同源性高,未发生变异。

长沙市流行性感冒病毒病原学检测结果分析

目的 对长沙市2004～2006年4月流行性感冒病毒（简称流感）的病原学监测结果进行分析。方法 采集流感样病例（ILI）的鼻咽拭子标本用狗肾细胞（MDCK）进行病毒分离培养，采用血凝（HA）及血凝抑制（HI）方法进行流感病毒初筛及分型鉴定。结果 二年共监测ILI鼻咽拭子标本470份，分离到流感病毒64株，阳性分离率为13．62％，经分型鉴定A（H3N2）亚型21株，A（H1N1）亚型22株，B型21株，7株因HA〈1：8或病毒丢失未能分型；疑似流感疫情ILI鼻咽拭子标本178份，分离到流感病毒44株，阳性分离率为24．72％，经分型鉴定A（H3N2）亚型10株，A（H1N1）亚型13株，B型21株。结论 长沙市流感流行株为A（H1N1）亚型，A（H3N2）亚型及B型，未发现流感变异株。

多重PCR快速检测3种致泻性大肠埃希菌方法的建立

目的利用多重聚合酶链反应(PCR)技术,建立一种可以同时快速检测肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)、肠出血性大肠埃希菌(EHEC)3种致泻性大肠埃希菌的多重PCR方法。方法根据EPEC的eae基因、EIEC的ipaH基因、EHEC的stx1基因筛选设计引物,建立多重PCR检测体系,并对PCR反应体系和条件进行优化。结果设计的3对PCR引物均能特异地扩增出相应的目的基因,该多重PCR体系能同时检测3种目的菌,特异度强。结论初步建立了一种能够同时快速检测3种致泻性大肠埃希菌的多重PCR检测方法,可用于食品安全及食物中毒事件的快速筛查。

快速检测单核细胞增生李斯特菌LAMP方法的建立

目的:建立一种检测单核细胞增生李斯特菌核酸的快速、特异的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermalamplification,LAMP)方法。方法:针对单核细胞增生李斯特菌的李斯特菌溶血素hlyA基因设计4条LAMP引物,在水浴箱内65℃保温约60 min,完成对单核细胞增生李斯特菌的扩增,扩增产物经肉眼、SYBR Green I染色和电泳鉴定。利用LAMP和PCR方法同时检测1株单核细胞增生李斯特菌和10株非单核细胞增生李斯特菌(对照组)来验证LAMP方法的特异性。用LAMP和PCR方法分别检测一系列稀释后的单核细胞增生李斯特菌菌液,比较两者的敏感性。结果:经肉眼、加染料和电泳均能观察到1株单核细胞增生李斯特菌LAMP扩增阳性反应,10株非单核细胞增生李斯特菌没有出现LAMP扩增。LAMP敏感度比PCR高,LAMP检测单核细胞增生李斯特菌的检测下限为3 cfu/ml,PCR检测下限>300 cfu/ml。LAMP检测速度比PCR更快,只需要60 min。结论:建立了一种检测单核细胞增生李斯特菌的快速、特异的LAMP方法。

长沙市首例人感染H9N2禽流感病毒的HA基因序列特征分析

目的对长沙市首例人源H9N2禽流感病毒进行病毒分离与HA基因特征序列分析。方法用细胞培养法在可疑病例标本中分离H9N2禽流感病毒毒株,RT-PCR方法扩增禽流感病毒HA基因全长并测序,对所得结果进行氨基酸同源性与进化树分析。结果分离的毒株命名为A/Hunan/44558/2015,GenBank登录号为KX595338。毒株存在2处新发突变位点,HAT197D、HAD483N,第313位出现与湖南省人源H9N2毒株A/Lengshuitan/11197/2013相同的糖基化位点NCS。与A/Wild Chicken/Shanghai/C1/2014和A/Environment/Hunan/28028/2014的同源性分别为97.9%和97.6%。进化树分析分离的毒株处于Y280分支。结论发现病毒2处新的基因突变位点,与2014年湖南省环境源毒株同源性较高,存在基因交换重组,从分子水平揭示病毒HA基因的进化趋势。

液化集菌法检查痰中结核分枝杆菌的应用评价

目的探讨使用糜蛋白酶"液化集菌"检查痰中结核分枝杆菌的应用价值。方法对56例拟诊肺结核病例的161份痰标本直接涂片和"液化集菌"后的沉渣滴冷冻玻片后分别进行ZN和金铵"O"染色,并将阅片结果进行统计分析。结果 "液化集菌"后取用沉渣滴片ZN染色的阳性率高于直接涂片ZN染色;"液化集菌"后取用沉渣滴片金铵"O"染色LED显微镜检查阳性率明显高于沉渣滴片ZN染色普通光学显微镜检查,χ2值为105.551和104.593,P=0.000。结论 "液化集菌"处理痰标本可以提高痰涂片检查结核分枝杆菌的敏感性,应用金铵"O"染色结合LED显微镜检查进一步扩大了这种优势。

长沙市2012～2013年麻疹/风疹实验室检测质量控制分析

目的：了解长沙地区麻疹/风疹网络实验室监测能力及运行状况，探讨实验室监测中的工作质量。方法对2012∽2013年长沙市麻疹/风疹网络实验室的各项监测指标进行分析。结果2012∽2013年长沙市麻疹/风疹网络实验室对9个区县级疾病预防控制中心（CDC）麻疹实验室进行血清复核，共检测391份样本，2012年的麻疹/风疹 IgM 抗体检测符合率为98％∽100％，2013年的血清样本麻疹/风疹 IgM 抗体检测符合率均达到100％。结论长沙市麻疹/风疹网络实验室运行情况良好，且各区县级麻疹/风疹实验室2013年较2012年的检测质量和能力大幅提升，在麻疹控制和消除工作中起到了关键作用。

快速检测人新甲型H1N1、季节性和乙型流感病毒多重PCR方法的建立

目的建立一种可以同时检测人类新甲型H1N1、季节性H1N1和H3N2亚型流感病毒及乙型流感病毒的多重PCR方法。方法根据以上4种流感病毒的特异性基因设计4对引物,建立可同时扩增出4个流感病毒特异性片段的多重PCR的方法。用人的GAPDH基因作为内参判断标本来源和实施质量控制的依据。并进行敏感性、特异性和盲样检测评价实验。结果该方法可同时扩增出流感病毒亚型的HA基因片段长度分别为106 bp(新甲型H1N1)、135 bp(季节性H1N1)、118 bp(季节性H3N2)、170 bp(乙型流感病毒)。该实验检测新甲型H1N1(A/colifornia/07/2009)的敏感性为102copies/反应。特异性实验结果显示每对引物只检测对应的病毒,32份盲样检测结果特异性好。结论该多重PCR方法可同时检测新甲型H1N1及季节性流感病毒,敏感性、特异性强,可用于人类流感病毒的鉴别分型检测。

学校图书室期刊的管理

学校图书室期刊的管理文／欧新华期刊是重要的信息载体，在学校图书室拥有众多的读者，对于搞好学校管理和教育教学工作具有不可低估的作用。学校图书室如何加强对期刊的管理呢？从我的工作体会来看，要着重抓好四个方面。一、合理订刊，并保证期刊的齐全。对期刊不能随意...

犬肾细胞培养流感病毒条件的优化

目的对影响流感病毒细胞分离培养的因素进行优化,得到细胞分离培养流感病毒的最佳方案。方法将4种型别流感毒株接种至犬肾上皮细胞(MDCK),以不同接种量、吸附时间、培养时间以及TPCK胰蛋白酶浓度进行病毒分离培养,以流感病毒红细胞凝集实验的血凝滴度作为指标对流感分离培养结果进行评价分析。结果甲型H1N1流感病毒、季节性流感病毒H3N2、乙型Victoria系流感病毒、乙型Yamagata系流感病毒在培养过程中的最适条件分别为:接种量为200、200、250、300μL/孔,吸附时间为1.5、1.5、2.0、2.0 h,TPCK胰酶浓度为1.0、2.0、2.0、1.5 mg/mL,培养时间为96、72、120、120 h。结论成功对4种亚型流感病毒在MDCK细胞中的培养条件进行了优化,在培养流感病毒时应按照不同型别选取不同的培养条件。