长链非编码RNA PTENP1在膀胱癌发生发展中的分子机制

目的探讨长链非编码RNA PTENP1在膀胱癌发生发展中的分子机制。方法通过逆转录实时定量PCR(q RT-PCR)分别检测PTENP1,PTEN,miR-17在膀胱癌中的基础表达并关联分析。利用Western blot检测膀胱癌细胞系T24与5637中超表达PTENP1后PTEN的表达变化。通过荧光素酶报告试验验证miR-17对PTENP1及PTEN的靶向作用。最后通过在膀胱癌细胞系T24和5637中共表达miR-17和PTENP1,建立稳定共表达细胞系进行增殖和迁移实验,探索长链非编码RNA PTENP1在膀胱癌发生发展中的分子机制。结果 miR-17在膀胱癌中普遍呈现高表达趋势,PTENP1在膀胱癌中呈现普遍低表达趋势(P<0.05)。与此同时miR-17和PTENP1的基础表达为负相关,PTENP1与PTEN的基础表达为正相关。WB实验发现于膀胱癌细胞系T24和5637中过表达PTENP1后可以在翻译水平增加PTEN的表达,荧光素酶报道实验验证了miR-17可同时靶向PTENP1及PTEN,在膀胱癌中miR-17具有促癌功能,同时在膀胱癌细胞中我们发现miR-17可以部分回复PTENP1的抑癌功能。结论长链非编码RNA PTENP1在膀胱癌中发挥抑癌功能的分子机制可能是PTENP1结合miR-17作为竞争性内源RNA竞争,从而降低miR-17对抑癌基因PTEN的表达抑制。

长链非编码RNA PTENP1在膀胱癌中的表达调控及功能研究

目的:探索长链非编码RNA PTENP1在膀胱癌中的表达调控及其对膀胱癌细胞的生长及转移的影响。方法:在膀胱癌细胞系及组织中应用逆转录实时定量PCR检测长链非编码RNA PTENP1的基础表达。通过甲基化抑制剂5-Aza.dc处理膀胱细胞系后甲基化特异性PCR分析PTENP1基因启动子的甲基化状态。应用逆转录实时定量PCR检测细胞转染效率,细胞增殖实验及迁移侵袭实验检测PTENP1对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果:膀胱癌细胞系SCABER、HT-1376、J82、EJ、T24及5637细胞以及膀胱癌临床标本里长链非编码RNA PTENP1与其对照组细胞系和临床标本相比表达减低。并通过在膀胱癌若干细胞系和一定量的临床标本中行MSP检测验证了PTENP1基因存在启动子的甲基化,5-Aza.dc处理细胞系后可以回复或者部分回复PTENP1的表达。增殖及转移实验提示PTENP1能够抑制膀胱癌细胞的增殖细胞迁移和侵袭。结论:膀胱癌中PTENP1基因DNA甲基化参与了PTENP1低表达的调节;PTENP1在膀胱癌起抑癌基因样作用,参与膀胱癌的发生发展。