基于雨课堂和线上会议的PBL教学法在免疫学教学中的应用

免疫学是医学基础课程的一部分,是医学院学生必修的重要课程,具有严谨的逻辑性和抽象的内容,教学难度比较大。以往免疫学的教学模式很多以教师为中心,以“注入式、满堂灌、教师讲、学生听”为主,很难充分调动学生的学习主动性,使得许多学生对该课程的学习望而生畏,兴趣全无。随着互联网的发展和技术的进步,网络学习已经成为一种普遍和便捷的学习方式,如何对学生开展线上智慧教学,提高学生学习自主性,保证学习效果,是本课题组目前亟待解决的问题。近年来随着问题导向学习(problem-based learning,PBL)教学法的引入,许多免疫学专业教师也进行了相关的教改研究授课教师借雨课堂和腾讯会议构建的智慧环境,使得PBL教学法能更灵活的运用。文章就基于雨课堂和腾讯会议的PBL教学法在免疫学课程中的应用进行系统性评价,探究其优势和局限性,深入探索该教学模式对于免疫学教学的意义。

应用全外显子组测序技术筛查罕见石骨症致病基因

目的筛查石骨症患者的致病基因,为疾病的基因诊断及预后提供参考。方法收集石骨症患者临床资料及外周血标本,提取DNA,构建全外显子测序文库,进行高通量测序并结合生物信息学技术筛查石骨症致病基因。结果对2例石骨症患者的全外显子进行了分析,平均测序深度分别为169.38X、231.06X,其中患者1携带罕见突变TCIRG1(c.1305+2T>C)、TCIRG1(c.2008C>T)和CLCN7(c.1116C>T);患者2携带罕见突变CLCN7(c.857G>A),生物信息学分析表明患者携带的罕见突变均对基因产物的结构和功能具有不同程度的影响。结论全外显子测序可一次性筛查已知石骨症致病突变,是石骨症致病突变筛查的有效工具,2例石骨症患者的临床病征可能与患者携带的TCIRG1和CLCN7突变密切相关。

罕见性反转综合征三例微阵列基因组杂交检测结果分析

目的探讨微阵列基因组杂交检测在性反转综合征诊断中的价值及临床意义。方法收集2010—2015年来我院中心实验室进行遗传咨询患者的临床资料与外周血标本,采用G显带技术分析患者染色体核型,并对确诊为性反转综合征的患者进行微阵列基因组杂交检测,分析患者基因组拷贝数变异(copy number variations,CNVs)变化特点。结果同期在本实验室行遗传咨询者共9946例,其中3例(0.03%)诊断为性反转综合征。其中G显带染色体核型分析确诊46,XX男性性反转综合征2例,46,XY女性性反转综合征1例。微阵列基因组杂交检测发现3例均存在亚显微CNVs异常变化,其中1例46,XX男性性反转综合征患者性染色体Yp11.31存在扩增(SRY阳性);另2例均未检测到SRY基因(SRY阴性)。结论桂林地区遗传咨询人群中性反转综合征患者相对罕见,微阵列基因组杂交技术为CNVs检测提供了一种高效的方法,为性反转综合征病因学筛查及分类提供了新的途径。

人类遗传疾病中常见变异和罕见变异的研究策略

广义遗传病可以理解为一切由遗传物质改变所致的疾病,有单基因疾病（monogenic disease/mendelian disease）其中包括常染色体显性和隐性遗传、X连锁显性和隐性遗传、Y连锁和线粒体病,以及多基因疾病（complex disease）和体细胞遗传病等[1]。研究疾病的遗传因素是一个相对复杂、困难的问题,

microRNA在肾脏疾病和生理中的研究进展

慢性肾脏疾病(CKD)与主要的非传染性疾病(如糖尿病和高血压)密切相关。微RNA(miRNA)是一类内源性有调控作用的非编码RNA,它们在肾脏发育、平衡和疾病中扮演重要角色。特别是在各种CKD的发展中,miRNA的表达与肾小管间质硬化和终末期肾小球病变发生相关。miRNA在基因中具有调控作用,其可能成为肾病的一种新的诊断标志物和治疗靶点。根据现有证据,miRNA可能与糖尿病肾病、IgA肾病、狼疮性肾炎、多囊肾病和移植排斥有关。

先天性疾病研究及产前诊断中Array CGH的应用

染色体微缺失、重复、扩增和非整倍体等基因组DNA失衡是导致胎儿发育迟缓、畸形、死胎、流产和其他先天性疾病的内在原因。微阵列-比较基因组杂交技术(Array CGH)利用基因芯片取代了传统比较基因组杂交技术的正常中期染色体作为杂交靶标,与分别采用不同荧光标记的待测DNA和参照DNA杂交,通过比较两种荧光强度的比率,检测出染色体基因拷贝数变化。Array CGH已成为一个重要的细胞遗传学研究工具,用于产前诊断和先天性疾病诊断染色体亚显微结构异常。

荧光原位杂交法与免疫组织化学法检测乳腺癌HER-2基因扩增及蛋白表达的对比研究

目的比较桂林市荧光原位杂交法(FISH)和免疫组织化学法(IHC)检测乳腺癌组织中人表皮生长因子受体(HER-2)基因扩增及其蛋白表达情况的一致性,探讨FISH与IHC检测乳腺癌HER-2基因状态的临床意义。方法应用IHC和FISH对50例乳腺癌患者HER-2蛋白表达、基因扩增情况及17号染色体倍体性进行检测,分析IHC与FISH检测HER-2基因状态的差异以及HER-2蛋白状态与17号染色体倍体性的相关性。结果FISH与IHC结果总的符合率为82.0%,两者之间存在较好的一致性(kappa=0.640),FISH检测IHC结果为3+、2+和0/1+者的符合率分别为92.9%、70.0%和80.8%;IHC3+及2+者出现17号染色体多体性的几率比IHC0/1+者高(P<0.05)。结论FISH可以准确和稳定地检测乳腺癌组织中HER-2的基因状态及17号染色体倍体性;FISH检测IHC3+者符合率较高,FISH与IHC的差异主要在于IHC2+和IHC0/+组,IHC仅作为检测HER-2基因状态的初筛方法,而IHC结果为2+或0/1+者的HER-2基因状态必须应用FISH进一步确定。

血清与尿液标本巨细胞病毒DNA联合检测在肾移植受者中的应用价值

目的探讨血清和尿液标本中巨细胞病毒(CMV)DNA的检测对肾移植受者的临床意义。方法采用实时荧光定量PCR检测174例临床肾移植受者血清与尿液中巨细胞病毒DNA载量并对其进行统计分析。结果 174例受者中尿液标本CMV-DNA阳性率(16.1%)明显高于血清(5.2%),差异具有统计学意义(P<0.05)。通过对实验结果进行比较分析发现,尿液标本灵敏度明显高于血清标本。结论临床选择CMV的送检样本类型对提高其检出率具有重要意义,同时检测能较大地提高肾移植受者CMV的检出率。

“问题·主题·课题”教学模式在研究生培养中的应用

如何提高硕士研究生培养质量一直是研究生教育改革与创新的重要课题。“问题·主题·课题”教学模式是一种由“问题导引”“主题教学”与“课题研究”相结合的立体联动式教学方法,是植根于研究生已有经验及能力提出的问题作为新知识学习起点,以主题引领教学内容,以课题研究作为切入点的问题解决教学模式。在教学实践中,该模式以学生为教学主体,教师为主导,通过查阅文献提出问题、选择与确立主题以及开展课题的形式,突出以问题为导向,模拟和还原临床检验诊断相关医学知识产生的过程,以最终达到特定具体医学知识是什么的高级认识。本文简述基于“问题·主题·课题”教学模式在临床检验诊断学硕士研究生培养中的应用和教学实践经验,以期为教学方法和教学理念创新提供思路。

蜂蜇伤战士血清相关蛋白分析

目的分析蜂蜇伤战士与正常人血清中蛋白质图谱之间表达差异。方法分别收集来源于解放军181医院于2008年10月—2010年2月收集的11例蜂蜇伤国防战士标本和8例健康人的血清标本进行双向凝胶电泳(2-DE)检测。通过基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析鉴定蜂蜇伤患者的血清蛋白质中存在显著差异的蛋白质点。结果在蜂蜇伤战士的血清中存在5个新增蛋白质点,3个蛋白点上调,7个蛋白点下调,其中包括KRT10角蛋白Ⅰ型、KRT1角蛋白Ⅱ型、触珠蛋白相关蛋白、触珠蛋白HP、HPR蛋白、α2-巨球蛋白、β血影蛋白brain1。结论采用固相pH梯度2-DE分离鉴定血清蛋质组能够获得很好的实验重复性。蜂蜇伤患者与正常人血清存在差异表达蛋白,为进一步研究蜂蜇伤相关生物标记提供理论基础及指导。

军事行动所致多器官衰竭生物样本库的构建及意义

随着科学研究的深入,在科学研究中需要越来越多的样本,生物样本库的建设显得特别重要。通过文献综述调研及国内生物样本库的建立和管理方法学习,探讨军事行动所致多器官衰竭生物样本库的创建意义和管理。规范、科学地管理多器官衰竭生物样本,有利于合理有效地利用样本,防止样本浪费。军事行动所致的器官衰竭样本非常珍贵,建立起专门的生物样本库对这些珍贵的样本进行科学、合理、规范的管理尤为必要。

应用定量蛋白质组学技术对狼疮肾炎组织蛋白的鉴定和定量分析

目的应用定量蛋白质组学技术对狼疮肾炎（LN）V型肾组织中的“全组”蛋白进行鉴定和定量分析，获得LNV型的蛋白质组差异表达图谱。方法对LNV型肾组织及对照组进行相对和绝对定量的同位素（isobaric tags for relative and absolute quantitation, iTRAQ）标记和ESI-OJTOF质谱仪鉴定。结果共鉴定490个蛋白质，其中差异倍数1．0以上的蛋白数113个，差异倍数1．2以上的蛋白数58个，差异倍数1．5以上的蛋白数18个，表达上调和下调的蛋白分别为10个和8个。结论定量蛋白质组学技术可有效地用于组织蛋白鉴定和相对定量；采用该技术获得LNV型肾组织蛋白质组差异表达图谱；深入研究这些蛋白的分子机制将有助于进一步阐明LNV型的发病机制及发现的潜在标志物，为LN的诊断和治疗提供新途径。

桂林地区女性生殖道支原体及衣原体感染情况分析

目的了解桂林地区沙眼衣原体(CT)和解脲支原体(Uu)感染情况,探讨女性不孕、妇科炎症与CT、Uu感染之间的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应法对3 232例不孕症女性、833例妇科炎症女性及895例参与健康体检者的生殖道分泌物进行检测,分析3组间CT、Uu感染率的差异。结果不孕症患者Uu阳性率59.6%,CT阳性率3.6%,明显高于同期体检健康者阳性率;妇科炎症患者Uu阳性率70.7%,CT阳性率5.9%,略高于不孕症患者,明显高于参与健康体检者阳性率,差异有统计学意义(P<0.05)。结论妇科炎症患者是生殖道感染支原体和衣原体的高发人群,不孕症的发生可能与生殖道支原体和(或)衣原体感染密切相关。

非编码RNA相关重大疾病发病机制和生物标志物筛选的研究进展

人类重大疾病因其复杂性给诊断和治疗带来巨大难题,而且一些疾病属于慢性疾病,长期治疗无疑会加重患者负担。非编码RNA是指不编码蛋白质,但是参与基因调控的RNA分子,其在基因转录、基因转录后以及翻译水平发挥重要的调控作用。近年来,研究发现,非编码RNA在相关重大疾病中有抑制或促进的作用,其异常表达与许多疾病相关。重大疾病相关非编码RNA机制的探究以及生物标志物的发现给复杂病理研究带来希望。该文就非编码RNA中的微RNA(miRNA)和长链非编码RNA(lncRNA)参与不同发病机制,以及疾病的非编码RNA生物标志物相关研究进行综述,并对其今后研究方向进行展望。

99例异常染色体核型分析

为了探讨外周血染色体和羊水染色体核型异常与疾病的关系并进行相关临床分析,收集2016年6—12月到中国人民解放军第181医院就诊的疑似有染色体病的患者1 868例,以及在深圳市人民医院就诊并自愿抽取羊水进行产前诊断的孕妇541名,通过常规方法制备染色体标本,进行染色体G显带核型分析。结果:共发现特别异常外周血染色体核型15例;胎儿染色体核型异常84例,阳性率为15.52%。这99例异常染色体核型表明染色体检查可以及时发现相关的染色体病,可以更加明确其遗传学诊断,避免盲目治疗,有效减少染色体异常患儿的出生。

8757例地中海贫血基因诊断结果分析与研究

目的探讨桂林地区地中海贫血的携带率、基因型特征及构成比。方法所有研究对象均采用跨越断裂位点聚合酶链反应(Gap-PCR)以及反向斑点杂交法(reverse dot blot,RDB)技术对地中海贫血基因常见缺失型和点突变的基因型进行检查分析,观察地中海贫血基因型分布情况。结果 8757例送检样本中,地中海贫血基因阳性总检出率为20.3%(1782/8757),确诊的α地中海贫血为1189例,占66.7%(1189/1782),其中包括550例α地中海贫血1基因型,占46.2%(550/1189);550例α地中海贫血2基因型,占49.4%(588/1189);41例HbH病基因型,占3.4%(41/1189)。确诊的528例β地中海贫血,占30%(528/1782),在528例β地中海贫血患者中,其中β^(CD41-42)/β~N的基因型比例最高,为47.54%(251/528),其次为β^(CD17)/β~N占21.02%。在41例β复合α地中海贫血基因型中,以19例β复合α地中海贫血1(--^(SEA)/αα)基因型检出率最高,占46.43%(19/41),并且检出β双重杂合子β^(IVSⅡ-654)/β^(EM)复合-^(SEA)/-α^(3.7)、β^(CD41-42)/β^(IVS-Ⅱ-654)复合-α^(3.7)/αα各1例,所占比例均为2.44%(1/41)。结论研究桂林地区地中海贫血的基因分型特点对于本地区开展遗传咨询和产前诊断提供参考数据。

环状RNA在孕妇18-三体综合征的鉴定与分析

目的环状RNA(circular RNA,circRNA)是一种可以调节基因的共价闭合非编码RNA,主要在真核生物中表达。有证据表明,circRNA具有组织细胞特异性表达,并与之生理发育和各种疾病相关。18-三体综合征(18-trisomy syndrome)的侵入性产前筛查对胎儿健康和母亲造成一定的健康风险,因此,创建新的无创产前筛查,寻找18-三体综合征产前诊断的标志物十分重要。方法本研究通过母血进行全基因组测序,选择性分析18-三体综合征孕妇血清中circRNA差异性表达。结果共有13278个circRNA差异性表达,包括5007个上调,8271个下调。结论研究发现hsa_circ_0001649在18-三体综合征和正常人对比表达差异显著,可能成为18-三体综合征潜在的产前诊断的标志物。

基于CRISPR/Cas9技术构建人CLCN7基因编辑载体

目的为修复石骨症致病基因(CLCN7)进行前期探索,采用CRISPR/Cas9技术构建CLCN7基因编辑表达载体。方法根据sgRNA设计原则,在CLCN7外显子区设计一对sgRNA,合成四条单链DNA寡核苷酸,退火后连接于CRISPR/Cas9质粒的BspQ I酶切位点处,然后转染感受态大肠杆菌DH5α,并通过氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,扩大培养。结果最后经过PCR和Sanger测序鉴定获得了两个基因编辑表达载体CLCN7-sg1RNA-CRISPR-Cas9和CLCN7-sg2RNACRISPR-Cas9。结论基因编辑载体的成功构建为CLCN7突变修复提供了工作基础。

PBL教学法联合腾讯会议和雨课堂在医学免疫学教学中的应用

医学免疫学是医学基础学科中具有高理论、高技术、多边缘、多交叉的特点。其逻辑性强、内容抽象,教学难度比较大。而传统教学是以教师为中心,教师在课堂上处于绝对的支配地位,以权威者身份出现,学生往往局限在课堂、书本掌握知识,是知识的被动接受者。很难充分调动学生的学习主动性,使得许多学生对该课程的学习望而生畏,兴趣全无。如何实现学生自主学习能力的提高,创造性与开发性思维的培养,尊重学生成长规律,突出学生个性发展是本课题组目前亟待解决的问提。近年来随着PBL(problem-based learning)教学法的大量普及,以及雨课堂与腾讯会议融合运用的独特优势,使得PBL教学法能更灵活的运用。本文就基于雨课堂和腾讯会议的PBL教学法在医学免疫学课程中的应用进行全面系统的评价,探究其优势和局限性,深入探索该教学模式对于医学免疫学教学的意义。

智力障碍小家系中致病基因的研究

目的研究一个智力发育障碍家系中的致病基因突变。方法染色体核型G显带方法分析先证者染色体核型,用全基因组外显子测序的方法探究致病基因,并在先证者家系中用Sanger测序法进行验证。结果 G显带核型分析未显示先证者染色体核型的数目和结构异常。全基因组外显子测序的方法共从先证者外显子基因中鉴别出1 455个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)和187个indels,结合家系信息筛选出X染色体上ARHGAP4基因突变与智力障碍表型相关,Sanger测序法验证结果一致,符合孟德尔家系遗传。结论 X染色体上ARHGAP4的C2822T突变位点可能与家系中的智力障碍疾病表型相关。