嗜酸氧化亚铁硫杆菌ATCC23270周质蛋白的选择性提取及差异表达

通过考察萃取时间、高渗液与低渗液的摩尔比以及总的渗透液体积对细胞质苹果酸脱氢酶的比活性(相对于细胞蛋白质总量)的影响,建立选择性提取Acidithiobacillus ferrooxidans ATCC23270周质蛋白的渗透休克实验方法;结合透射电镜和双向电泳实验方法,分析渗透处理前后细胞的形态和不同生长期的细胞周质空间蛋白表达差异。研究结果表明,合适的渗透休克实验条件为:细胞质量为0.1g(湿重),渗透液的总体积为10mL,渗透液的作用时间为15min,高渗液与低渗液的摩尔比为1:1;在高渗环境下,细胞收缩,周质空间变小;在低渗液环境下,细胞周质空间膨胀,外膜被胀破,周质空间内蛋白释放出来;双向电泳显示周质蛋白总体上以小相对分子质量蛋白为主,在不同的生长时期内的周质蛋白表达存在差异。

Expression,purification and molecular modeling of iron-containing superoxide dismutase from Acidithiobacillus ferrooxidans

从 Acidithiobacillus ferrooxidans 的 superoxide dismutase (草皮) 可以在它的忍耐起一个重要作用到 bioleaching 的极其有毒、氧化的环境。这基因在 Escherichia 被克隆然后成功地表示了 coli。表示蛋白质被一步舞亲密关系层析最后净化到同质并且观察了根据 SDS 页和 MALDI-TOF-MS 更暗淡。金属内容决心和 recombinant 蛋白质的光系列结果证实蛋白质是包含铁的 superoxide dismutase。为蛋白质的分子的建模表明铁原子被 His26， His75， Asp158 和 His162 绑扎。

大肠杆菌外膜蛋白的分离及其双向电泳图谱的建立

本文利用温度诱导的两相分离萃取技术选择性分离未经机械破碎的大肠杆菌细胞外膜蛋白,研究Triton X-114的浓度及处理时间对提取外膜蛋白的影响。实验结果表明,Triton X-114的使用浓度和作用时间均显著影响外膜蛋白的提取效率。SDS-PAGE结果表明不同Triton X-114的使用浓度和作用时间只是影响了外膜蛋白的提取效率而对外膜蛋白提取的种类没有影响。实验发现8%的Triton X-114处理3小时为最佳分离条件,分离得到的样品可用于双向电泳分析。通过对比实验发现样品裂解液中包含低浓度的Tris是外膜蛋白双向电泳成功的关键因素,CHAPS与ASB-14或NP-40结合使用可显著提高外膜蛋白的溶解能力,缩短聚焦时间,从而优化了大肠杆菌外膜蛋白双向电泳技术体系,建立了其双向电泳图谱。