miR-140—3p在人肺腺癌A549细胞顺铂化疗敏感性中的作用研究

目的 探讨miR-140-3p与人肺腺癌A549细胞顺铂药物敏感性的关系.方法 化学合成miR-140-3p mimics及inhibitor,脂质体2000介导其转染入人肺腺癌A549细胞,利用荧光定量PCR方法观察转染细胞中miR-140-3p表达水平的变化;噻唑蓝（MTT）法检测A549细胞对顺铂作用的敏感性.结果 转染miR-140-3p mimics/inhibitor可分别升高（约30%）或降低（约30%）人肺腺癌A549细胞中miR-140-3p表达;同时,与对照组相比,转染miR-140-3p inhibitor的人肺腺癌A549细胞对顺铂药物作用的敏感度显著增加,细胞增殖速率降低33%（P〈0.05）;而转染miR-140-3p mimics的A549细胞对顺铂药物作用的敏感度显著降低,细胞增殖速率升高32%（P〈0.05）.结论 miR-140-3p的表达水平与人肺腺癌A549细胞对顺铂药物的敏感度呈负相关,提示miR-140-3p可能在A549细胞顺铂耐药过程中发挥重要作用.

干旱胁迫下枣树叶片解剖学结构变化研究

利用梨枣嫁接苗,设置4个不同梯度干旱胁迫处理,46 d后,取植株相同部位的叶片进行解剖学结构的观察和比较分析,探讨干旱胁迫下枣树叶片的解剖学变化。结果表明,在不同程度的干旱胁迫下,枣树叶片的解剖结构表现出明显的差异,如叶片厚度、上下表皮细胞的大小、第一层栅栏组织细胞的密集度等抗旱性指标均呈现出规律性变化。

miR-141-3p靶向调控前列腺癌LNCaP细胞雄激素受体的表达

目的检测LNCa P细胞内miR-141-3p对雄激素受体(AR)基因靶向调控作用,明确AR是否为miR-141-3p的靶基因。方法将miR-141-3p mimics转染LNCa P细胞后,利用反转录PCR和Western blot法分别检测LNCa P细胞中AR的mRNA和蛋白表达。采用PCR方法扩增得到含有miR-141-3p结合位点的AR mRNA 3'非翻译区(3'UTR)片段,并插入到pmiR-report载体萤光素酶基因的3'下游区,并将所构建载体命名为pmiR-AR-3'UTR;萤光素酶报告基因检测试剂盒检测miR-141-3p对pmiR-AR-3'UTR靶向抑制效果。结果转染miR-141-3p mimics可降低LNCa P细胞内源AR的mRNA和蛋白水平;萤光素酶活性检测结果显示:与对照组相比,miR-141-3p可明显抑制pmiR-AR-3'UTR萤光素酶活性。结论 AR是miR-141-3p的靶基因。

抗AEG-1单链可变区抗体的原核表达及纯化

目的构建抗星形细胞上调基因1(AEG-1)单链可变区抗体(V23)的原核表达载体,并对表达蛋白进行纯化及免疫活性检测。方法应用Primer5软件设计针对抗AEG-1单链可变区抗体基因序列的引物,构建PRsetC/V23原核表达质粒,经限制性内切酶Pst1酶切以及DNA测序鉴定正确后,将原核表达质粒导入大肠杆菌BL21中,构建含V23基因的原核表达工程茵。经IPTG诱导后,用带His标签的磁珠纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳检测目的蛋白含量,Western blot及ELISA检测抗AEG-1单链可变区抗体的免疫活性。结果构建的原核表达质粒PRsetC/V23经单酶切和测序分析显示,构建的V23基因与设计序列100%一致。IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳显示在31×103处出现一条明显蛋白条带,Western blot检测在80×103处出现AEG-1特异反应条带,ELISA检测显示阳性结果。结论成功构建了PRsetC/V23原核表达质粒及V23原核表达工程茵,该工程茵可表达抗AEG-1单链可变区抗体蛋白,且该蛋白具有良好的免疫活性。

Notch 3沉默对人急性T淋巴细胞白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨Notch 3受体特异性沉默对急性T淋巴细胞白血病的影响。方法:运用survivin启动子介导的RNA干涉方法特异性地封闭急性T淋巴细胞白血病细胞SupT1中Notch 3基因的表达。结果:survivin启动子介导的RNA干涉系统能特异而高效封闭肿瘤细胞内源Notch 3基因的表达,Notch 3基因表达的下调能够使肿瘤细胞的增殖活性降低,凋亡明显增加。结论:Notch 3基因沉默可有效抑制白血病细胞的增殖,并促进其凋亡,为急性T淋巴细胞白血病相关基因功能研究及靶向性治疗探索了一种新策略。