耳聋左慈丸上调SIRT1减轻老年性聋小鼠耳蜗螺旋神经节细胞损伤的作用机制研究

目的探讨耳聋左慈丸对老年性聋小鼠耳蜗螺旋神经节细胞损伤的保护作用及其机制。方法①将27只C57BL/6J小鼠随机分为3组,即对照组、老年性聋组和耳聋左慈丸组,每组9只。耳聋左慈丸组小鼠从3月龄开始给予含有中药的饲料喂养至9月龄,老年性聋组同时喂养普通饲料;对照组采用2月龄小鼠。听性脑干反应(ABR)法检测小鼠听阈值的变化;苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠耳蜗螺旋神经节细胞形态学变化;免疫荧光染色法观察小鼠耳蜗螺旋神经节细胞微管相关轻链蛋白3(LC3)、选择性自噬接头蛋白(p62)和沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白的表达;转移酶介导的三磷酸脱氧鸟苷-生物素刻痕末端标记(TUNEL)法检测小鼠耳蜗螺旋神经节细胞的凋亡情况。②体外实验采用C57BL/6J小鼠耳蜗基底膜离体培养模型,分为空白对照组、过氧化氢(H2O2)模型组(0.3 mmol·L^(-1))和耳聋左慈丸低、中、高剂量组(5μg·mL^(-1)、10μg·mL^(-1)和50μg·mL^(-1))。神经丝蛋白200(NF200)免疫荧光染色法观察耳蜗基底膜螺旋神经节细胞形态变化;Western blot法检测SIRT1、LC3-Ⅱ、p62、切割的半胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、半胱天蛋白酶-3(Caspase-3)的蛋白表达。结果①与对照组比较,老年性聋组小鼠(9月龄)听阈值显著升高(P<0.05),耳蜗底回螺旋神经节细胞数量显著下降(P<0.05),SIRT1蛋白表达明显下降(P<0.05),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和p62表达升高(P<0.05),TUNEL阳性细胞数表达增多(P<0.05)。耳聋左慈丸可明显降低老年性聋小鼠的听阈值(P<0.05),显著增加耳蜗底回螺旋神经节细胞的数量(P<0.05)。与老年性聋组比较,耳聋左慈丸组SIRT1蛋白表达显著增加(P<0.05),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和p62表达降低(P<0.05),TUNEL阳性细胞数显著减少(P<0.05)。②体外实验发现,与空白对照组干预措施比较,H2O2可致螺旋神经节细胞出现核碎裂或胞体皱缩,听神经纤维紊乱,SIRT1蛋白表达显著下降(P<0.05),LC3-Ⅱ和p62的蛋白表达及cleaved Caspase-3/Caspase-3比值上升(P<0.05)。与H2O2模型组干预措施比较,耳聋左慈丸可显著降低H2O2所致小鼠耳蜗基底膜螺旋神经节细胞的损伤与丢失,减少听神经纤维紊乱,耳聋左慈丸中、高剂量组SIRT1蛋白表达显著增加(P<0.05),LC3-Ⅱ、p62蛋白表达及cleaved Caspase-3/Caspase-3比值明显下调(P<0.05)。结论耳聋左慈丸可减轻老年性聋小鼠螺旋神经节细胞的退化,改善自噬,抑制凋亡,其机制可能与上调SIRT1蛋白表达有关。

抗氧化剂防治老年性聋的研究进展

衰老是一种普遍的生理现象,以生物体时间依赖的功能衰退为特征[1]。此过程常伴随着与年龄相关的听力损失,也称老年性聋。老年性聋是老年人中最常见的感觉障碍,调查显示,在65岁以上的人群中,老年性聋的发病率为25%~40%,大于75岁的老年人中,其发病率为48%~66%,而85岁以上的老年人发病率则超过80%[2]。老年性聋还会导致社交孤独、抑郁和认知能力障碍等疾病。据2016年的全球疾病负担(GBD)报告显示,听力丧失已成为致残年数(YLDs)的第三大原因,也是全球健康的一个重要问题,特别是在老年人口中[3]。