基于阻断膜金属蛋白酶TRABD2A的HIV储存库检测方法的建立

目的探究人源化膜金属蛋白酶——含有TRAB结构域的蛋白2A(TRABD2A)单克隆抗体对接受联合抗逆转录病毒疗法(cART)的人免疫缺陷病毒(HIV-1)感染者储存库细胞的作用效果,建立基于TRABD2A阻断抗体的全新HIV-1储存库检测方法。方法2021年5—12月于中国医科大学附属第一医院收集研究对象51例。其中健康者2名,接受cART的HIV-1感染者(cART组)41例,未接受cART的HIV-1感染者(no-cART组)8例。采用噬菌体展示库技术构建人源化TRABD2A单克隆抗体,分别处理HIV-1感染者、未接受cART的HIV-1感染者及健康对照者的外周血单个核细胞(PBMC)和CD4+T淋巴细胞,利用荧光素酶报告系统、单分子免疫阵列检测技术等方法检测细胞培养上清中病毒含量,同时使用流式细胞术、荧光实时定量聚合酶链式反应检测处理后细胞的活化和病毒基因表达情况,比较不同处理组之间病毒释放量和表面活化标志CD25、CD69、HLA-DR(人类白细胞DR抗原)表达量的差异。结果接受cART的HIV-1感染者的PBMC经人源化TRABD2A单克隆抗体处理后检测HIV-1产量,未处理组为0(0,440),使用负抗体所释放的病毒量为0(0,390),二者差异无统计学意义(P>0.05),而使用正抗体所释放的病毒量为1259(0,4269)和3142(1292,5060),与使用负抗体所释放的病毒量相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。利用健康对照者PBMC对感染者PBMC进行倍比稀释,经正抗体处理后病毒释放量等比例下降[未稀释、稀释5、25、125、625倍对应的HIV-1产量分别为4670(3339,7697)、1860(1509,4615)、1550(1150,2680)、602(255,1441)、2(0,37)]。且TRABD2A单抗处理后的细胞静息状态与未处理组差异无统计学意义(未处理组与正抗体-1处理组的CD25阳性细胞百分率分别为3.89±1.31、4.60±1.74,CD69阳性细胞百分率分别为2.50±1.27、2.18±0.51,HLA-DR阳性细胞百分率分别为7.66±3.78、8.79±3.42;P均>0.05),未处理与正抗体-1的病毒群抗原基因(Gag)表达量分别为1和0.82±0.55,差异无统计学意义(P>0.05)。结论人源化TRABD2A单克隆抗体能够有效阻断TRABD2A的蛋白活性,可在不改变细胞静息状态和全基因组转录水平的情况下,显著促进HIV-1感染者外周血中储存库细胞释放子代病毒,且通过此方式所引起的储存库病毒释放量与储存库细胞数量呈正相关。

一分钟体验

语文课上,老师跟我们做了一个游戏——一分钟体验。游戏要求是:双手放在桌面上,双脚平放,身体挺直,一分钟内保持全身不动。'三、二、一,计时开始.'老师一声令下,大家都按要求坐好,我的眼睛直直地盯着大屏幕上的倒计时。刚开始,我坐得笔直,可不一会儿就觉得无聊,禁不住想扭扭身体,但想到游戏要求,只好努力控制自己。我眼睛四下扫视,偷看同学们的表现。右前方的一个同学,把手肘直立在桌面上。

我爱桂花

我喜欢各种各样的花,比如冬天的梅花、春天的樱花、夏天的荷花,但最喜欢的是秋天的桂花。金秋时节,远远望去,桂花树像一把毛茸茸的大伞立在秋风里。笔直挺立的树干像伞柄,四面散开的枝丫像撑伞的支架,密密的树叶像伞布,还有若隐若现的花朵点缀在伞面上。我拾起树下的一片树叶,发现树叶的表面很光滑,边缘却有锯齿形的小刺。桂花是米黄色的,花朵小小的,有四片水滴形的花瓣。走近桂花树,立刻会闻到桂花散发出的迷人清香,感受到桂花身上一种独特的优雅气质。桂花树上有盛放的花朵,也有凋谢的。凋谢的花朵虽然变得橙黄,有些甚至已经干瘪了,