白细胞介素-34对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞CCL28表达的影响

目的:初步探讨白细胞介素-34(IL-34)对类风湿关节炎(RA)患者成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)CC趋化因子配体28(CCL28)表达的影响。方法:选取6例RA患者关节滑膜分离并培养FLS,分别用IL-34、IL-34受体拮抗剂/IL-34、信号通路抑制剂/IL-34刺激。采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测FLS CCL28 mRNA的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清中CCL28水平。两组间比较采用t检验。结果:与对照组相比,IL-34刺激后FLS分泌CCL28增多(P<0.05);加入IL-34受体拮抗剂后FLS分泌CCL28水平降低(P<0.05);细胞培养体系中加入核因子-κB(NF-κB)、丝裂原活化蛋白激酶38(p38MAPK)信号通路抑制剂后,CCL28表达明显降低(P<0.05)。结论:IL-34与其受体结合可能通过激活NF-κB和p38 MAPK信号通路促进RA FLS分泌CCL28,从而参与RA的发病过程。

成纤维样滑膜细胞通过IL-6下调类风湿关节炎患者外周血Treg

类风湿关节炎（ rheumatoid arthritis, RA）是以关节组织慢性炎症性病变为主的自身免疫性疾病,成纤维样滑膜细胞（ fibroblast-like synoviocytes, FLS）异常活化是RA发病的重要机制之一,通过释放大量炎症因子、募集其他炎性细胞等方式加重关节侵蚀破坏. 调节性T细胞（ regulatory T cell, Treg）是具有免疫负调节功能的T细胞亚群. 我们推测FLS在RA炎症环境中分泌的炎症因子可能会影响RA患者外周血Treg的比例,本研究旨在阐明RA-FLS对Treg细胞是否具有免疫调控作用及可能的作用途径.

瘦素通过白细胞介素-6调控类风湿关节炎患者外周血调节性T细胞的增殖

目的初步探讨瘦素对RA患者外周血调节性T细胞增殖的影响。方法分离培养6例RA患者PBMCs，分别用抗CD3（3 μg/ml）/抗CD28（2 μg/ml）、抗CD3（3 μg/ml）/抗CD28（2 μg/ml）加瘦素（100 ng/ml）、抗CD3（3 μg/ml）/抗CD28（2 μg/ml）以及瘦素（100 ng/ml）加IL-6R拮抗剂（0.5 μg/ml）刺激72 h。收集悬浮细胞，流式细胞术检测调节性T细胞百分率；ELISA检测细胞培养上清中IL-6、TGF-β水平。采用Wilcoxon秩和检验进行统计学分析。结果①与对照组比较，瘦素刺激72 h后调节性T细胞比例下降[13.6（11.6，14.8）%和9.8（7.0，10.0）%，Z=-2.201，P〈0.05]；IL-6、TGF-β水平均上升[548.9（508.6，608.4）ng/L和631.8（538.4，672.6）ng/L，Z=-1.992，P〈0.05；1175.0（1 045.4，1 373.1）ng/L和1 580.2（1 315.3，1 906.5）ng/L，Z=-2.201，P〈0.05]；②加入IL-6R拮抗剂后，瘦素刺激PBMCs分泌IL-6水平下降[631.8（538.4，672.6）ng/L和522.7（339.3，593.3）ng/L，Z=-2.201，P〈0.05]；调节性T细胞比例上升[9.8（7.0，10.0）%和12.3（9.7，13.8）%，Z=-1.997，P〈0.05]。结论瘦素可能通过上调IL-6，进而对外周血调节性T细胞的增殖起到负调控作用。

IL-34对类风湿关节炎滑膜间充质干细胞色素上皮衍生因子表达的作用研究

初步研究IL-34对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜间充质干细胞(synovial mesenchymal stem cell,SMSC)色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)表达的影响。选取6例RA患者,分离并培养其SMSC,加入PE标记的抗CD73、CD90、CD105抗体和APC标记的抗CD14、CD34、CD45抗体及同型对照,采用流式细胞术检测SMSC表型。而后加入IL-34(100ng/mL)刺激0h、6h、24h、48h以及72h、信号通路抑制剂(10μmol/L)刺激1h/IL-34(100ng/mL)刺激24h,通过ELISA检测SMSC培养上清中PEDF蛋白的表达,RT-PCR检测SMSC PEDF的转录水平。组间比较采用独立样本t检验。对培养细胞克隆进行鉴定,结果显示细胞表面阳性表达CD73、CD90、CD105,阴性表达CD14、CD34、CD45。PCR结果显示,与对照组相比,IL-34刺激6h的PEDF mRNA水平明显降低。同时ELISA表明,IL-34刺激24h、48h以及72h后的PEDF蛋白水平与对照组相比,也明显降低(P<0.05)。在细胞培养体系中加入NF-κB、p38MAPK信号通路抑制剂后,RA SMSC产生的PEDF水平明显升高(P<0.05)。以上结果显示,实验中分离纯化的RA SMSC高表达CD73、CD90、CD105,不表达CD14、CD34、CD45,符合SMSC表型特点。IL-34介导的抑制RA SMSC分泌PEDF可能通过激活p38 MAPK和NF-κB信号通路实现。