辣椒素对慢性脑低灌注大鼠认知行为受损及海马线粒体-内质网结构偶联表达的影响

目的:观察在辣椒素(capsaicin)作用下,慢性脑低灌注(CCH)状态大鼠认知行为的改变及海马CA1区线粒体-内质网结构偶联(MAMs)的表达变化,探讨2者在缺血致认知功能障碍中可能的作用。方法:将48只健康雄性SD大鼠随机分为假手术(sham)组、CCH组、辣椒素组和溶媒(solvent)组。通过永久性结扎双侧颈总动脉(BCCAO)建立大鼠CCH模型。术后第7天,capsaicin组腹腔内注射辣椒素2.5 mg/kg,每周2次,连用4周,溶媒组相同条件下给予等量溶媒。各组于术后4周应用Morris水迷宫实验、物体辨别实验和旷场实验检测认知相关行为学指标。应用透射电镜和免疫荧光双重标记检测大鼠海马CA1区线粒体-内质网结构偶联的变化,Western blot实验检测海马组织中线粒体融合蛋白2(Mfn2)的表达。结果:术后4周行为学实验结果显示,与假手术组相比,CCH大鼠的学习记忆功能受损;与溶媒组比较,capsaicin组大鼠的空间学习记忆功能明显改善。透射电镜及免疫荧光双重标记观察结果表明,与假手术组相比,CCH大鼠海马CA1区的MAMs疏松;与溶媒组比较,capsaicin组大鼠中线粒体-内质网之间关联增加(P<0.05)。Western blot结果表明,与假手术组相比,CCH组大鼠海马组织的Mfn2蛋白水平降低;与溶媒组相比,capsaicin组大鼠海马组织的Mfn2蛋白水平增高(P<0.05)。结论:慢性脑低灌注可致大鼠空间学习记忆能力明显受损,MAMs疏松。辣椒素可通过上调海马线粒体-内质网结构偶联的表达,从而改善CCH大鼠受损的认知功能。

慢性脑低灌注致大鼠肠黏膜损伤及claudin-3表达变化的研究

目的观察慢性脑低灌注(CCH)大鼠回肠黏膜形态学及紧密连接蛋白claudin-3表达变化,并探讨两者的相关性。方法将80只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)和慢性脑低灌注组(CCH组),采用永久性双侧颈总动脉结扎法建立CCH大鼠模型,Sham组只分离双侧颈总动脉而不结扎。两组分别于造模成功后1、4、12及24 w取回肠末段组织制成石蜡切片,伊红-苏木素(HE)染色,观察肠黏膜组织形态学变化;免疫荧光标记claudin-3检测其表达量的变化;对肠黏膜损伤程度与claudin-3表达量进行相关性分析。结果 CCH组较同时间Sham组回肠黏膜损伤明显(P <0.01);CCH组4 w、12 w及24 w与1 w比较损伤显著加重(P <0.01)。CCH组上皮细胞间claudin-3明显缺失(P <0.01),1 w时最显著,4、12、24 w后逐渐回升,但均较同时间Sham组显著减少。肠黏膜损伤程度与claudin-3表达水平呈负相关(P <0.05)。结论 CCH可致大鼠回肠黏膜持续性损伤及claudin-3表达减少,引发相关肠功能异常。

辣椒素对慢性脑低灌注大鼠认知障碍及海马TRPV1蛋白表达的影响

目的 探讨TRPV1激动剂辣椒素对慢性脑低灌注（chronic cerebral hypoperfusion, CCH）大鼠认知功能及海马TRPVI蛋白表达的影响.方法 将60只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组（SHAM组）、慢性脑低灌注组（CCH组）、生理盐水对照组（PC组）和辣椒素组（CAP组）,每组15只.采用永久性双侧颈总动脉结扎建立慢性脑低灌注大鼠模型,辣椒素组和生理盐水组在慢性脑低灌注模型基础上给予每周两次辣椒素和生理盐水腹腔注射,4周后通过旷场实验和Moms水迷宫实验观察大鼠探究行为及空间学习记忆能力,Western blot检测大鼠海马TRPV1的表达水平.结果 （1）旷场实验结果发现,与SHAM组[（22.60±4.60）次]比较,CCH组[（12.10±2.80）次]站立次数减少（P＜0.01）,CAP组[（19.30±4.16）次]相较于PC组[（12.50±2.68）次]站立次数增加（P＜0.01）.（2） Morris水迷宫实验结果发现,定位航行实验阶段,与SHAM组比较,CCH组与PC组逃避潜伏期时间增加（P＜0.05）,游泳总路程增加（P＜0.05）,CAP组相较于PC组逃避潜伏期时间缩短（P＜0.05）,游泳总路程减少（P＜0.05）;空间探索实验阶段,与SHAM组[（1.87±0.64）次]比较,CCH组[（0.75±0.89）次]与PC组[（1.00±0.93）次]穿越次数减少,穿越潜伏期增加（P＜0.01）,CAP组[（2.38±0.74）次]较PC组穿越次数增加,穿越潜伏期减少（P＜0.01）.（3）大鼠海马组织的Western blot实验结果显示,与SHAM组比较,CCH组的TRPV1表达水平下调（P＜0.05）;与PC组比较,CAP组的TRPV1表达水平上调（P＜0.05）.结论 辣椒素可有效改善慢性脑低灌注大鼠认知功能障碍,这可能与上词海马组织TRPV1蛋白的表达有关.

UPLC-Q-TOF-MS^(E)技术研究白头翁皂苷在正常和溃疡性结肠炎模型大鼠体内代谢

本研究采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱-全信息串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS^(E))联用技术结合UNIFI分析平台快速分析鉴定常春藤皂苷元3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(白头翁皂苷D)、齐墩果酸3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-[β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)]-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(白头翁皂苷B_(7))和常春藤皂苷元3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(白头翁皂苷BD)在正常和溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型大鼠血浆及结肠组织中的代谢产物。主要依据化合物精确分子量、保留时间、中性丢失以及文献报道数据等信息建立数据库和分析方法,然后通过与空白对照组比较,结合偏差和化合物裂解规律筛选获得最终数据。结果表明,白头翁皂苷D、B_(7)和BD在正常和UC模型大鼠血浆及结肠组织中主要发生脱糖、羟基化和脱羟基化、甲基化和脱甲基化、脱氢、脱羧、水解反应。通过本文研究,将阐明白头翁皂苷D、B_(7)和BD在大鼠体内的代谢转化,确定进入体内的原形成分及其代谢物,以及结肠损伤是否会对它们的体内代谢产生影响,以探索白头翁皂苷D、B_(7)和BD原形或代谢产物中可能的抗结肠炎有效成分。本实验获得江西科技师范大学动物伦理委员会批准(批准号:Y202227)。